抗体催化臭氧生成及其动脉粥样硬化发中潜在作用cddbnyy

综述一种新的免疫效应功能：抗体催化水的氧化作综述一种新的免疫效应功能：抗体催化水的氧化作、在传统的免疫学概念中，抗体通过调理作用、中和作用、ADCC效及激活补体等机制杀灭或清除其特异识别的外来抗原。然而最近的研现抗体具有前所未知的新的效应功能，即所有的免疫球蛋白，不论其还是抗原特异性，都能催化水的氧化反应产生过氧化氢和臭氧，因此体的免疫防御和病理过程中扮演一种新的重要1．经典的理论认为，B淋巴细胞被激活后通过抗原受体基因的泌抗原特异性抗体。抗体通过其Fab片段的可变区在体内与相应抗原特微生物吸附和穿入细胞，从而阻止其感染相应的靶细胞；②抗体恒定区Fc片段可经过经典途径激活补体系统，产生多种效应功能，最主要起着溶菌作用；③抗体的Fc片段与体内效应细胞表面的Fc受体结也可表现各种作用。首先是增强中性粒细胞、巨噬细胞等吞噬细胞对微生物的吞噬功能，即为调理作用。其次可介导NK细胞等杀伤细胞对体包被的靶细胞的杀伤作用，即为ADCC效应(抗体依赖的细胞介导细胞毒作用)当然，抗体的这种效应机制也能引起机体一些病理性损伤。如IgE抗体的Fc段与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的受体结合后，可促使细胞合成和释放生物活性物质，引起I型超敏反应：抗体与应抗原结合后，在补体、吞噬细胞和NK细胞参与下，可引起以细胞或组织损伤为主的病理性免疫反应，即II型超敏反应：抗原抗体复合积于局部或全身毛细血管基底膜后或组织损伤为主的病理性免疫反应，即II型超敏反应：抗原抗体复合积于局部或全身毛细血管基底膜后，通过激活补体和在血小板、嗜碱嗜中性粒细胞参与作用下，可引起以充血水肿、局部坏死和中性粒细如果抗体的抗原结合位点以任意的方式产生，那么这种结合点就和酶性相似，因此抗体也可能具有酶的活性。直到1975年杂交瘤技术后，Pauling的这种假说陆续得到证实。自从1986年Tramontano及认识，认为抗体不仅具有识别、结合的能力，而且还具有更复杂的化性。因此人们提出疑问，抗体的这种催化作用是否就是抗体分子本身常的免疫功能中发挥作用的一种机制。长久以来，并没有充足的证据这种假说。最近Wentworth等【6】研究发现所有的抗体都能催化单线态(102)和水反应产生H202x102+H20—H202+(x一这种抗体介导的过程并不依赖于抗原的特异性及其来源，均能通102结合于抗体折叠部位内的结合位点而激发。进一步研究发现，H202生成与IgG的浓度在一定的范围内呈线性关系，H202能可身的生成，通过添加过氧化氢酶清除生成的H202，可以重新恢复化产生H202的速率研究显示抗体的这种催化作用具有显著的杀菌能力。最初时，只能观察到微弱的杀菌效应。但是随着抗原特异性或非特异性单的特性，因为不管抗体的来源及其抗原特异性，所有的抗体均表现出活性。通过形态学的观的特性，因为不管抗体的来源及其抗原特异性，所有的抗体均表现出活性。通过形态学的观察，这种氧化损伤明显引起细胞壁和浆膜对水性的增加，并且细胞壁上抗体与抗原结合的部位出现穿孔现象，这种如果H202是抗体催化水的氧化途径的最终产物，我们可以杀菌机制主要来自于H202的作用。而且研究也表明，通过过除H202也能完全阻止抗体的这种杀菌效应。但进一步的研究发现，通抗体催化水的氧化作用杀灭50％的细菌，其所产生的H202水平于对照组杀灭同样细菌所需要的H202的水平。由此推断抗体化过程中可能产生其它的化学物质与H202发生反应，产生更强的杀菌一种03的化学信号，因此导致了在抗体催化水的氧化途径中产生03的现。03本身具有高度的杀菌活性，而H202与03的联合对细菌的毒性用远远大于它们其中的任何一个[91。因此可以认为抗体催化水的氧化产生的H202与03在机体的免疫防御过程中具有重要意义，表明抗体除识别功能外，其本身也具有清除外来病原微生Wentworth等㈣推测，抗体催化102和水的反应可能通过双氢三氧物(H203)作为中间体而最后形成H202。抗体作为一种催化剂提供了种特殊的分子环境，促使H203向H202的转化。xu等川通过量子化学法研究并系统阐述了抗体催化水的氧化过程可能通过两种第一个途径①在抗体的存在下H20催化102与第二个水分子反应生成②H203形成二聚体重新排列生成{H02-③{H02一H03)重新排列生成{H202．03)，其进一步与水反应生④H204重新排列②H203形成二聚体重新排列生成{H02-③{H02一H03)重新排列生成{H202．03)，其进一步与水反应生④H204重新排列成(H02)2，进而生成H202+102或302第二个途径的区别主要在于第二步骤，此时H203与102直接反应生{H02一H03)，最后的步骤都是相同的。因此我们可以看出在抗体催化的氧化过程中，产生了H202与03白。在一定范围内，抗体催化的H202产生的速率呈线形关系球蛋白催化的H202的产生只是一个短暂的爆发。而且通过过氧化氢酶除产生的H202后，抗体能继续以相同的速率催化H202其它种类的蛋白中仅仅旺T细胞受体(a13TCR)表现出具有催化产生的能力。我们知道，a13TCR的免疫球蛋白折叠区的结构域与扮演着特殊作用。但又发现拥有这种结构基序不一定意味着该蛋白具化产生H202的能力，例如，B2．微球蛋白虽然属于免疫球蛋白超家族一员，但不能催化产生H202。Datta等㈣利用对接和分子动力学技术了各种蛋白的结构位点，发现抗体中两个key折叠结构域的交接在催化102和水反应形成H203和H202中具有关键作用，而这种结构仅在于抗体和TCR中，B2一微球蛋白则没有，因此较好地解释了抗体催化由于H202的生成速率在一定的氧气浓度中显示饱和状态范围内与抗体的浓度呈线形关系【6】，因此抗体对102的还原作用可能与体内的结合氧的位点有关。研究者排除了金属离子参与氧化还原的过因为通过EDTA的干扰发现抗体的催化活性并没有发生改变身氨基酸的构成有可能参与了氧化还原过程。因为通过EDTA的干扰发现抗体的催化活性并没有发生改变身氨基酸的构成有可能参与了氧化还原过程。已有研究发现芳香族氨如色氨酸(Trp)能被102通过电子传递而氧化【14】。Zhu等㈣根据抗体晶化实验研究证实，抗体催化水的氧化途径的反应点位于抗体的可变恒定区的交界面的区域，而且在轻链163位色氨酸残基(VrpTrp残基以及链内或链间的二硫键都具有还原102的潜能，说氨基酸的结构可能在催化102的还原中扮演着重要作用，但是这种电子传统的观点认为抗体在清除外来抗原中只起着辅助的作用这种催化水的氧化作用的发现无疑赋予了抗体在防御外来病原微生物一种新的功能。