霍乱弧菌讲解

三、弧菌科及检验3形态鞭毛葡萄糖氧化/发酵试验氧化酶试验肠杆菌科杆菌周鞭毛或无发酵—弧菌科弧状、杆状单鞭毛发酵+非发酵革兰阴性菌杆状单、丛、周鞭毛或无氧化或不分解+注：不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌氧化酶试验为阴性学习要求：

掌握霍乱弧菌的主要生物学性状、检验方法与依据。

熟悉霍乱弧菌的分型。

了解副溶血性弧菌的主要生物学性状、鉴定要点。什么是弧菌科？

——包括一群氧化酶阳性、具有端极鞭毛、直或微弯的G-细菌。

弧菌科的共同特点：

1、G-、菌体微弯或直、端极鞭毛；

2、营养要求不高，生长多需2%~3%NaCl；

3、氧化酶（+）、O/F（F）弧菌科常见种类：◆弧菌属◆气单胞菌属（现属气单胞菌科）◆邻单胞菌属（类志贺邻单胞菌）试验弧菌属气单胞菌属邻单胞菌属O/129SRSTCBS生长+--鸟氨酸+/--+甘露醇+/-+-精氨酸+/-+/-+嗜盐性+/---第一节弧菌属代表菌种：霍乱弧菌副溶血性弧菌特点：氧化酶（+）、O/F（F）、O/129（S）、耐盐或嗜盐。

第一节弧菌属一、霍乱弧菌霍乱七次世界性大流行

第一次1817~1823持续7年

第二次1826~1837持续7年

第三次1846~1863持续18年

第四次1865~1875持续11年

第五次1883~1896持续14年

第六次1899~1923持续25年

第七次1961~至今

1992年

古典生物型ElTor型O139型第一节弧菌属一、霍乱弧菌抗原结构与分型O抗原有群、型特异性分类的依据H抗原共同抗原无分类作用两种抗原第一节弧菌属一、霍乱弧菌抗原结构与分型群特异性O抗原：霍乱弧菌分群的依据，可依此

O抗原将霍乱弧菌分为155个血

清群，可引起霍乱的有O1群、O139群；型特异性O抗原：霍乱弧菌分型的依据第一节弧菌属一、霍乱弧菌抗原结构与分型155个血清群按群特异性O抗原三个血清型稻叶型（AC）小川型（AB）彦岛型（ABC）

第一节弧菌属一、霍乱弧菌

根据O-1群霍乱弧菌的生物性状的差异，国际弧菌命名委员会将其分为两个生物型（表8-12）：

抗原结构与分型1古典生物型2ElTor生物型第一节弧菌属一、霍乱弧菌形态与染色

革兰阴性弧形或逗点状，人工培养后易呈杆状单鞭毛，运动活泼，呈“穿梭样”或“流星样”无芽孢，无荚膜在新鲜粪便中成“鱼群样”排列，有菌毛第一节弧菌属一、霍乱弧菌形态与染色第一节弧菌属一、霍乱弧菌形态与染色电镜下观察第一节弧菌属一、霍乱弧菌培养特性兼性厌氧；营养要求不高耐碱，常用pH8.4～9.2碱性培养基耐盐（亦可在无盐培养基中生长）——培养条件第一节弧菌属一、霍乱弧菌培养特性——生长现象液体培养基——形成菌膜碱性平板——水滴样菌落TCBS平板——黄色菌落（蔗糖+）亚碲酸钾平板——灰褐色TCBS平板第一节弧菌属一、霍乱弧菌培养特性——生长现象含亚碲酸钾的琼脂平板第一节弧菌属一、霍乱弧菌培养特性——生长现象第一节弧菌属一、霍乱弧菌生化反应d:10%-89%阳性第一节弧菌属一、霍乱弧菌抵抗力

对热、干燥、日光、消毒剂敏感在水中存活时间长（约20d）

耐碱怕酸

ElTor型抵抗力较古典型强对庆大霉素耐受（选择性平板）多粘菌素B平板选择性培养ElTor型第一节弧菌属一、霍乱弧菌临床意义所致疾病：霍乱（法定甲类传染病）传染源：病人、带菌者传播途径：消化道途径（粪-口途径）易感者：人是唯一易感者第一节弧菌属一、霍乱弧菌临床意义1．致病物质

霍乱肠毒素：刺激肠上皮细胞分泌功能亢进，使肠液大量分泌，导致严重的腹泻、呕吐、尿闭、休克死亡。

鞭毛、菌毛、毒力因子：增强侵袭能力。2．免疫性病后可获牢固免疫（以SIgA为主）。O139与O1群无交叉免疫。第一节弧菌属一、霍乱弧菌临床意义流行期典型病例易诊断，但散发、轻症病例易与其他腹泻混淆第一节弧菌属一、霍乱弧菌微生物学检查1．标本采集

“米泔水”样便尸体肠内容物呕吐物或肛门拭子

（1）标本及时送检，就地接种。否则应放保存液或运送培养基内（碱性蛋白胨水或卡－布培养基）。（2）避免使用甘油盐水缓冲运送培养基（3）严密包装，专人送检第一节弧菌属一、霍乱弧菌微生物学检查2、检验方法（1）标本直接检查涂片染色标本直接涂片革兰染色（乙醇固定）：形态、染色性、鱼群状排列？动力观察压（悬）滴法→暗视野镜检：运动、运动方式？制动试验霍乱多价O诊断血清+“米泔水”样便→凝集成块、动力消失、制动试验（+）第一节弧菌属一、霍乱弧菌微生物学检查（2）分离培养

“米泔水”样便TCBS平板、庆大霉素平板

6~8h

带菌者标本碱性蛋白胨水注意：凡在流行季节有腹泻症状并有食用海鲜史或与海水、海鱼、海洋动物接触后发生伤口感染者均需进行TCBS培养以分离病原性弧菌第一节弧菌属一、霍乱弧菌微生物学检查

（3）初步鉴定可疑菌落与O1、O139抗血清进行玻凝，结合：菌落特征、菌体形态、运动等初步报告（多价）（单价）第一节弧菌属一、霍乱弧菌生化反应氧化酶、O/129敏感试验蔗糖、靛基质实验、粘丝试验、霍乱红试验、耐盐生长试验等血清学分类血清学分群：O1群？非O1群？血清学分型：小川型？稻叶型？彦岛型？O1群生物分型古典生物型？ElTor生物型？最后鉴定表8-10、13表8-11、13表8-12第一节弧菌属一、霍乱弧菌霍乱红试验：

霍乱弧菌

分解色氨酸

还原硝酸盐

吲哚

亚硝酸盐

亚硝酸吲哚

+浓硫酸

蔷薇红

粘丝试验：

诊断血清血清型或型O1+O139O1O139