微生物的纯培养与显微技术

关于微生物的纯培养与显微技术第一节微生物的分离和纯培养一、相关概念培养物（culture）：在微生物学中，指在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体。纯培养物（pureculture）：只有一种微生物的培养物。无菌技术（aseptictechnique）：指在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术。第2页,共63页，2024年2月25日，星期天二、无菌条件1、微生物培养用的常用器具

试管、玻璃三角烧瓶、平皿2、灭菌方式

高压蒸汽灭菌、高温干热灭菌、化学试剂、紫外射线、微波、过滤等3、接种操作1）、对操作环境灭菌2）、对接种工具的灭菌3）、接种过程的无菌操作第3页,共63页，2024年2月25日，星期天高压蒸汽灭菌锅超净工作台第4页,共63页，2024年2月25日，星期天三、固体培养基分离纯培养（一）相关概念1、菌落（colony）：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。2、菌苔（lawn）：当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。第5页,共63页，2024年2月25日，星期天细菌菌落形态第6页,共63页，2024年2月25日，星期天第7页,共63页，2024年2月25日，星期天第8页,共63页，2024年2月25日，星期天第9页,共63页，2024年2月25日，星期天（二）微生物分离的手段1、稀释倒平板法（pourplatemethod）

分离材料无菌水倍比稀释取不同稀释液少许

倒入45-50℃琼脂培养基混合倒入培养皿培养第10页,共63页，2024年2月25日，星期天2、涂布平板法（spreadplatemethod）一定稀释度的样品滴加在平板表面

无菌玻璃涂棒涂布菌液均匀分散整个平板表面

第11页,共63页，2024年2月25日，星期天3、平板划线法（streakplatemethod）第12页,共63页，2024年2月25日，星期天4、稀释摇管法（dilutionshakeculturemethod）第13页,共63页，2024年2月25日，星期天四、液体培养基分离纯培养1、原因不是所有的微生物都能在固体培养基上生长。例如：许多原生动物、藻类、大细胞细菌等。2、方法

稀释法（必须在同一个稀释度的许多平行试管中，应超过95%表现为不生长）第14页,共63页，2024年2月25日，星期天五、单细胞（孢子）分离直接采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。第15页,共63页，2024年2月25日，星期天六、选择培养分离（一）原因：1、单一培养不能满足所有微生物生长。2、微生物对培养条件的选择。3、微生物对营养的竟争。（二）分离方法1、利用选择平板进行直接分离

依据：利用微生物自身特点选择分离条件，如耐高温、产特殊酶类等。第16页,共63页，2024年2月25日，星期天2、富集培养

本质：使要分离的目的微生物的数量大大增加。

富集条件：根据所需分离的微生物的特点进行选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等等许多方面。

第17页,共63页，2024年2月25日，星期天3、微生物的直接培养

方法：利用微生物自然生长条件下加入选择条件。

原理：自然条件下微生物的多样性，代谢的多样性，微生物作用的协调性（分工合作）。第18页,共63页，2024年2月25日，星期天七、二元培养物（一）概念

二元培养物：培养物中只含有二种微生物，而且是有意识的保持二者之间的特定关系的培养物。（二）应用方面

严格寄生物的分离、特殊共生关系的微生物的分离。第19页,共63页，2024年2月25日，星期天八、微生物的保藏技术1、意义2、菌种保藏机构（P19）3、保藏方法1）传代培养保藏注意：a、应根据微生物不同特性选择培养基。b、传代时间

2）冷冻保藏

注意：a、冰晶形成对细胞伤害。b、要快速升降温。c、加入保护剂第20页,共63页，2024年2月25日，星期天3）干燥保藏法

a、沙土管保存

适用于产孢子的微生物，如芽孢杆菌、放线菌等。

b、冷冻真空保藏

将有保护剂样品先冻结，然后真空作用下除去水分，置真空或惰性气体的密闭环境中低温保存。4）其它方法纸片保藏、薄膜保藏、寄主保藏等第21页,共63页，2024年2月25日，星期天第二节显微镜下的微生物第22页,共63页，2024年2月25日，星期天一、细菌、放线菌和古生菌

原核微生物分为真细菌和古生菌，真细菌又分为细菌、放线菌。1、细菌的形态和排列

1）一般形态球状、杆状与螺旋状三种

第23页,共63页，2024年2月25日，星期天第24页,共63页，2024年2月25日，星期天2)细菌的排列

许多细菌也常以成对、成链、成簇的形式生长。第25页,共63页，2024年2月25日，星期天第26页,共63页，2024年2月25日，星期天3）其它形态柄杆菌（prosthecatebacteria）细胞上有柄（stalk）、菌丝（hyphae）、附器（appendages）等细胞质伸出物，细胞呈杆状或梭状，并有特征性的细柄。第27页,共63页，2024年2月25日，星期天fivecellsareatachedbytheirstalks.第28页,共63页，2024年2月25日，星期天