如果抗体介导水的氧化作用在机体内具有重要意义作为启动这种氧化过程的102在体内又如何产生的呢?目前认为体内。的来源主要是激活的吞噬细胞，包括单核细胞和嗜中性粒[17-18]。研究表明，PMNs呼吸爆发过程中产生的102占其总消耗氧19％㈣。而且这些吞噬细胞表面均具有IgG受体，能结合大量的IgG[20l这些结合的IgG除了介导调理作用外，也为抗体催化水的氧化作用提供可能性。Babior等【21]已报道包被IgG的PMNs产生了臭氧的从而为吞噬细胞参与这种抗体催化的氧化作用提供了初步Wentworth等‘7l在Arthus反应模型中同样发现了臭氧的化学信号，进一证实了这种可能性。因为Arthus反应是一种由免疫复合物沉积引起的症性疾病，PMNs的浸润和聚集为其主要特征12“臭氧不仅具有直接的毒性作用，而且还具有调节免疫细胞为一种信号分子，臭氧能扩大免疫细胞的反应性及诱导炎性细胞因子如果抗体催化水的氧为一种信号分子，臭氧能扩大免疫细胞的反应性及诱导炎性细胞因子如果抗体催化水的氧化作用在体内作为机体针对病原微生物的一防御机制，那么这种反应在体内又是如何被调节?抗体介导的补体激活及对吞噬细胞的调理作用在体内都是被严格控制的，仅仅对抗体特异原产生效应作用。考虑到人血清中免疫球蛋白的浓度10mg／ml以上的这种催化水的氧化作用如果被任意激活，会对宿主产生广泛的损伤为所有的抗体，不论是否结合抗原，都能催化水的氧化作用产生H20203。但是，正如以上所描述，在正常情况下，102只能由激活的吞噬细产生，而体内吞噬细胞的激活又受到机体严格的控制。吞噬细胞通过作用或抗体的调理作用吞噬抗原后被激活而释放102，从而102的产生us)和较短的限于炎症部位。研究显示，102具有较短的寿 u从而最大限度地减少了其对外周正常组织的损除了考虑。02的作用，局部发生的抗体催化水的氧化产物H202和是否会对外周正常组织产生损害作用?H202是一种稳定的分子，可以离炎症部位而对外周组织产生广泛的毒性作用。但是过氧化氢酶在体泛存在，可以随时清除这些H202分子，从而减少了H202对外周伤。臭氧虽然是一种高度毒性的分子，但也具有很短的寿命，因而也远距离扩散。从以上可以看出，在正常情况下，无论是参与抗体催化氧化途径的102，还是这种途径的氧化产物H202和03，对炎症部位的因此，抗体催化水的氧化作用能在机体内有效地发挥其抵微生物的作用，可能是生物学中一种重要的免四JlI大学博抗体催化水的氧化途径产生的炎症反应可能对机体造成不因为在人类四JlI大学博抗体催化水的氧化途径产生的炎症反应可能对机体造成不因为在人类许多疾病中，急性或慢性炎症反应可能占据着中心的地位以人类动脉粥样硬化症(AS)为例，AS已被认定为是一种慢性性疾病【2“。其中脂质的氧化与损伤、泡沫细胞的形成在AS化修饰的低密度脂蛋白(LDL)可通过细胞表面的清道夫受体摄取。这种内吞作用引起脂质过氧化产物的产生，并且促进胆固醇酯集，最后导致泡沫细胞的形成【26J既然抗体催化水的氧化途径产生H202及03，两者均具有强烈作用，因此我们可以推断这种途径可能在机体内引起LDL的氧化修饰而导致泡沫细胞的形成。最近的研究显示【2叭，AS患者的粥样斑块被后产生一种臭氧的化学信号，并且发现了一种胆固醇的5，6-secostero]。因为已有研究表明，在一系列氧化剂如102、302成。这些研究为臭氧在As中可能产生的影响提供了有力的证们也可以推断，抗体催化水的氧化途径可能参与了As的发因此，此项发现对动脉粥样硬化的发病机理具有深刻的含当今普遍认为通过Ox．LDL形成的泡沫细胞是AS主要的病理性特征之1311。泡沫细胞在动脉管壁内的聚积可引起脂质条纹病变的形成，是AS期阶段关键环节之一。在AS的病变进程中，泡沫细胞的坏死或凋亡促进粥样斑块的形成，其特征是含有大体积的脂质核和极薄的纤维帽因此，泡沫细胞的形成代表了AS发生和发促进粥样斑块的形成，其特征是含有大体积的脂质核和极薄的纤维帽因此，泡沫细胞的形成代表了AS发生和发展中一个关键的对于Ox．LDL，除了促使泡沫细胞的形成外，其生物学活性②诱导内皮细胞生成粒细胞一单核细胞集落刺激因子、单核细胞黏附分子血小板衍生生长因子及肝磷脂结合类EGF生长因子等【34．36肌细胞生成血小板衍生生长因子【37】；④损害血管内皮依赖性舒张功能【38】臭氧作为一种活泼的化学反应性气体分子，可与机体多种化学反应，如不饱和的C=C键、氨基酸及其它化学结构的分显示，当人暴露于ppm水平的臭氧中时，可对机体产生许多影响引起浮肿、炎症、超敏反应、上皮细胞的死亡等。臭氧能促进肺的损氧化途径生成的内源性臭氧等化学分子可能参与了机体许多炎症性的发展抗体催化水的氧化途径可能是抗体介导的一种新的免疫防项功能的发现无疑丰富了我们对抗体清除外来病原微生物的认识。考抗体的这种作用并不依赖于其抗原特异性和来源，而且免疫球蛋白至过程中最古老的～种机体防御形式。而抗体其它的功能如激活补体、功能等则可能是抗体继续进化过程中形成的更同时，抗体的这种催化效应也提示了其在机体内具有潜在义。由于这种途径产生的具有强烈反应的化学物质H202及03均可能参炎症的扩展，因此对机体内一些炎症性疾病特别是AS的发生和发展等节可能产生一定的影响，从而为义。由于这种途径产生的具有强烈反应的化学物质H202及03均可能参炎症的扩展，因此对机体内一些炎症性疾病特别是AS的发生和发展等节可能产生一定的影响，从而为我们研究这些相关性疾病的发生和发参考文DR，andWoofJM．Humanantibodyfunction．Adv【l-[2】DeoYM，GrazianoRF,ReppR，anddeWinkelJG．ClinicalsignificanceofreceptorsandFcgammaR-directedToday．1997，1127．35moleculesL．Natureofforces【3】1a唱1948．161：707—A，JandaKD，andLemerSchultzchemicalcatalysisbySJ，Jacobs[5】Science．1986．234：1570—Antibodieshave[6]WentworthAD，JonesLH，WentworthPJr,JandaKD，LemerNatlAcad 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【chemotacticfactorforhumanmonocytesandroleinNatlSciUSA．