(高清版)GBT 43745-2024 饲料原料 发酵豆粕

饲料原料发酵豆粕2024-03-15发布2024-10-01实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本文件起草单位：中国农业科学院饲料研究所、湖北邦之德牧业科技有限公司。1饲料原料发酵豆粕述了相应的试验方法。本文件适用于以豆粕为主要原料(≥95%),使用农业农村部《饲料添加剂品种目录》中批准使用的微生物菌种进行固态发酵，并经干燥制成的蛋白质饲料原料产品。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB5009.228—2016食品安全国家标准食品中挥发性盐基氮的测定GB/T6432饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法GB/T6434饲料中粗纤维的含量测定过滤法GB/T6435饲料中水分的测定GB/T6438饲料中粗灰分的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T8622饲料用大豆制品中尿素酶活性的测定GB10648饲料标签GB13078饲料卫生标准GB/T14699.1饲料采样GB/T18246饲料中氨基酸的测定GB/T18823饲料检测结果判定的允许误差GB/T20195动物饲料试样的制备GB/T22492—2008大豆肽粉3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4技术要求4.1原料要求4.2外观与性状2应符合表1的要求。一级二级粗蛋白质/%≥45.0粗灰分/%≤酸溶蛋白(占粗蛋白质比例)/%≥尿素酶/(U/g)≤水苏糖/%≤β-伴大豆球蛋白/(mg/g)≤80.0挥发性盐基氮(以N计)/(mg/100g)≤80.0应符合GB13078的要求。按GB/T14699.1的规定执行。6试验方法6.1外观与性状检验从抽取的样品中，取适量倒在白纸或白瓷板上，在光线充足的条件下，观察颜色和状态，并闻其气味。6.2粗蛋白质按GB/T6432的规定执行。6.3粗纤维3按GB/T6435的规定执行。按GB/T22492—2008附录B中B.4.1按GB/T18246的规定执行。6.8尿素酶按GB/T8622的规定执行。6.9水苏糖按附录A的规定执行。按附录B的规定执行。6.11挥发性盐基氮按GB5009.228—2016中第二法自动凯氏定氮仪法执行，在10.3步骤之前样品需过滤或离心，取清液。6.12卫生指标按GB13078的规定执行。7检验规则以同一批原料、相同生产工艺、连续生产或同一班次生产的同一规格的产品为一批，但每批产品不应超过100t。7.3型式检验型式检验项目为4.2～4.4规定的项目。在正常生产情况下，每半年至少进行1次型式检验。有下列情况之一，也应进行型式检验：a)新产品投产时；b)生产工艺、配方或主要原料来源有较大改变，可能影响产品质量时；c)产品停产3个月以上，恢复生产时；d)出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；e)饲料行政管理部门提出检验要求时。47.4判定规则7.4.1所检验项目全部合格，判定该批次产品合格。7.4.2检验结果中有任何指标不符合本文件规定时，可自同批产品中重新加倍取样进行复检。若复检结果仍不符合本文件规定，则判定该批产品不合格。微生物指标不应复检。7.4.3检验结果判定的允许误差按GB/T18823的规定执行。7.4.4各项目指标的极限数值判定按GB/T8170中修约值比较法执行。按GB10648的规定执行。8.3运输运输中防止包装破损、日晒、雨淋，不应与有毒有害物质共运。贮存时防止日晒、雨淋，不应与有毒有害物质混贮。8.5保质期未开启包装的产品，在规定的运输、贮存条件下，产品保质期应与标签中标明的保质期一致。5(规范性)发酵豆粕中水苏糖含量测定方法A.1原理用水提取试样中的水苏糖，然后采用高效液相色谱法(HPLC)测定其含量。A.2试剂或材料A.2.3三氯乙酸。A.2.4水苏糖标准储备溶液(10mg/mL):精确称取水苏糖0.5000g,用水溶解并定容至50mL。临用A.2.5水苏糖标准系列溶液：分别取水苏糖标准储备溶液(A.2.4)25μL、50μL、75μL、100μL、125μL、150μL,于HPLC进样瓶中，分别加水至1.00mL,制成质量浓度分别为0.25mg/mL、0.50mg/mL、0.75mg/mL、1.00mA.3仪器设备A.3.3超声波清洗仪。A.3.4离心机：转速不低于12000r/min。A.4样品按GB/T20195制备样品，粉碎过筛(孔径0.25mm),备用。A.5试验步骤A.5.1试样溶液的制备精确称取发酵豆粕样品2g(精确至0.0001g),加20mL水，于超声波清洗仪中，超声提取15min,将浸提液于70℃水浴1h,加入0.5g三氯乙酸，混匀后，置冰浴中2h,在12000r/min条件下A.5.2色谱参考条件色谱参考条件如下：a)色谱柱：氨丙基键合固定相柱，柱长250mm,内径4.1mm或其他可分析单糖和低聚糖的性能相当的色谱柱；c)流动相：乙腈-水(75+25);6A.5.3测定在仪器最佳状态下分别测定水苏糖标准系列溶液和试样溶液(A.5.1)中的水苏糖含量。试样溶液重复测定2次。