高考生物总复习第一单元有机体中的细胞第一章细胞概述第3节测定微生物的数量全国公开课一等奖百校联赛示范

第3节测定微生物数量第1页学习导航1.概述微生物计数基本方法。2.利用稀释平板法测定样品中微生物数量。[重、难点]第2页新知初探思维开启一、直接计数法1.惯用方法：显微镜直接计数法。2.详细步骤：将待测样品制成悬液→取一定量悬液放在显微镜下进行计数→观察并计算出单位体积内微生物总数。第3页3.优点4.缺点：难以计数______细菌。5.适用范围：普通适合用于纯培养悬浮液中各种____________计数。二、间接计数法1.惯用方法：________________。所需设备_____，可快速得到结果能观察到微生物__________简单形态特征微小单细胞菌体稀释平板计数法第4页2.详细步骤：需要将待测样品配制成均匀____________并使其均匀分布于平板中培养基内，经过培养后，统计培养基中出现________,即可推算出检测样品中活菌数。3.优点：在样品中含菌数_______情形下也能够完成计数。系列稀释液菌落数较少第5页判一判(1)在用直接计数法测量培养瓶中酵母菌时，应在培养液静置一段时间后，从瓶底部吸收液体样本。(×)(2)用稀释平板计数法，经过观察菌落，得出数值往往比试验值要大。(×)(3)在计数时，用于培养器皿要进行灭菌。(√)第6页三、间接计数法实例1.土壤中好气性细菌计数(1)制备土壤稀释液取土壤表层_____________处土样。准确称取1g土样，放入盛有___mL无菌水锥形瓶中，振荡20min后制成102倍稀释液。然后进行系列稀释，得到103、104、105、106系列稀释菌液。5

cm～10

cm99第7页(2)取样及倒平板：每个号码设置__个重复。(3)培养。(4)观察统计①计数时对于细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有__________个菌落为宜。霉菌以每个培养皿内有__________个菌落为宜。330～30010～100第8页第9页2.检测天然水源中细菌总数和大肠菌群数(1)细菌总数通常是指1g或1mL检测样品中所含__________总数,单位用cfu/g(mL)表示。细菌菌落第10页(2)大肠菌群数通常是指每100g或100mL检测样品中所含大肠菌群试验数值，以(MPN)表示。大肠菌群是指在____℃条件下，24h内能发酵______，产酸产气一类___氧或_______氧型革兰氏阴性无芽孢杆菌总称。大肠菌群数检测，惯用__________法，使用乳糖胆盐蛋白胨培养基、___________琼脂培养基(EMB培养基)和乳糖发酵管。37

乳糖需兼性厌多管发酵伊红－美蓝第11页3.土壤中分解尿素细菌计数有些细菌含有__________酶，能将尿素琼脂培养基中尿素分解生成氨，氨溶于水变成氢氧化铵，造成培养基变成____性，使酚红指示剂展现____色。尿素分解碱红第12页想一想土壤有“微生物天然培养基”之称，为何？【提醒】

因为土壤具备了各种微生物生长所需营养、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等条件，是微生物生活良好环境。对微生物来说，是微生物“大本营”；对人类来说，是最丰富“菌种资源库”。第13页关键点突破讲练互动关键点一直接计数法和间接计数法比较1.显微镜直接计数法(1)原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积样品中微生物数量。第14页(2)方法：用计数板计数。计数板是特制载玻片，其上有特定面积为1mm2，高为0.1mm计数室，一个计数室又被分成25个(或16个)中格，每个中格再被划分成16个(或25个)小格，每个计数室都由400个小格组成。第15页(3)操作：将稀释样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格中细菌数，并求出每个小格所含细菌平均数，再按计算公式求出每毫升样品中所含细菌数。(4)计算公式每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数(5)缺点：不能区分死菌与活菌。第16页2.间接计数法(活菌计数法)(1)原理：当样品稀释度足够高时，培养基表面生长一个菌落，起源于样品稀释液中一个活菌，经过统计平板上菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。第17页(2)操作①设置重复组,增强试验说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度菌液，分别取0.1mL接种到已制备好平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜温度下培养计数菌落数。为使结果靠近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上平板上,经涂布、培养，计算出菌落平均数。第18页②为了确保结果准确，要选择一个适当稀释倍数，且同一稀释倍数各个重复组菌落数要相近，若设置重复组中结果相差太远,意味着操作有误，需重新试验。(3)优点：能观察菌落特征。第19页在探究培养液中酵母菌种群数量改变试验中，需利用计数板对微生物细胞进行直接计数。计数板是一个特制可在显微镜下观察载玻片，样品就滴在计数室内。计数室由25×16＝400个小室组成，容纳液体总体积为0.1mm3。某同学操作时将1mL酵母菌样品加99mL无菌水稀释，用无菌吸管吸收少许使其自行渗透计数室，盖上盖玻片并用滤纸吸去多出菌液，进行观察计数。例1第20页(1)在试验中，某同学部分试验操作过程是这么：①从静置试管中吸收酵母菌培养液加入计数板进行计数，并统计数据；②把酵母菌培养液放置在冰箱中；③第七天再取样计数，统计数据，统计分析绘成曲线。请纠正该同学试验操作中3处错误：①________________________________________________________________________；第21页②________________________________________________________________________；③________________________________________________________________________。(2)在试验前应该对计数板、吸管等器具进行________处理。第22页(3)假如一个小方格内酵母菌过多，难以数清,应采取办法是______________________________________________________________。(4)假如观察到如图所表示a、b、c、d、e5个大格共80个小室内共有酵母菌48个，则上述1mL酵母菌样品中约有酵母菌________个；要取得较为准确数值，降低误差，你认为该怎么做？________________________________________________________________________。第23页第24页【解析】