1988，85：2805—[34】RajavashisthTB，AndalibiA，TerritoMC，BerlinerJA，NavabM，Fogelmanexpressionof LusisAJ．Inductionofendothelial1factorsbylow—density[35】Kume atherogenicmoleculesinculturedhumanandrabbitarterialendothelialJClinInvest90：1138—Gimbrone[36】Kumegrowthfactorgeneexpressioninculturedhumanendothelialcells．JClinInvestA，andNilsson【37]Stiko·RahmA，Hultgardh-Nilssonandoxidized ofPDGFAAandsurfacePDGFreceptorsGimbrone[36】Kumegrowthfactorgeneexpressioninculturedhumanendothelialcells．JClinInvestA，andNilsson【37]Stiko·RahmA，Hultgardh-Nilssonandoxidized ofPDGFAAandsurfacePDGFreceptorsculturedhumansmoothmusclecells．Arterioscler【K，KemsSA，MorrisettJD，RobertsHenryarterialinendothelium-bylow—lipoproteins．Nature．1990，344：160-M．Modifiedformslowdensityaffectplatelet[39】vitro．Thromb[40]BashaMA，GrossCJ，Haidarinasthmaticandheatthyvolunteersafterlavageozoneandfilteredpurified1994，106：1757—JA，UekiIF,Leikauf【41]SeltzerJ，BigbyBG,StulbargM，HoltzmanHA．03一inEJ，andhumans—ApplPhysiol·1methacholineinflammation132l一1[42]KorenHS，DevlinRB，Graham R，McGeeMP'HorstmanMcDonnellWF．Ozone-inducedinWJ，BeckerS，House5lowerairwaysofhumansubjectsAmRevRespirDis．1989．139：407—Theimmunesystemofinvertebratesandvertebrates．Comp[43]DuLBiochemMolBi01．2001，129：1-B四川大学博：L论动脉粥样硬化是一种复杂的、慢四川大学博：L论动脉粥样硬化是一种复杂的、慢性进行性的炎性疾病。氧化修饰认为LDL的氧化修饰产生的Ox．LDL是AS病变发生的中心环节，并逐渐得到广泛的支持。本文从氧化修饰学说的提出及支持这种学说的据，与氧化修饰有关的氧化剂及其体内来源等几个方面来论述氧化修AS发展中的1989年，Steinberg等Ⅲ提出了AS的氧化修饰假说。其基化反应表现为一种生物学上的修饰，类似于Brown等[2l发现的化学修饰通过LDL的氧化修饰可引起泡沫细胞的形成。该学说认为氧化的(Ox—LDL)可通过以下几种方式促进动脉粥样硬化(AS)的发展：①的形成【2】；④具有细胞毒性，可导致内皮完整性的丧失‘引。根据As的应损伤学说，Ox．LDL的这些特性与脂纹的形成(因为脂质的渗透展成为病变存在着密切的联系⋯。因此，氧化修饰学说的一个重要特征是它不再主张内皮细胞的丧失作为AS巨噬细胞已被确定为引起泡沫细胞的主要细胞类型。早期的AS发现LDL颗粒本身在体外并不具备有致AS的能力，因为当巨噬细胞LDL共同孵育时，由于LDL发现LDL颗粒本身在体外并不具备有致AS的能力，因为当巨噬细胞LDL共同孵育时，由于LDL受体的下调作用，使细胞不能摄取和内吞多的脂蛋白一胆固醇【6J。这样泡沫细胞的形成并不表现为被LDL导，这个事实与缺乏功能性LDL受体的家族性高胆固醇血症患者中的发生相一致。在LDL受体研究中，Goldstein等【21观察到LDL用后可引起大量的巨噬细胞对胆固醇的摄取并导致泡沫细胞的形成。现象是由一种可饱和的特异的受体介导的，后来被命名为乙酰基一LDL体。现在我们已知道这种受体就是一种所谓的清道夫受体，表达于巨胞和其它类型细胞上17J最初对乙酰基．LDL受体的研究缺乏对体内LDL乙酰化的研究手段但是Goldstein等根据其研究推测其它的一些对LDL的修饰方式可能导其被这种乙酰基一LDL受体识别。大约两年后，Henriksen等【8】发现与内皮细胞孵育时，其可作为巨噬细胞的一种配体，从而形成泡沫细大量的研究工作已确定了一些表达于巨噬细胞和其它细胞上的受体担负着清道夫受体的功能【9】。现在基本上已鉴定了乙酰基一LDL受体要以两种形式存在，即为清道夫受体A1和A2【l们。其它的受体如CD68CD36、SR—B1和LOX一1也被认为与经典的清道夫受体具有相似的特性[9】2．2在追溯到半个世纪的研究中，人们逐渐认识到氧化反应代生在AS中的化学修饰作用，但是对这种氧化修饰的认识最初仅仅限脂质中，其与泡沫细胞的形成并没有直接关系。直到1984年，研究才现LDL与内皮细胞孵育后能转化为被细胞高度摄取的形式与脂质的氧化通过使用直接的化学工具分析，早期的研究已清楚确定化的脂质存在于AS病灶中【12-13]。大约半个世纪前，Glavind等㈣从人化的脂质存在于AS病灶中【12-13]。大约半个世纪前，Glavind等㈣从人患者的主动脉的氯仿提取物中发现过氧化产物的含量与AS的程关，而正常动脉中并不含有脂质过氧化产物。因此他们认为脂质的过反应是脂质沉积的产物，对于AS的发病机理起着积极的作用①脂肪酸氧化产物已有报导一些不同类型的脂肪酸氧化产物存在于病灶中。其中最先探测到的氧化产物是亚油酸的羟基产物(HODEs)【l“，这些氧化产物和羟基十八碳烯酸(HETEs或花生四烯的羟基脂肪酸的氧化产物)是AS病灶中最丰富的氧化脂质的类型[13胆固醇花生四烯酸酯是LDL中容易被氧化的主要脂质㈣，LDL是AS间导致脂质聚积的主要来源。