以色谱峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线。根据试样溶液色谱峰面积对照水苏糖的标准曲线计算样品浓度。A.6试验数据处理试样中水苏糖的含量w表示为试样中的质量分数，以%计，按式(A.1)计算：式中：p——标准曲线上查得试样溶液中水苏糖的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);V——试样溶液的体积，单位为毫升(mL);m——试样的质量，单位为克(g);1000——换算系数。A.7精密度在重复性条件下，2次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的2%。7(规范性)发酵豆粕中β-伴大豆球蛋白含量测定方法B.1方法原理采用间接竞争酶联免疫法(ELISA法)。在酶标板上预包被β-伴大豆球蛋白抗原，样品中的β-伴大豆球蛋白和预包被的抗原竞争β-伴大豆球蛋白抗体，加入酶标二抗后，用四甲基联苯胺(TMB)底色液显色，样品吸光度值与其所含β-伴大豆球蛋白的含量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数即可得出样品中β-伴大豆球蛋白的含量。B.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。B.2.2弗氏不完全佐剂。B.2.3包被缓冲液(0.05mol/L,pH9.6的碳酸缓冲液):准确称取1.59g碳酸钠(Na₂CO₃)和2.93g碳酸氢钠(NaHCO₃),将其混溶于1000mL蒸馏水中。B.2.4封闭液：用包被缓冲液配制5%的脱脂牛奶。B.2.530×浓缩样品提取液：181.7gTris、73mL盐酸(HCl)和21mLβ-巯基乙醇，定容至1000mL蒸馏水中。B.2.6样品稀释液：0.9%氯化钠溶液。B.2.7抗体工作液：5.0g牛血清白蛋白(BSA)、1.0mLProclin-300、100mL0.2mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)、0.05g亮蓝、β-伴大豆球蛋白抗体1mg。PBS100mL和0.5mg辣根过氧化物酶标记羊抗鼠抗体，定容至1000mL蒸馏水中。B.2.10显色液A:40.0g磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)、10.0g一水柠檬酸和0.5g过氧化氢脲，定容至1000mL。B.2.11显色液B:2.0g一水合柠檬酸、150mL无水甲醇、0.55gTMB和100mLN,N-二甲基甲酰胺，定容至1000mL蒸馏水中。B.2.13标准系列溶液：0μg/mL、0.2μg/mL、0.4μg/mL、1.6μg豆球蛋白。B.3仪器设备B.3.2离心机：转速≥4000r/min。B.3.3分光光度计。按GB/T20195制备样品，粉碎过筛(孔径0.25mm),备用。8B.5实验步骤B.5.1.1抗原制备：将低温脱脂未变性的大豆粉以1:10的料水质量比分散于温度为40℃~50℃、pH8.0～11.0[1mol/L氢氧化钠(NaOH)调制]的水中，除去非可溶性成分；分散过程在机械搅拌或超声波处理的条件下处理45min;调整溶液离子强度为0.05～1.0,pH5.0～6.0(35%HCl调制),在4000r/min～7000r/min离心，得到的上清液用酸调pH至4.0～5.0(35%HCl调制),然后在2只新西兰白兔，采用6周免疫程序。兔子先适应性喂养1周。兔子免疫前先于一侧耳缘抽取2mL静脉血，4℃静置过夜，取血清作阴性对照。对脊柱两侧进行多点背部皮下注射(剂量为每只100μg免疫原);初次免疫后第15天，再用弗氏不完全佐剂抗原腹腔静脉加强免疫1次，1周1次，共3次。免疫后的第25天和第38天取血，间接ELISA法测定抗体效价，Westernblot法观察免疫反应条带，检测免疫效果。效价达到要求后，用无佐剂抗原免疫1次，免疫第3天后颈动脉采血收集血清，3000r/min离心20min。收获的抗血清用甘油1:1稀释，于一20℃保存。B.5.2预包被抗原酶标板的制备液，37℃温育1h,洗涤1次，然后拍干，放入自封袋中，于4℃干燥保存。B.5.3.1称样：称取0.3000g样品于50mL离心管中。B.5.3.2提取：装有样品的50mL离心管中再加入30mL1×样品提取工作液，于25℃振荡提取16h。B.5.3.3离心：振荡后静置2min,取上层液体于离心机中4000r/min离心5min。加600μL1×样品稀释工作液混匀，再取混合液100μL加900μL1×样品稀释工作液混匀),待测。B.5.4测定步骤B.5.4.1将所需试剂和酶标板从4℃冰箱中取出，回温至20℃~25℃,试剂使用前摇匀。B.5.4.2编号：将样品和对照品对应酶标板微孔按序编号，每个样品和对照品做2孔平行，并记录对照品孔和样品孔所在的位置。25.6μg/mL)以及待测样品各取50μL加至对应的酶标板微孔中，再加入抗体工作液50μL/孔，轻轻振荡混匀。盖上盖板膜，37℃避光反应30min。B.5.4.6显色：将等体积显色液A与显色液B混匀(显色液现用现混，5min内用完，混匀时请勿剧烈振荡);每孔加入混合液100μL,盖上盖板膜，37℃,避光反应15min。9B.6试验数据处理B.6.1百分吸光率计算对照品或样品的百分吸光率等于对照品或样