Anelectronmicrographofametal-shadowedpreparationofPlanctomycesmaris.Asinglecellisabout1-1.5umlong.Notethefibrillarnatureofthestalk.Piliarealsoabundant.Notealsotheflagella(curlyappendages)oneachcellandthebudthatisdevelopingfromthenonstalkedpoleofonecell.第29页,共63页，2024年2月25日，星期天PhotomicrographsofcellsofHyphomicrobium.Byphasecontrast,showingtypicalfields.Noticethelonghyphaeandtheoccasionalbuddingcell第30页,共63页，2024年2月25日，星期天

球衣菌（Sphaerotilus），能形成衣鞘（sheath），杆状的细胞呈链状排列在衣鞘内而成为丝状.第31页,共63页，2024年2月25日，星期天细胞呈星形和方形的细菌

第32页,共63页，2024年2月25日，星期天支原体（Mycoplasma）由于只有细胞膜，没有细胞壁，故细胞柔软，形态多变，具有高度多形性。第33页,共63页，2024年2月25日，星期天第34页,共63页，2024年2月25日，星期天Donotproducecellwalls

Haveagramnegative-likemembranestructure第35页,共63页，2024年2月25日，星期天4）繁殖方式：无性繁殖：裂殖

第36页,共63页，2024年2月25日，星期天有性繁殖：细菌结合conjugation第37页,共63页，2024年2月25日，星期天2、放线菌1）菌丝形态：营养菌丝、气生菌丝和孢子丝（鉴定指标）第38页,共63页，2024年2月25日，星期天ChainofconidiosporesAgarsurfaceSubstratemyceliumAerialhyphae第39页,共63页，2024年2月25日，星期天孢子丝不同形态第40页,共63页，2024年2月25日，星期天3、古生菌

古生菌与细菌具有类似的个体形态，但它们多生活于一些生存条件十分恶劣的极端环境中，例如高温、高盐、高酸等。隐蔽热网菌（Pyrodictiumoccultum）是迄今所发现的最耐热的生物之一，它的最适生长温度为105℃

第41页,共63页，2024年2月25日，星期天从热泉中分离出的火山热原体（Thermoplasmavolcanium）细胞电镜照片热原体（Thermoplasma）没有细胞壁，其形态也象细菌中的支原体一样呈多形性。第42页,共63页，2024年2月25日，星期天4、原核生物的细胞大小1）随种类不同而变化2）影响细菌形态变化的因素

第43页,共63页，2024年2月25日，星期天二、真菌

1、特点：

种类繁多，形态各异、大小悬殊，细胞结构多样。2、霉菌（mold）

霉菌菌体均由分枝或不分枝的菌丝（hypha）构成。许多菌丝交织在一起，称为菌丝体（mycelium）。Filamentousfungi第44页,共63页，2024年2月25日，星期天1）无隔膜菌丝(nonseptatehypha)

整个菌丝为长管状单细胞，细胞质内含有多个核。其生长过程只表现为菌丝的延长和细胞核的裂殖增多以及细胞质的增加。如根霉、毛霉、犁头霉等。第45页,共63页，2024年2月25日，星期天2）有隔膜菌丝(septatehypha)

菌丝由横隔膜分隔成成串多细胞，每个细胞内含有一个或多个细胞核。第46页,共63页，2024年2月25日，星期天3）相关概念营养菌丝：在固体培养基上，部分菌丝伸入培养基内吸收养料的菌丝。气生菌丝：向空中生长的菌丝。繁殖菌丝：由气生菌丝发育到一定阶段，分化而成的。第47页,共63页，2024年2月25日，星期天4）繁殖方式无性生殖：菌丝断裂、产生孢子

厚垣孢子第48页,共63页，2024年2月25日，星期天分节孢子

第49页,共63页，2024年2月25日，星期天分生孢子第50页,共63页，2024年2月25日，星期天有性生殖：准性生殖第51页,共63页，2024年2月25日，星期天第52页,共63页，2024年2月25日，星期天3、酵母菌1）繁殖方式无性生殖：芽殖或裂殖

第53页,共63页，2024年2月25日，星期天有性繁殖：产生子囊孢子新型隐球酵母（Cryptococcusneoformans）第54页,共63页，2024年2月25日，星期天2）形态单细胞呈卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬形第55页,共63页，2024年2月25日，星期天多细胞相连成为链状：假丝酵母第56页,共63页，2024年2月25日，星期天3）作用

a、有利面：在酿造、食品、医药、饲料方面应用。

b、