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文档简介
蛋白质的透析实验蛋白质的透析实验第1页试验原理透析是膜技术一个,利用透析膜能够选择性透过一定大小分子,从而将待分离纯化物质和杂质离子分离开。透析膜是半透膜,蛋白质是大分子物质,它不能透过透析膜,而小分子物质能够自由经过透析膜与周围缓冲溶液进行溶质交换,进入到透析液中。常见透析有:蛋白质透析和糖类透析。蛋白质的透析实验第2页透析装置(原理图)透析装置和透析过程示意图蛋白质的透析实验第3页试验仪器磁力搅拌器蛋白质的透析实验第4页器材与试剂器材:透析袋,烧杯,玻璃棒,磁力搅拌器,试管及试管架。试剂:饱和氯化钠溶液,10%硝酸溶液,1%硝酸银溶液,10%氢氧化钠溶液,1%硫酸铜溶液。蛋白质的透析实验第5页操作步骤透析袋处理:普通是将透析袋剪成10~20cm小段,在2%(W/V)NaHCO3和1mmol/LEDTA(pH8.0)中煮沸10min,用蒸馏水彻底洗尽透析袋,然后放在1mmol/LEDTA(pH8.0)中煮沸10min,用蒸馏水彻底洗尽透析袋,冷却后,存放于4℃,从此时起取用透析袋,必须戴手套检验透析效果方法:用1%BaCl2检验(NH4)2SO4,用1%AgNO3检验NaCl、KCl等蛋白质的透析实验第6页操作步骤
装样
取一段透析袋10~15cm,将其一端用棉绳扎死,由开口端加入约5ml待透析样品溶液(蛋白质氯化钠溶液),开口端用棉绳扎死,放入盛有蒸馏水烧杯中,系于一横放在烧杯玻璃棒上。蛋白质的透析实验第7页操作步骤
透析
用磁力搅拌器搅拌促进溶液交换。透析过程中需要更换洗脱溶液数次(约15min一次),至到达透析平衡为止(洗出液中无Cl-),约需1h.蛋白质的透析实验第8页检验透析效果检验氯离子:自烧杯中取水1~2ml,加10%硝酸溶液数滴使之成酸性,再加入1%硝酸银1~2滴,检验氯离子存在。检验蛋白质:从烧杯中取1~2ml,做双缩脲反应,检验是否有蛋白质存在。双缩脲反应:加10%氢氧化钠1ml,振荡摇匀,再加1%硫酸铜溶液1滴,振荡,观察是否出现粉红色。蛋白质的透析实验第9页注意事项把需要透析样品盛于透析袋内,袋内留有挤去空气空余个别,以防因为溶剂渗透造成样品体积增加而引发透析袋胀破为了取得较快透析
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