2010-2011年深圳市诺如病毒的分子流行病学研究

2010-2011年深圳市诺如病毒的分子流行病学研究研究目的：诺如病毒是常见的腹泻病毒，广泛存在于环境中，是引起非细菌性急性肠胃炎的主要病原之一。诺如病毒流行范围广，传播方式多样，遗传信息变化大。本研究将2010-2011年收集的腹泻样品进行检测，并结合前期的资料，从诺如病毒的感染情况及分子流行病学两方面进行判断分析，为诺如病毒的检测及预防提供基础资料。研究方法：将2010-2011年收集的样品经过前处理后，提取核酸。一部分核酸用作Real-timePCR的模板，并结合调查的资料从时间（月份）、年龄和性别等方面对这两年诺如病毒的感染情况进行分析。另一部分采用RT-PCR的方法，分别用NVG1和NVGⅡ特异性引物对其进行扩增，从分子水平分析近两年诺如GⅠ和诺如GⅡ基因组的流行趋势，并着重分析GⅡ.4型的流行状况。研究结果:1、2010年收集的925份标本中，有506份标本来自男性，419份标本来自女性，三岁及三岁以下的有480份，所占比例达52%。经过Real-timePCR检测，共鉴定出阳性标本186份，阳性率为20.10%，其中有96份来自男性，90份标本来自女性，三岁及三岁以下儿童感染诺如病毒的阳性数为104份，所占比例高达56%（104/186）；2011年收集的983份样品中，有573份标本来自男性，410份标本来自女性，其中571名患者的年龄小于3岁，所占比例达58%。经Real-timePCR检测，共鉴定出阳性标本210份，阳性率为21.36%，其中有121份来自男性，89份来自女性，三岁及三岁以下儿童的阳性数为130份，所占比例高达62%（130/210）。2、经过RT-PCR扩增后，将有阳性条带的样品测序后进行比对分型。2010年共有85份样品成功测序，其中有78份样品属于NVGⅡ型，分属4种不同的基因型别，7份样品属于NVGⅠ型，分属3种不同的基因型别。在GⅡ基因组中比例最高的是GⅡ.4/2006b，共检测55份标本，占所有成功测序标本的64.5%（55/85），其次是GⅡ.4/2006variant，共检测出17份阳性样品，占所有型别比的20%；2011年共有60份样品成功测序，其中有55份属于NVGⅡ型，分属7种不同的基因型，5份属于NVG1型，分属4种不同的基因型。在所测的GⅡ基因组中，比例最高是GⅡ.4/2006b，共检测出28份，占所有基因型别比的46.7%。其次是GⅡ.4/2006bvariant,共有10份阳性标本，占所有基因型别比的16.7%。研究结论：1．从这两年的数据来看，诺如病毒引起的腹泻在任何时节均可发生。但检出率较高的月份主要集中在3-7月份。在所有的腹泻人群中，以三岁以下儿童居多。将这两年诺如病毒在性别感染上的差异，通过SPSS软件分析，得到2010年卡方检验的P值=0.344>0.05，2011年卡方检验的P值=0.824>0.05，这两年的检测结果均无统计学差异。2．无论2010年还是2011年，NVGⅡ基因组所占比例都非常高，分别达到91.7%(78/85)和91.6%(55/60)。相对于2010年，2011年诺如病毒的基因型别更趋向多元化。2010年，GⅡ.4/2010开始出现，在所有检测出的基因型别中，比值高达20.0%（17/85）。GⅡ.4/2006bvariant基因型是2011年新发现的基因亚型。2011年检测出的基因型别中，有10份属于GⅡ.4/2006bvar