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文档简介

岗位演练凝胶层析法脱盐1任务六人干扰素α2b的凝胶层析查阅资料，深入了解鸡蛋清组成及性质查阅设计《凝胶层析法脱盐操作记录》，在任务实施过程中同步填写。以鸡蛋蛋清为原材料，硫酸铵盐析法分级沉淀蛋白质，再用凝胶层析法去除制得蛋白质溶液中的盐，并检测凝胶层析脱盐的效果。设计实操设计（一）任务描述2（二）实训材料1.材料、试剂新鲜鸡蛋、葡聚糖凝胶G-25（SephadexG-25）、硫酸铵、氯化钡。2.仪器设备玻璃层析柱（上端为带有滤网和密封圈等的适配器，下端为带有滤网和密封圈等的柱头）、恒流泵、高速冷冻离心机、0.22μm滤膜与滤器、微量移液器（200～1000μL）、胶头滴管、具塞刻度试管、秒表、紫外分光光度计、电导率仪。3（三）实训操作0504030201试液配制样品的制备凝胶预处理层析柱的准备装柱配制1%氯化钡溶液等。新鲜蛋清2mL+2mL水。加硫酸铵至饱和度50%，离心，取上清。再补加至100%饱和度，离心，收集沉淀。溶解后以0.22μm滤膜除菌。倾去浸泡SephadexG-25的20%乙醇，加入去离子水洗涤，搅拌10min后倾去，反复5次检查、洗净层析柱，垂直固定，安装下端柱头。向柱子中加水，排尽底端气泡后维持一定高度。凝胶轻轻搅动成悬浮液，一次性不断向柱内注入凝胶4（三）实训操作1009080706平衡上样洗脱和收集凝胶再生检测和分析用约3倍床体积洗脱剂冲洗平衡柱床。将入口连接于样品溶液，泵入0.5mL蛋白样品。层析柱底端开始用具塞刻度试管收集流出液。以1mL/min，用2倍床体积洗脱液洗脱。底端用具塞刻度试管收集洗脱液，每管2mL，顺序编号。用2～3倍床体积冲洗（可用100mmol/L氢氧化钠）。将层析柱内溶液置换为20%乙醇保存。测定没管收集液的吸光度值A280和电导率值，分别绘制洗脱曲线，判断层析效果。5清场1111（四）任务分析与总结（1）凝胶层析与吸附型层析的操作过程主要区别有哪些，为什么？（2）本任务采用凝胶层析法脱盐，请问还有哪些技术可以用于脱盐，请比较这些技术方法。（3）

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