通过立体定向分析判断，大部分酯化的酯化的HODEs主要来源于非酶催化的氧化反应【18l。这与Heydeck等观察的结果相一致，他们发现在脂加氧酶介导的LDL氧化期间，这种催化的氧化反应迅速被非酶催化的氧化反应所取代和支配。另外，通位异构分布状态所判断，在人AS患者病灶中大部分酯化的HODEs是a．TOH的存在下产生的118人AS病灶中也包含有氧代十八碳烯酸【20】和F2-异前列腺素系遍比HODEs和HETEs的浓度低20到40倍【23】②胆固醇氧化产物(氧固醇)与脂肪酸一样，胆固醇也经历酶和非酶化的氧化反应从而生成氧固醇。大量研究报导了在人主动脉的有机抽人AS病灶的进展中，除27一羟基胆固醇外，较为丰富的氧固醇为7．酮固醇，其次是13一和o一羟基胆人AS病灶的进展中，除27一羟基胆固醇外，较为丰富的氧固醇为7．酮固醇，其次是13一和o一羟基胆固醇。这些氧固醇通常认为是非酶的氧化产物，主要来自于饮食或者是由体内产生。其它存在于人病灶氧固醇包括B一氢过氧化胆固醇，其可能代表了一种主要的细胞毒【28】。研究发现，氧固醇主要集中于泡沫细胞中，除了27一羟基胆固醇外它们在组织中的浓度通常与疾病的程度并不平行。而且氧固醇主要以病灶中已证实有氧固醇的存在，仍没有直接的证据证明这些氧固醇促AS蛋白质的氧化除了脂质的氧化，在人AS病灶中有许多证据表明蛋白是通过抗体识别蛋白结合的氧化产物，或通过高效液相色谱分析以及色谱／质谱测定分析等。最初的文献报导是通过免疫组织化学的方法包括人AS病灶中LDL的载脂蛋白(apo)B一100在内的蛋白质的氧化免疫组织化学方法为氧化蛋白的定位提供了重要的信息，不利的因素能半定量，而且容易受到来自结构上相关蛋白的潜在干扰。另一方面谱／质谱分析方法虽然能为我们提供定量的信息，以及其高度的特异通常在AS病灶中观察到的蛋白氧化类型与在体外观察到的LDL的反应，即通过电子的泄漏、金属离子依赖的反应、脂质和糖的自然以及脂质氧化的分解产物开始的。这些产物包括一些反应性分子如氢化物和蛋白结合的还原剂(其中以多巴特别显著)，以及一些化合物。蛋白遭受亲电子加成和置换反应，或由自由基重组反应等而产生。自重组反应也可产生氧蛋白遭受亲电子加成和置换反应，或由自由基重组反应等而产生。自重组反应也可产生氧化损伤的特异性标记物，代表参与的氧化剂与正常动脉相比较，人颈动脉内膜切除术样本包含着一些表示·OH介导的蛋白氧化。另外这些病灶中也含有较高水平的o，o’．聚酪氨酸，表示了HOCI介导的蛋白氧化反应的参与，从而支持了等132j早期的发现，他们在AS病灶中发现含有较高浓度的氯酪氨酸为其代表着髓过氧化物酶介导的氧化反应的特征性标记物。但是，对化蛋白标记物的聚积与AS的严重程度之间的关系，可得到的物的聚积，仅仅二聚酪氨酸在AS早期至晚期出现显著的增加。不过并没有排除特异酪氨酸的氧化修饰可能参与了早期疾病事件的可能性既然Ox—LDL作为是AS的一个特征，我们有理由相信在AS病灶能够检测到LDL的这种形式。这方面的研究通常首先使用能够Ox．LDL上某些表位的特异性抗体，这种表位不存在于初始的、即非氧的LDL上。多不饱和脂肪酸的氧化能导致乙醛的形成，从而apoB．100中的赖氨酸残基【”I。赖氨酸残基与丙二醛和4羟基壬烯醛反形成的加合物具有广泛的特性，可以刺激机体产生特异性抗体。在现，这种抗体能明显地结合于AS病灶上，而在正常动脉中没有这种的结合。正如氧化修饰学说所预期的一样，这些表位很大程度上与巨胞出现在相同的位置【36】。当然我们可能认为这种表位对LDL也许并不特异的，而且可能代表着AS病灶中其它蛋白的修饰。不过Yla—Ox—LDL相似的表位。而且从AS病灶中分离出的LDL包特异的，而且可能代表着AS病灶中其它蛋白的修饰。不过Yla—Ox—LDL相似的表位。而且从AS病灶中分离出的LDL包含有高酪氨酸‘381和o，o二二聚酪氨酸[321。这些发现显示出As病灶中的LDL被氧化修饰，也表明HOCI可能参与了这些氧化修饰的反应。Hazell等【通过特异的抗体研究发现人AS病灶中含有apoB一100的脂蛋白可被修饰，而且病灶脂蛋白中3，5．二氯酪氨酸与3．氯酪氨酸的比率增高【18而显示局部已有HOCI的产生。正如Carr等【40】研究显示的As病灶中结合于LDL，也预示着产生了HOCILDL存在于循环的血浆中，并且有一部分LDL可穿过内皮下的空回到循环血浆中来【4”。血浆中含有的抗氧化剂为LDL提供了有力的保作用，避免其被氧化【421，因此LDL氧化修饰的位点可能在内皮下的空中。据此我们可以认为LDL穿过这个空隙时可产生少量的Ox．LDL的表位具有免疫反应性。但是对循环血浆中是否存有Ox—LDL仍保留着议，主要原因在于这些证据存有其它潜在的可能性，例如在血浆操作和LDL的分离中可能也被虽然上述资料并没有说明循环血浆中Ox．LDL与AS之间因果的系，一些研究已显示循环血浆中Ox．LDL的表位水平能用于区分临床表明显和不明显的AS病人【45】。Ehara等【46】运用免疫学方法探测氧化的卯性冠脉综合病症患者循环血浆中的Ox．LDL水平增高。总之，这些资料凹川大学博士论示在血液中能探测出相对少量的Ox—LDL，其含有不同类型的氧化特异表位，并且可能反凹川大学博士论示在血液中能探测出相对少量的Ox—LDL，其含有不同类型的氧化特异表位，并且可能反映出AS的进程及其不同的表现。当今仍有哪～种表位与AS直接相如果apoB一100的氧化修饰导致了新表位的形成，我们有理们在体内具有免疫原性，刺激机体产生相应的特异性抗体。研究表明假设确实存在，因为Ox-LDL中的apoB-100内大量表位已被证实能激机体产生免疫反应，且针对丙二醛修饰的赖氨酸残基的自身抗体也在人的血清中得到显现1351。一些研究显示这些自身抗体的滴度与AS和心的自身抗体也同冠状动脉疾病、外周AS相关，并且对气囊血管成形术的再狭窄具有高度的风险性[49-51l。另外，抗氧化的自身抗体在动物As也具有一定的作用。例如在apoE缺陷的小鼠中，循环中的抗氧化心磷的自身抗体与AS的病变程度密切相关[521。给LDL受体缺陷的小鼠喂致AS的事物，发现血清中自身抗体的滴度逐渐增加，并且与血液中胆醇浓度和病灶大小的程度以及主动脉中Ox—LDL的含量密切相关15”。氧磷脂的表位既可作为脂质，也可作为脂蛋白的加合物，针对这些表位身抗体可能通过抑制巨噬细胞对Ox．LDL的摄取而直接影响着AS口“。了支持这种假蜕，通过使用apoB．100多肽免疫人和动物，发现健康人可产生高水平的针对这种抗原的自身抗体，而且在apoE缺陷的现这种抗体可以减少AS的发展进程【55Ox—LDL除了除了促进泡沫细胞的形成外，也具有许多其它AS的特性。