几丁质酶3样蛋白1在胆囊癌中的作用机制

几丁质酶3样蛋白1在胆囊癌中的作用机制第一部分：CHI3L1蛋白在胆囊癌组织中的表达及其临床意义[目的]研究检测CHI3L1蛋白在胆囊癌组织中的表达,研究其与临床病理因素间的关系及其对胆囊癌预后的影响。[方法]应用免疫组织化学法检测65例胆囊癌组织标本及20例慢性胆囊炎胆囊粘膜组织标本中CHI3L1蛋白表达情况,结合临床资料进行分析,CHI3L1蛋白表达阳性组与阴性组生存分析用Kaplan-Meier法,组间分析用log-rank检验,CHI3L1蛋白在胆囊癌组织中的表达与临床病理因素的相关性采用卡方检验。[结果]CHI3L1在胆囊癌组织中高表达,胞浆内染色,阳性率为87.7%,CHI3L1蛋白在慢性胆囊炎胆囊粘膜上皮弱表达,胞浆染色,胞核未见染色,阳性率为11.1%。胆囊癌临床病理因素的关系分析显示,CHI3L1蛋白表达与肿瘤生长方式、T分期、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关,差异具有统计学意义(P<0.05)。生存分析表明胆囊癌中晚期患者中CHI3L1蛋白表达阳性者生存时间明显短于CHI3L1蛋白表达阴性者,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]CHI3L1在胆囊癌组织中存在较高的表达。CHI3L1的表达与胆囊癌分期及淋巴结转移有关。CHI3L1表达阳性的胆囊癌患者术后生存时间短于CHI3L1|阴性患者。第二部分：RNAi抑制CHI3L1表达对体外培养的胆囊癌细胞的影响第一节CHI3L1基因RNAi慢病毒载体的构建[目的]探讨siRNA-CHI3L1对人胆囊癌细胞株CHI3L1基因转录及蛋白表达的影响。[方法]通过慢病毒感染胆囊癌细胞GBC-SD,siRNA-CHI3L1沉默CHI3L1基因后,应用RT-PCR,Western-blot检测人胆囊癌细胞GBC-SD的CHI3L1mRNA及其蛋白的表达。[结果]siRNA-CHI3L1作用于人胆囊癌细胞株GBC-SD后,CHI3L1mRNA表达显著下调,明显抑带CHI3L1蛋白表达。[结论]靶向CHI3L1基因的RNAi’慢病毒载体构建成功第二节CHI3L1基因沉默对胆囊癌GBC-SD细胞株生物学特性的影响[目的]研究siRNA干扰沉默CHI3L1基因对人胆囊癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。[方法]胆囊癌细胞GBC-SD分为3组：GBC-SD、阴性对照组GBC-SD(siRNA-NC)及干扰组GBC-SD(siRNA-CHI3L1)。CCK-8法检测3组细胞增殖能力；[ranswell小室运动侵袭试验检测细胞迁移和侵袭能力；Elisa法检测转染前后细胞上清液中的MMP-9变化。[结果]转染前后3组细胞进行比较,GBC-SD(siRNA-CHI3L1)较GBC-SD增殖能力、细胞迁移能力、细胞侵袭能力下降(P<0.05)。Elisa检测上清液示GBC-SD(siRNA-CHI3L1)较GBC-SD相比,MMP-9分泌减少(p<0.05)。[结论]CHIL31蛋白可以促进胆囊癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,并促进胆囊癌细胞分泌MMP-9。siRNA干扰沉默CHI3L1基因后可明显抑制CHI3L1所致的这些作用。第三部分：CHI3L1基因在胆囊癌细胞GBC-SD信号转导通路中的作用[目的]研究胆囊癌细胞GBC-SDCHI3L1蛋白细胞信号通路的情况;[方法]胆囊癌细胞株GBC-SD、GBC-SD(siRNA-CHI3L1)及GBC-SD(siRNA-NC),提取细胞蛋白,Western-Blot法检测比较细胞中ERK1/ERK2及JNK的信号通路的激活情况；GBC-SD加入ERK信号通路阻断剂(U0126)观察对其迁移和侵袭能力的影响；RT-PCR检测3组细胞分泌MCP-1和IL-8情况；[结果]GBC-SD与GBC-SD(siRNA-NC)之间ERK1/ERK2及JNK磷酸化含量无明显差别,GBC-SD(siRNA-CHI3L1)ERK1/ERK2及JNK活化明显减少(P<0.05)；GBC-SD加入ERK通路阻断剂后,其迁移和侵袭能力受到明显抑制(P<0.05);GBC-SD(siRNA-CHI3L1)较GBC-SD与GBC-SD(siRNA-NC)组分泌MCP-1和IL-8均减少；[结论]CHI3L1蛋白可能通过激活胆