高三生物一轮复习课件微生物的培养技术及应用

第45讲

微生物的培养技术及应用微生物的基本培养技术培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养物质分类按物理性质分按功能用途分液体培养基固体培养基选择培养基鉴别培养基用于扩大培养用于微生物分离、鉴别、活菌计数、菌种保藏成分水无机盐碳源调节PH的物质氮源特殊营养物质O2用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累微生物或积累代谢产物无菌技术消毒灭菌微生物的基本培养技术培养基成分水无机盐碳源调节PH的物质氮源特殊营养物质O2无菌技术消毒灭菌煮沸消毒法巴氏消毒法化学药物消毒法紫外线消毒法日常食品、器具不耐高温的液体表面消毒空间消毒灼烧灭菌干热灭菌湿热灭菌接种工具、其他金属用具玻璃器皿、金属用具高压蒸汽灭菌培养基及容器纯培养微生物的基本培养技术培养基成分水无机盐碳源调节PH的物质氮源特殊营养物质O2无菌技术消毒灭菌纯培养概念纯培养物纯培养培养物由单一个体繁殖所获得微生物群体获得纯培养物的过程培养基上培养出来的微生物群体酵母菌纯培养制备培养基接种和分离培养结果分析与评价灭菌配制培养基倒平板称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min。将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h。制备培养基灭菌配制培养基制备培养基倒平板待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。(1)培养基要冷却到50℃左右时开始倒平板。温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。(2)要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。(3)倒平板时，要用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。(4)平板冷凝后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，平板倒置后，既可避免培养基表面的水分过快地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

名师解读接种和分离①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液⑥将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞③试管口通过火焰⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次②划线首尾不能相接③每次划线前接种环进行灭菌④划线后,培养皿倒置培养⑤一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。注意事项平板划线法操作过程中几次灼烧接种环的目的灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞杀死接种环上原有微生物培养

完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-28h。结果分析与评价未接种培养基表面是否有菌落生长？接种的培养基表面是否出现单菌落，菌落大小、形状、颜色是否一致，是否复合微生物的特征？若培养基表面出现了其他菌落，可能有哪些原因引起？B1.(2023·湖北襄阳四校联考)微生物培养过程中，要重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作，正确的是(

) A.煮沸消毒法中100℃煮沸5～6min可以杀死全部微生物的细胞和芽孢、孢子B.将接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌 C.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌 D.家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌B3.(2023·江苏南京调研)下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是(

)A.步骤①后需将培养基灭菌并调节pHB.步骤①②③操作时需要在酒精灯火焰附近进行C.步骤③到④的过程中，接种环共灼烧处理了5次D.图中步骤①结束后需倒置平板，④结束后不需要微生物的选择培养和计数选择培养选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基筛选土壤中分解尿素的细菌：培养基以尿素为唯一氮源筛选土壤中耐高温的微生物：培养基放置在高温环境中筛选能利用大气中N2的微生物：培养基缺少氮源筛选自养微生物：培养基无有机碳源筛选真菌：培养基加入青霉素实例培养过程涂布平板法配置选择培养基添加尿素作唯一氮源浓度梯度稀释选择培养选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基筛选土壤中分解尿素的细菌：培养基以尿素为唯一氮源筛选土壤中耐高温的微生物：培养基放置在高温环境中筛选能利用大气中N2的微生物：培养基缺少氮源筛选自养微生物：培养基无有机碳源筛选真菌：培养基加入青霉素实例培养过程涂布平板法配置选择培养基添加尿素作唯一氮源浓度梯度稀释培养与观察细菌一般在30-37℃的温度下培养1-2d每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。结果分析与评价有无杂菌污染对照的空白培养基有无菌落生长有无筛选作用选择培养基上的菌落和非选择培养基上的菌落数量对比样品稀释是否合适得到3各或三个以上菌落数目在在30~300平板实验结果是否可靠同一土壤、同一稀释度的重复组结果相近注意事项④本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例：标记注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。③第一次做实验可以将稀释范围放宽，将1×103~1×107倍稀释的稀释液分别涂到平板上培养，确保能从中选择出菌落数为30~300的平板进行计数①取土样时的铁铲和取样纸袋在使用前要灭菌，操作完成之后要洗手②不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精课本19页数量测定稀释涂布平板法选择30~300菌落数的平板进行计数，在同一稀释度下选择3个或3个以上的平板取平均值缺点统计菌落数目结果比活菌的实际数目少当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只有一个菌落原因显微镜直接计数法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板在显微镜下观察计数缺点统计细菌数目结果比活菌的实际数目多统计的结果是活菌和死菌的总和原因课本18页C1.(2023·山东淄博月考)某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验，包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。下列与此实验相关问题的叙述，正确的是(

) A.实验用过的带菌培养基经过加热后才能倒掉 B.可利用平板划线法对细菌进行分离纯化并计数 C.培养基中含有的蛋白胨主要为细菌培养提供氮源和维生素等 D.观察细菌培养的实验时，最好是在另一平板上接种清水作为对照实验5.(2023·江西九江质检)在筛选纤维素分解菌的培养基中加入刚果红染料，研究者观察到几个有透明圈的菌落。据图分析正确的是(

)CA.透明圈内的刚果