内皮细胞的激活是AS中的早期事件，而Ox．LDL的产物进了这种过程【5“。一旦被氧化，LDL增加了其AS的特性。内皮细胞的激活是AS中的早期事件，而Ox．LDL的产物进了这种过程【5“。一旦被氧化，LDL增加了其底物对神经磷脂酶的适性，这种酶可促进LDL的聚合，从而增强巨噬细胞对LDL的摄取[57】。的初始氧化和所谓的轻微氧化的LDL可刺激邻近的内皮细胞血管壁内。轻微氧化的LDL的活性包含在其脂质部分。单核白一1在AS病变具有重要作用，研究显示缺乏这种蛋白或其受体的小鼠以削弱AS发病的进程【59。601内皮下层间隙中的Ox—LDL的形成也能促进AS的发展。Ox．LDL有双重活性，可能具有增加动脉中炎症细胞数量的能力。例如，Ox。借助其氧化过程中形成的溶血卵磷脂对单核细胞和T淋巴细胞【61】产生化作用。另外Ox．LDL对巨噬细胞也有趋化作用。因此炎性细胞这种增的进入和减少的流出可能刺激了动脉的炎症反应，而AS正是～种炎症应的过程[621。最后Ox．LDL也可限制内皮来源的·NO的生物动脉血管壁中基因的表达方式也是受LDL的氧化形式影响的。例如轻微修饰的LDL以及Ox．LDL能诱导巨噬细胞表达清道夫受体，因此强了其对脂蛋白的摄取和促进泡沫细胞的形成。Ox．LDL也能上调许多炎症相关的基因，如单核细胞趋化蛋白．1、血清淀粉样A蛋白、血浆铜表达过氧化物酶体增殖物激活受体一Y(PPARs．Y)，已有研究显示这种体可改变清道夫受体(CD36)和致炎基因的表达f6“。因此Ox．LDL许多生物学活性，在理论上这些活性均可能有助于AS病灶形成氧化修饰学说认为Ox—LDL被清道夫受体的识别是泡沫细胞先决条件。这种概念已被大量的实验所证氧化修饰学说认为Ox—LDL被清道夫受体的识别是泡沫细胞先决条件。这种概念已被大量的实验所证实。清道夫受体一A小鼠显示对氧化修饰的LDL的结合和降解作用的缺失【91。在缺乏apoE因的小鼠中，剔除清道夫受体A可以增强对AS的抵抗‘67I。同样，来源缺乏CD36清道夫受体小鼠的巨噬细胞也显示对Ox．LD净的摄取减且当与apoE缺陷的小鼠杂交后，明显减少了AS的发展过程【68】。这料显示与清道夫受体在早期AS中的关键作用相2．8如果我们认同LDL的氧化是AS的一种基本特征，那么抑制LDL氧化理所当然可以限制AS的发展。这种观点已通过使用大量的抗氧化剂化合物在动物体内进行了一些初步的试验，发现这些抗氧在体外试验中可以有效抑制LDL已证明抗氧化剂具有保护动物拮抗AS的证据来自于普罗布考[69]o外实验中，这种亲脂的药物能有效地保护LDL避免被铜离子氧化【791管它是一种位阻的苯酚，其清除过氧化自由基的活性也仅仅是。一生早期的研究显示普罗布考在兔子和猴子内可抑制AS的进程。Kita[701用普罗布考处理遗传性高血脂(WHHL)的兔子，观察到病了87％，而且LDL对氧化也显示明显抵抗作用。这些的研究者得出结论，认为AS的减少是因为普罗布考的抗氧化效应的结果。但又发现普罗布考也使血清中的胆固醇降低了7％，所以ASCoA还原控制普罗布考降低胆固醇的效应。他们发现，当使用洛伐他汀和普罗分别使总胆固醇减少到相同的程度时，普罗布考减少AS的效应汀高48％，因此提示普分别使总胆固醇减少到相同的程度时，普罗布考减少AS的效应汀高48％，因此提示普罗布考抑制AS是因为其抗氧化效应醇的降低相关。另一个研究也支持这个观点，Mao等口3】使用一种结构类似普罗布考，但缺乏降低胆固醇特性的药物处理修饰的WHHL兔子研究显示普罗布考和其类似药物都抑制LDL的氧化和减少AS从而证明了抗氧化介导的机制在减少AS病灶形成中的作用。其它在灵类动物、喂养胆固醇的兔子和仓鼠等的研究也显示普罗布考减少了AS进程[74-76]。不过在鼠科AS模型中表现的情况比较复杂，因为普罗布已有两个研究检测了普罗布考在抗人AS的作用。普罗布考RegressionStudy，PQRST)179J研究醇血症超过3年的病例中，普罗布考对削弱股动脉内腔的丢失无效，其过定量血管造影术所评估。但重要的是，这种方法并没有直接评估疾发展程度。对比之下，福冈动脉粥样硬化研Trial，FAST)1801观察到普罗布考显著减少了高胆固醇血症病人颈动脉AS的进程，其通过B超检测内膜至中膜的厚度所评估。在人布考和一种带有其一个苯酚基团的类似物以琥珀酸酯的形式存在，也可改善经皮冠状动脉介入治疗后的再狭窄【811二苯基．苯二胺(DPPD)是一种苯胺的化合物，显示其在胆固醇喂养子主动脉中可削弱AS的进程【821，相似的发现在小鼠的As模型中也有在兔子和小鼠模型中都能抑制AS的进程1841。同样，3，3’，5，5二苯基．4，4’一二醇，一种亲脂性的双酚，能抑制apoE和LDL受体缺陷IS_qJilX学博：b们在体外能抑制LDL的氧化。因此大量合成的脂溶性IS_qJilX学博：b们在体外能抑制LDL的氧化。因此大量合成的脂溶性的抗氧于观察它们在减少AS和在体外抑制LDL氧化之间的联系以上的描述表明氧化修饰参与了AS的发病机理。而作为氧作俑者，一些表达在血管中的酶有助于活性氧分子(ROS)的产生和释放体内产生的ROS包括自由基以及非自由基氧化剂具有高度反应活性【87】。体内产生的自由基主要包括：中-t3碳自由基(C·)超氧阴离子(02。·)和氢过氧自由基(H02·)、羟自由基(·OH化氮自由基(·NO)和二氧化氮自由基(·N02)、硫自由基(RS．、及过渡金属离子(如Te、Cu)等如果两种自由基相遇，通过结合它们的不配对电子形成一这类反应通常是迅速的，并且导致非自由基产物的形成。例如，在血中，02。·能和·NO反应形成过氧亚硝酸根离—+0NOO。同样，一个自由基也可以给非自由基分子提供一个氢原子基中捕获一个氢原子。在主要为非自由基分子的生物系统中，这些反普遍存在的。而受影响的分子也包括一些低分子量化合物，如抗氧化一些酶、脂质、蛋白、核酸及糖等的辅助因子。在这种情况下，可以一些新的自由基，从而导致连锁反应。例如，·OH能从脂肪酸侧链中获取一个氢原子，结果侧链上形成一个中心碳自由基(L·)，迅速与反应产生一种脂质过氧化自由基(LOO·)，其通过与邻近的脂质分子反又产生另一种L·和脂反应产生一种脂质过氧化自由基(LOO·)，其通过与邻近的脂质分子反又产生另一种L·和脂质氢过氧化物(LOOH)，因此LOO·本身又起除了自由基，一些非自由基氧化剂在参与血管氧化修饰过和次氯酸(HOCI)、臭氧(03)、单线态氧(102)、过氧亚硝酸根离子和过氧化亚硝酸(ONOOH)、烷基过氧亚硝酸根离子(ROONO)、三化氮(N203)、硝酰氯(N02CI)、硝酰离子(N02+)及亚硝基硫醇等。