微生物实验微生物数量和大小测定

学习使用镜台测微尺和目镜测微尺；在显微镜下测定微生物大小。试验(一)微生物大小测定一、目标要求微生物实验微生物数量和大小测定第1页二、试验原理镜台测微尺是中央部分刻有准确等分线载玻片，普通是lmm等分为100格，每格长0.01mm(即10um)，用于校正目镜测微尺每格相对长度。目镜测微尺是一块可放入接目镜内圆形小玻片，其中央有准确等分刻度。目镜测微尺每小格所代表实际长度不一样，需将其放在接目镜中隔板上，测量前，必须先用镜台测微尺进行校正。微生物实验微生物数量和大小测定第2页目镜测微尺镜台测微尺1.利用镜台测微尺测定目镜测微尺每格绝对值2.目镜测微尺每格长度（um）＝两重合线间镜台测微尺格数×10/两重合线间目镜测微尺格数3.利用目镜测微尺测定微生物大小微生物实验微生物数量和大小测定第3页三、试验器材

1、菌种：酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）2、器材：显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺微生物实验微生物数量和大小测定第4页三、试验步骤

1、目镜测微尺校正镜台测微尺有刻度一面朝上，置显微镜载物台上，先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度部分移至视野中央．转动目镜使目镜测微尺刻度与镜台测微尺刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，分别数出两重合线之间镜台微尺和目镜微尺所占格数。先10x，后40x，分别计算10x,40x下目镜测微尺校正值。2、细胞大小测量酵母菌悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片，置显微镜载物台上。用目镜测微尺测量细胞宽和长。微生物实验微生物数量和大小测定第5页三、试验结果1.计算出目镜测微尺校正结果（物10×和40×）2.酵母菌大小测定酵母菌大小测定,选择5-8个酵母菌，测定其40×大小范围。四、思索题p512(2)微生物实验微生物数量和大小测定第6页1、明确血细胞计数板计数原理。2、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数方法。

试验(二)微生物数量测定一、目标要求微生物实验微生物数量和大小测定第7页显微镜直接计数法是将小量待测样品悬浮液置于一个尤其含有确定面积和容积载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数一个方法。用于细胞总数测定显微镜直接计数法优点是直观、快速。缺点是所测得结果通常是死菌体和活菌体总和。当前已经有一些方法能够克服这一缺点，如结合活菌染色，微室培养等方法来到达只计数活菌体目标。

二、试验原理微生物实验微生物数量和大小测定第8页血细胞计数板由两条槽组成三个平台；中间较宽平台又被一短横槽隔成两半，每一边平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为八个大方格，中间大方格即为计数室。计数室是由一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；共计400个小方格。计数时，通常数五个中方格总菌数，然后求得每个中方格平均值，以及大方格中总菌数，再换算成1ml菌液中总菌数。微生物实验微生物数量和大小测定第9页１个计数室＝１×１mm包含５×５个中方格１个中方格＝４×４个小方格微生物实验微生物数量和大小测定第10页三、试验器材

1、菌种：酿酒酵母、大肠杆菌2、器材：显微镜、血球计数板微生物实验微生物数量和大小测定第11页三、试验步骤

1、在10×和40×下找到计数室。2、盖上盖玻片将摇匀酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室。3、静置5min，先用低倍镜将计数室移至视野中央。4、在高倍下(40X)计数：对两个计数室记数，方法：每个计数室选5个中格(4个角和中央一个中格)中菌体进行计数，求得每个中方格平均值，再乘上25即为大方格中总菌数，最终换算成1ml菌液中总菌数。对于分布在刻线上细胞，依照“数上不数下，数左不数右“标准进行计数。5、最终结果是两个计数室所记菌数平均值微生物实验微生物数量和大小测定第12页三、试验结果

1、统计每个计数室（五个中格）细胞数量四、思索题p562(1)记数中格12345细胞记数2、计算每ml酵母菌悬液酵母菌数量。稀释倍数为1记数中格12345细胞记数微生物实验微生物数量和大小测定第13页经过细菌数量测量了解大肠杆菌生物特征和规律，绘制生长曲线。了解光电比浊计数法原理。学习、掌握光电比浊计数法操作方法。

试验(三)大肠杆菌生长曲线测定一、试验目标微生物实验微生物数量和大小测定第14页生长曲线

将少许纯种单细胞微生物接种到定量液体培养基中，定时取样测定细胞数量，以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作图，得到一条反应单细胞微生物在整个培养期间菌数改变规律曲线。二、试验原理一个经典生长曲线分为延缓期、对数期、稳定时和衰亡期四个时期微生物实验微生物数量和大小测定第15页稀释平板计数法对样品稀释培养，据形成菌落数计数。优点：活菌计数方法，对设备要求不高。缺点：操作复杂。显微镜直接计数法使用血球计数板在显微镜下直接计数。优点：操作简便，计数直观。缺点：计数结果为活细菌和死菌体总和。测定细胞数量惯用方法微生物实验微生物数量和大小测定第16页光电比浊法光电比浊法是利用在一定范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比原理。当细菌细胞在溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中测定时所吸收光线越多。优点：简便快速，适合于自动控制。

缺点：测定结果受培养液成份影响；一些样品样品不适适用此法。

微生物实验微生物数量和大小测定第17页菌种培养不一样时段大肠杆菌。仪器或其它用具分光光度计，比色皿等。三、试验器材微生物实验微生物数量和大小测定第18页开电源，仪器预热20min，将波长调至600nm处。打开样品室，将档光体插入比色皿架，将其推或拉入光路。盖好样品室盖，在TMODE下，按0%T键调零透射比。取出档光体，按100%T/OA键调100%透射比。四、试验步骤1.样品测试前调试微生物实验微生物数量和大小测定第19页2.样品测定将参比溶液（未接种LB液体培养基）以及被测溶液倒入比色皿中。打开样品室盖，将参比溶液放在样品架第一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽位。将参比溶液推入光路，按100%T/OA键调满度。按MODE，将测试方式调至吸光度方式（A）。此时,显示器显示“0.000”。将被测溶液推入光路，显示器显示为被测样品吸光值。微生物实验微生物数量和大小测定第20页

在600nm波长下，用未接种LB液体培养基作空白对照，分别对培养了0、4、8、12、16和20h大肠杆菌培养液，进行光电比浊测定。对于高浓度大肠杆菌培养液,要用