蒲公英有效成分质量评价技术规程

1DBXX/XXXXX—XXXX本规程规定了蒲公英样本的采集、处理方法、成分提取方法、成分检测方法、质量评级方法及标准本规程适用于蒲公英样本有效成分含量的综合评价和质量评级。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本规程必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本规程；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规程。《中华人民共和国药典》（一部）3术语和定义下列术语和定义适用于本规程3.1蒲公英本规程中的蒲公英为菊科植物蒲公英（TaraxacummongolicumHand.-Mazz.）、碱地蒲公英（TarxacumborealisinenseKitam.）或其他蒲公英同属（Taraxacum）植物。3.2样本和样本采集本规程中的样本按《中华人民共和国药典》为蒲公英干燥全草部分。本规程中的样本为按照规定方式采集的一定生长条件下的蒲公英样本，样本采集后应注明采收地点、时间、批次、部位、是否混样等标识。4样本处理样本洗净、除杂，在60℃通风条件下烘干，粉碎，过6号筛，随后移至干燥器中，备用。得到的干样品按《中华人民共和国药典》通则0832第二法测定，含水量不高于13%。5有效成分提取5.1单咖啡酰酒石酸（C13H12O9）2DBXX/XXXXX—XXXX称取0.5g～1g的样品粉末，放入50mL具塞试管中，加入15mL纤维素酶水溶液（纤维素酶质量分数0.1%，酶活性不低于2000U/g，pH=4旋紧并于60℃条件下震荡水浴30min，随后加入15mL甲醇转移至超声波水浴中，水浴温度60℃~70℃,超声波功率100W～400W，超声时间30min，全程旋紧盖子，如果水分散失则用50%甲醇溶液按总质量补足。待试管冷却至室温后，将提取液用0.22μm~0.45μm滤膜过滤注入进样瓶中，待测。5.2绿原酸（C16H18O9）照5.1中的方法提取蒲公英绿原酸。5.3咖啡酸（C9H8O4）按《中华人民共和国药典》2015版中的蒲公英供试品溶液的制备方法提取。5.4菊苣酸（C22H18O12）按《中华人民共和国药典》2020版中的蒲公英供试品溶液的制备方法提取。6有效成分含量测定6.1单咖啡酰酒石酸（C13H12O9）照《中华人民共和国药典》高效液相色谱法（通则0512）测定。仪器设备为安捷伦高效液相色谱仪1200系列或同等或以上性能的色谱仪；色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂且具有一定耐酸（水）能力（MarsODS-AQ4.6mm×250mm，5µm）或其他同等性能的色谱柱；以甲醇（A）和体积分数0.2%的磷酸水溶液（B）为流动相，其中B的比例为60%～70%，进样量5µL，流速1mL/min，等度洗脱；紫外检测波长327nm。理论板数按单咖啡酰酒石酸峰计算应不低于3000。6.2绿原酸（C16H18O9）照6.1中的方法测定蒲公英绿原酸含量，理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000。6.3咖啡酸（C9H8O4）按《中华人民共和国药典》2015版中的蒲公英咖啡酸含量测定方法测定。6.4菊苣酸（C22H18O12）按《中华人民共和国药典》2020版中的蒲公英菊苣酸含量测定方法测定。7蒲公英质量评价3DBXX/XXXXX7.1有效成分含量分级按蒲公英有效成分含量对照表1划分各成分含量的级别。表1蒲公英各有效成分含量（%）对应的级别指标/级别12345单咖啡酰酒石酸≥0.400≥0.300≥0.200≥0.100<0.100绿原酸≥0.250≥0.150≥0.085≥0.030<0.030咖啡酸≥0.045≥0.035≥0.025≥0.015<0.015菊苣酸≥0.750≥0.650≥0.500≥0.300<0.3007.2蒲公英质量指数按蒲公英各有效成分含量的级别计算蒲公英质量指数。iQI=4×5式中：QI－蒲公英质量指数，%；Gi—各有效成分对应的级别；4—有效成分指标总数量；5—蒲公英质量级数值。7.3蒲公英质量等级评价以蒲公英质量指数为评价指标，将蒲公英质量划分为5个等级，见表2。表2质量指数分级标准质量等级质量指数（QI，%）成分含量1QI≤25超等225<QI≤45高345<QI≤60460<QI≤75合格575<QI≤100低4DBXX/XXXXX—XXXX（资料性）蒲公英有效成分质量等级评定说明A.1蒲公英主要成分指标的确定《中华人民共和国药典》2020版规定了蒲公英饮片中菊苣酸含量不得少于0.3%，药材中菊苣酸含量不得少于0.45%；2015版及之前版本则规定咖啡酸含量不得少于0.02%。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》对大量蒲公英样本数据分析，发现单咖啡酰酒石酸和绿原酸也是共有的优势成分。这些成分均为咖啡酸的衍生物属于酚酸类，在功效上具有相似性，在提取及含量检测方法上也具有一致性，因此确定以上述四种成分的含量为依据，综合评价蒲公英的质量。A.2蒲公英成分级别的划分目前河北省农林科学院滨海农业研究所已在河北省范围内不同的生长季节、种植环境等条件下采集了蒲公英材料200余份，并对这些材料成分进行检测，同时一部分材料委托中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、谱尼测试公司共同检测，检测样本共计578份，结果发现单咖啡酰酒石酸、绿原酸、咖啡酸、菊苣酸等4种成分的含量范围是0.023～0.642%、0.001～0.534%、0.001～0.060%、0.018~2.173%，平均含量分别为0.170%、0.083%、0.015%和0.383%。随后又进一步频次统计、偏度分析、聚类分析等综合统计分析，以平均数、众数和中位数为参考值，结合《药典》、文献报道以及实际需要等综合确定上下浮动比例，据此按照含量从高到底划分为5级，最高为1级。A.3蒲公英综合质量等级的评定由于所有《中华人民共和国药典》版本中均规定一种成分，即咖啡酸或菊苣酸的含量为评价蒲公英质量的依据，然而目前研究已经证实蒲公英功效成分不止一种，对于仅凭一种成分判断蒲公英质量存在争议，多指标评价蒲公英质量已经成为共识。通过大量样本的统计分析确定蒲公英的主要优势成分，然后再根据各主要成分的贡献值综合确定蒲公英质量，这样就避免了单一指标评价的偏颇性。蒲公英成分复杂，它的药效是多种成分共同作用的结果，目前仍然没有研究明确指出蒲公英的具体成分及其具体功效，对于传统中医药理论来说这样的研究也没有实际意义。但总体上主要成分含量高的蒲公英总体药效也相对较好。因此在蒲公英复杂的成分中确定含量相对优势的成分，能够在一定程度上反映蒲公英的总体质量，也能够减少蒲公英质量评价的工作量。综合质量评定的原则体现了“高标准”的要求，具体操5DBXX/XXXXX—XXXX作为将质量分为5级，1级的蒲公英数量最少质量最高，而大部分蒲公英划入到2-5级。按概率统计，质量1～5级的概率分别为0.8%、18