其中H202的含量最为丰富，通常来源于氧化酶催化的作由于自由基存在的原因，不同的非自由基分子的活性也会变。H202通常为一种较弱的氧化剂，尽管在一些酶如3．磷酸甘油醛脱酶的作用下，其能直接氧化巯基‘88l。H202也能与某些血红蛋白、细胞色素c)反应，导致铁离子的释放或高铁血红素及氨基酸H202引起的氧化损伤最主要的原因是在过渡金属催化的分解反应下了·OH的产生【9⋯。ONOO一也是一种相对较弱的氧化剂，但的形式，即ONOOH是极其具化学反应的，甚至超过一OCI／HOCIC9。I物系统中，ONOO‘的形成可产生一个强烈的氧化环境，甚至比得上的产生非自由基氧化剂如ONOOH和HOCI表现为与蛋白的反酸、苯丙氨酸及赖氨酸残基。由于这些氨基酸残基在蛋白中的含量相富，可能是ONOOH或HOCI优先与蛋白反应的原因【93I。比较而言于自由基的非自由基氧化剂则普富，可能是ONOOH或HOCI优先与蛋白反应的原因【93I。比较而言于自由基的非自由基氧化剂则普遍优先启动脂质的过氧化反应。局部境可能也影响着2e一氧化剂与蛋白质的氨基酸的反应。例如，相邻的和蛋氨酸对氧化反应尤其敏感，正如钙调蛋白羧基端邻近的蛋氨酸残易受H202介导的氧化【94l。同样，如果局部环境能促进硫醇基(cys-化剂如HOCI和ONOOH可与某些辅基强烈反应，如蛋白中的血红硫中心。其通常与氨基酸的侧链优先反应，例如在钙调蛋白的存在下一些表达在血管中的酶有助于活性氧分子的产生和有效的病理条件和治疗干预均可调节氧化酶和抗氧化酶的表达和功能，包NAD(P)H氧化酶、内皮细胞NO合酶(NOS)、黄嘌呤氧化酶、髓过氧物酶(MPO)、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、硫氧还蛋白还甘肽过氧化物酶等。大多数研究强调了氧化酶和过氧化酶的失调对AS模型和人AS疾病的发展的重要性血管细胞中ROS的主要来源是NAD(P)H氧化酶，其包括细胞膜gp91phox和p22phox，细胞浆亚基p67phox和p46phox，以及小等。这些亚基激活后发生聚集，从而形成功能性的酶，通过电子转移子氧后可产生超氧化物自由基㈣。与内皮细胞和外膜细胞相比，血管肌细胞(VSMC)仅仅表达低水平的gp91phox，而且其功能也被同noxl所取代。但是动脉阻力血管的VSMC可表达一种功能上激活四川I大学博士gp91phox。不同NAD(P)H氧化酶亚基表达水平的调节以及迁个酶系统的活性四川I大学博士gp91phox。不同NAD(P)H氧化酶亚基表达水平的调节以及迁个酶系统的活性4．2黄嘌呤氧化酶可催化嘌呤代谢过程中黄嘌呤和次黄嘌呤的下黄嘌呤氧化酶能产生大量的ROS。这种酶不仅表达在血管且也存在于循环血浆中，其主要结合于内皮细MPO是一种血红素蛋白，表达于中性粒细胞和单核细胞中。胞在激活过程中可分泌出MPO，并且在白细胞脱颗粒后这些内皮细胞内或其周围。MPO可利用H202产生HOCI[991，这个反两个步骤进行，涉及到氧化还原反应中间体复合物I。这种酶也发挥着典的过氧化物酶的活性，能氧化一系列有机底物，从而产生反应性氧体，包括复合物I和复合物II。重要的底物为酪氨酸和亚硝酸盐，分别致酪氨酰自由基和·N02的形成。·N02和HOCI参与的反应可导致活氮分予(RNS)的形成，也可导致蛋白质的硝化作用，例如硝形成【1001在生理条件下eNOS可产生·NO，从而与ROS相互作用㈣】。以四氢生物蝶呤作为其辅助因子，结合到加氧酶域的血红素族附近子转移到L一精氨酸，形成L一瓜氨酸和·NO。在缺少L．精氨酸或四氢生蝶呤的情况下，例如当这种辅助因子被氧化性破坏，或其合成的限GTP环化水解酶的下调时，eNOS能还原分子氧产生超氧化物而非-NO在病理条件下，eNOS的功能异常或裂解能产生大量超氧化物，成为的重要来源在病理条件下，eNOS的功能异常或裂解能产生大量超氧化物，成为的重要来源在脂质氢过氧化物(LOOH)的存在下，游离的过渡金属如铁和铜强烈地催化氧化反应。研究认为LOOH是被15一脂加氧酶(15-LO入LDL的结果‘1021。过渡金属可介导LOOH发生均裂，从而氧自由基，启动脂质过氧化反应。在研究试剂中添加过渡金属，包括培养基，是最常用的体外氧化LDL的方法。但是体内游离过度是极微小的，很少有令人信服的证据证明其对血管壁中LDL的氧化重要作用。这表明使用游离过渡金属在体外氧化LDL的实验在生物学可能毫无意义羟自由基(·OH)也可以通过金属蛋白与过氧化物的反应而产可能是因为ONOO’的分解形成的‘m31。因为其极高的反应活性，·OH通研究发现这些羟基化的氨基酸在人AS患者动脉内膜切除术标的，在猴子早期糖尿病的血管壁中也有所增加，因此提示这些疾病患4．6腊质过氧化自由基(LOO·)被认为是自由基介导的过氧化反和胆固醇酯。这些脂质的氢过氧化物，即磷脂的氢过氧化和胆固醇酯的氢过氧化物(CE．OOH)，已作为体内脂质过氧据LOOH的代谢主要通过过氧化物酶介导的还原作用LOOH的代谢主要通过过氧化物酶介导的还原作用生成相应的醇(LOH)。胞外被认为是脂蛋白脂质氧化的场所，PL．OOH和CE．OOH别被载脂蛋白中的蛋氨酸残基还原成PL—OH和CE．OH[1061。因此CE-OOH单独相比，CE—OOH与CBOH共同的聚积[即CE0(O)H]可能反映体内主动脉LDL氧化的一种更好的指标H07I。确实CEO(O)H是存在于进程中的AS斑块的主要氧化的15-LO和Ⅱ-生育酚(旺一TOH)也能在LDL中形成LOOH，所以必区分这两种不同的途径。过氧化自由基介导的亚油酸酯的过氧化反应论上产生四种不同的LOOH区域异构体，它们并不等量的聚积【108l。在化的脂质中，热力学上支持的9．和13一反反异构体占主要地位。然而Q—TOH的LDL主要产生CE—OOH的9一反厮口13．√厕反区域异构体【1这可能是因为a—TOH与LOO·的反应发生在自由基LOO·体并氧化其它脂质的反应之前。在人As斑块中大部分CEO(O)H是以9反厮口13一腹反区域异构体而存在，特别在AS发展的早期阶段‘“01示动脉血管壁中的脂蛋白脂质的过氧化反应最可能是在a．TOH存在下生的。因此表明Ⅱ．TO·，而非L00·，是承载脂质过氧化反应链的主由基氧4．7在体外，a一生育酚羟自出基参与了LDL的脂质过氧化反应【“11。人AS病灶中发现CEO(O)H的9一反膈口13．