(1)在从试管中吸收酵母菌之前,应将试管轻轻振荡几次，目标是使酵母菌在培养液中均匀分布。酵母菌培养液应置于适宜温度下培养，而且每隔24小时就要统计一次菌落数目。(2)为了防止杂菌污染，试验中所用吸管、计数板等器具需进行灭菌处理。(3)、(4)解答时要注意以下两点:①统一单位;②注意体积改变。第25页400个小室共容纳液体总体积为0.1mm3，则80个小室容纳体积为：2×10－2mm3，含酵母菌48个，又因酵母菌培养液总体积为100mL,统一单位后即可求出酵母菌个数。第26页【答案】

(1)①应将试管轻轻振荡几次再吸收酵母菌培养液进行计数②应将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养③应连续七天，天天观察、取样计数并统计数据(2)灭菌(3)适当稀释(4)2.4×108屡次计数，求平均值第27页变式训练用稀释平板法测定同一土壤样品中细菌数,在对应稀释倍数为106培养基中，得到以下几个统计结果，正确是(

)A．涂布了1个平板，统计菌落数是230B．涂布了2个平板，统计菌落数是215和260，取平均值238第28页C．涂布了3个平板，统计菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了3个平板，统计菌落数分别是210、240和250，取平均值233第29页解析：选D。在设计试验时，一定要涂布最少3个平板，作为重复组，才能增强试验说服力与准确性，所以A、B两项不正确。C项虽涂布了3个平板，不过，其中1个平板计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，所以，不能简单地用3个平板计数值求平均值。第30页关键点二间接计数法在统计微生物数目时注意事项1.设置对照(1)目标：排除试验中非测试原因对试验结果影响，提升试验结果可信度。(2)方法：取一个未接种培养基与接种好培养基一起培养。第31页2.注意无菌操作(1)建立无菌观念，严格控制试验器材、试验室、试验操作者消毒、灭菌。(2)整个试验过程必须确保无菌操作。(3)取样、稀释都要在酒精灯火焰附近无菌环境中进行。(4)规范操作，预防其它微生物污染，试验结束后洗手、消毒。第32页3.准确计数(1)在计算结果时，不一样微生物要选择稀释倍数不一样。细菌、放线菌、酵母菌普通以每个培养皿中有30～300个菌落为宜，而霉菌则以有10～100个为宜。(2)要设置3个或3个以上重复组，然后求其平均值进行计算。(3)每隔24h统计一次，最终选取数目稳定时统计作为结果。第33页尤其提醒①间接计数法主要是用来推测样品中大约含有活菌数。②统计菌落数往往比实际数目低，因为当两个或两个以上微生物在一起时，平板上观察到只是一个菌落。第34页在做分离分解尿素细菌试验时，A同学从对应培养基上筛选出大约150个菌落，而其它同学只选择出大约50个菌落。A同学结果产生原因可能有(

)①因为土样不一样②因为培养基污染③因为操作失误④没有设置对照A．①②③

B．①②③④C．②③④

D．①③④例2第35页【解析】试验结论是否正确与是否设置对照有直接关系，但试验结果与是否设计对照无