／缀反区域异构体优先聚集制剂干预生育酚介导的过氧化反应，能有效削弱血管壁中脂蛋白脂质氧化反应，因此提示这种抑制剂是潜在的抗AS化合物4．8一些证据支持了15-L0在As中的作用，其中，最有力的证据是在因此推断，15一LO可以作为药物干预的潜在抗AS靶目标，Bocan等[113通过高一些证据支持了15-L0在As中的作用，其中，最有力的证据是在因此推断，15一LO可以作为药物干预的潜在抗AS靶目标，Bocan等[113通过高胆固醇兔子的研究支持了这种设想。15-LO如何促进AS不明确。研究发现15一LO在体外可氧化LDL，部分通过生育酚介导氧化反应⋯41。但是在AS病灶中，15．LO与巨噬细胞的关系密切，因而利用细胞过度表达15一LO的研究，认为15-LO可使LOOH种植于LDL导致其对后来的氧化反应更敏感。但是这些研究并没有确定在LDL测的氧化脂质究竟是酶或是非酶催化的产物，即他们并不能排除污染渡金属参与了细胞LDL的氧化。因此，细胞的15一LO是否参与了胞外4．9异前列腺素系列均为花生四烯酸的环三羟基衍生物的区域们在结构上与前列腺索相关。虽然前列腺素H合酶能产生异前列腺素列，现在研究逐渐接受异前列腺素系列的形成反映了自由基介导的花烯酸的氧化。现在对异前列腺索系列如何成为氧化剂以及其形成的来资料仍很匮乏。Pratico等n151虽然报导了血管壁中异前列腺素系列浓腺索系列在人颈动脉AS斑块中的浓度与斑块的稳定性关系·NO是一种强大的血管扩张剂，由内皮细胞产生，可与金金属蛋白反应形成活性氮分子(RNS)。在RNS中，ONOO’可通过与超氧阴离子自由基的扩散控制的反应而生成【m31。同时产生·NO和超化物的化学系统容易氧化LDL并使其转化为被高摄取的形式。由ON00和碳酸盐生成的·N02Leeuwenburgh等化物的化学系统容易氧化LDL并使其转化为被高摄取的形式。由ON00和碳酸盐生成的·N02Leeuwenburgh等【118峙艮导，AS主动脉内膜中LDL含有高水平的3氨酸，比血浆中的LDL高90倍。这些研究提示RNS参与了主动脉中的氧化，因此潜在影响着AS的进程。为了支持这一点，Behr．Roussel子的冠状动脉AS的发展进程，虽然在apoE壬小鼠中，eNOS对AS的发展并没有产生影响【12013一硝基酪氨酸并不是ONOO’特异的标记物，也可通过·NO与的反应生成，以及通过酪氨酸苯氧自由基捕获·NO而产生【12¨221。因在生物样本中，ONOO。和MPO在蛋白硝化中留下相同的痕迹同类型的RNS对体内LDL氧化的确切作用仍有待于在人AS颈动脉内膜切除术的标本中发现了胆固醇的臭氧3-hydroxy一5一OXO一5，6-secocholestan-6-al(5,6-secoster01)。他们认为进展AS动脉中的白细胞被激活后导致了臭氧的产生，通过靛蓝胭脂红转化靛红磺酸所评估。并且这种胆固醇的氧化产物能引起细胞毒性，使转化成被高摄取的脂蛋白。但对激活的白细胞是否产生臭氧仍存有争因为最近的研究已显示其它的ROS也能介导靛蓝胭脂红转化成靛红酸。因此有必要改变探测胆固醇的氧化产物的特异性，来进一步证实是否参与了As的事大量的研究资料显示了氧化修饰事件与AS的发病机理以及床事件之间的联系，包括：As病灶中发生氧化修饰的一些明确的证据Ox．LDL具有致AS的活性：AS发展进程中胞内ROS和RNS产生的增加～些抗氧化剂对AS动物模型成功的干预等。尽管如此，氧化事件与床事件之间的联系，包括：As病灶中发生氧化修饰的一些明确的证据Ox．LDL具有致AS的活性：AS发展进程中胞内ROS和RNS产生的增加～些抗氧化剂对AS动物模型成功的干预等。尽管如此，氧化事件与的因果关系，特别是LDL氧化修饰的病理生理学意义仍然受挑战。例如，抗氧化战略在限制AS和心血管事件中的表现不尽人意不明确疾病的发展阶段与血管壁中氧化剂和抗氧化剂分子含量的关系至有报导认为AS与动物血管壁中脂蛋白的氧化并没有直接的关系等等随着基因靶技术的发展，我们可以通过有目的地调节基因的AS动物模型，并且运用基因方法获得关于氧化剂引起LDL及影响这种疾病的信息。敏感分析方法的发展可以使我们获得更直接学证据，来证明哪些特异的反应途径促使LDL氧化和体内AS病变的成，也能够使我们将特异的氧化脂质和氧化蛋白的聚积与AS不同阶系起来。对这种导致LDL氧化过程的理解非常重要，可以帮有效的战略来抑制AS的发展⋯1S，CarewTE，KhooWitztum儿cholesterol：modificationsthatlow—NEnglJMed．1989．320：915—【2]Goldstein儿，HoYK，Basusitedegradationofdensitycholesteroldeposition．ProcNatlAcadSci SS，HamaSV,HoughGP,RossLA，BorkH，andFogelmanoflowdensitylipoproteininofhumanaorticcellsis婴型查堂塑主toinduction1synthesisisbydensityInvest．1991，88：2039-modified recruitment NatlduringSciUSA．12995-MT,ParthasarathyD．Endothelialactivityandtheofformsofdensitytipoprotein．ProcAcadUSA．1985，82：5949-[6]Goldstein儿Brownandits婴型查堂塑主toinduction1synthesisisbydensityInvest．1991，88：2039-modified recruitment NatlduringSciUSA．12995-MT,ParthasarathyD．Endothelialactivityandtheofformsofdensitytipoprotein．ProcAcadUSA．1985，82：5949-[6]Goldstein儿Brownanditsrelationlow-lipoproteinBiochem．1977，46：897-【7】KriegerM，ActonS，AshkenasA，Penmanflypaper,host ofmacrophage[8]HenriksenEM，andSteinbergD．Enhancedincubatedwithcultureddensitylipoproteinrecognitiondensitylipoproteins．Proc 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F2一instabilityinhumancarotidatherosclerosis．Jf24]BrownAJandJessup、Oxysterolsand1—【25】LLVanLierJElevelsmetabolism．9．26一aorta．Atherosclerosis．1970，12：1-U，BjorkhemI，OttossonM，LiuinatherosclerotictissuedecreaseO．OxysterolsRNAlipoproteinlipaseInvest．1996．97：461—derC，WilliamsonBK，Ballantineandinhumanlesionsstagesofdevelopment．BiochimBiophys1995，1256：t41—【28】GM，MaG，IrwinKC，MartinLF．MorelD、、!呈!型盔兰坚主andPE．7B-Hydroperoxycholest-5-en一3ofprimaryhumanAcadSciUSA．1994．91：11452—1Proc【S，DeanandJessup、Ⅳ．7-oxidizedhumandensityLipidRes1997，38：1730-f30】FuDeanRT．EvidenceMJ，Stockerofradicalsoxidationinhumanplaque．BiochemJ．1998，333：519-[31】DeanRT,FuS，Stocker!呈!型盔兰坚主andPE．7B-Hydroperoxycholest-5-en一3ofprimaryhumanAcadSciUSA．1994．91：11452—1Proc【S，DeanandJessup、Ⅳ．7-oxidizedhumandensityLipidRes1997，38：1730-f30】FuDeanRT．EvidenceMJ，Stockerofradicalsoxidationinhumanplaque．BiochemJ．1998，333：519-[31】DeanRT,FuS，StockerR，andradical—protein997，324：1-1 andJW．3- elevatedlowdensitymyeloperoxidase‘catalyzedoxidation，isisolatedfromhumanatheroscleroticintima．JClinInvest．1997，99：2075-[33】AM，WoltbauerandChaitA．DirectevidenceforrecognizedaLDLantibodyagainstatheroscleroticfromWatanabeheritablehyperlipidemicrabbit．Am5-[34】PalinskiWitztumAS，Breslow儿 AopE-areDemonstrationinlesionstitresoxidation-malondialdehyde—【35]Palinskiw，RosenfeldME，Yla"-S，GunnerGC，SocherSS，ButlerTE，SteinbergD，andWitztum儿Lowoxidativemodificationinvivo．ProcNatlAcadI——婴型查兰堡=!=堡1372-[36]HaberlandME，FongD，andL．Malondialdehyde-Occursatheromaof【37】S，PalinskiTE，ButlerWitztum儿SteinbergD．Evidenceforthepresencemodifiedinatheroscleroticlesionsofdensityandmail．J84：1086—[381LeeuwenburghJE，HsuFF’Mueller——婴型查兰堡=!=堡1372-[36]HaberlandME，FongD，andL．Malondialdehyde-Occursatheromaof【37】S，PalinskiTE，ButlerWitztum儿SteinbergD．Evidenceforthepresencemodifiedinatheroscleroticlesionsofdensityandmail．J84：1086—[381LeeuwenburghJE，HsuFF’MuellerS：andspectrometricquantificationofforradical，copperadicallowdensitylipoproteinfromChem．1997，272：3520-[39]HazellGE，andStockerRPresenceinhumanatheroscleroticJInvest．197：1535-1【40】CarrAC，MyzakMC，StockerR，McCallMR，andFreiB．Myeloperoxidasebindslow-densityatherosclerosis487：176—1【41]SchwenkeCarewTE．InitiationofatheroscleroticlesisoninretentionofLDLvsincreasesinsusceptibleofarteries．Arteriosclerosis．1989，9：908-BN．AntioxidantdefensesR，andlipidbloodProcNatlAcadUSA．1988，85：9748—[43】H，CazzolatoP’andBittolo-BonContributionofinvivooxidizedLDLLDLoxidationandassociation———些型奎竺竖圭densesubpopulations．ArteriosclerThrombVascBi01．1996，16：784—[44】HolvoetGE，BernarH，andCollenMalondialdehyde。low-density[45]HolvoetdeWeftLDLasmarker8-[461EharaS，UedaM，NarukoT，HazeK，ItohM，KomatsuH，TakanoT'TsukamotoK，YoshikawaJ，andBeckerlevelsofoxidizedlowdensityrelationshi