临床微生物标本的采集方法与运送

关于临床微生物标本的采集方法与运送

我们应该追求：

“准确的病原学诊断”

“针对性病原学治疗”

正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！

微生物让人类步步为营，第2页,共72页，2024年2月25日，星期天基本原则1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检5.棉拭子标本宜用运送培养基6.混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。8.送检标本应注明来源和检验目的第3页,共72页，2024年2月25日，星期天如何提高细菌阳性检出率？标本采集时机标本采集方法标本的质与量标本的运送与保存镜检筛选合格标本（退检制度）高质量、多种分离培养基培养环境合理的收费制度第4页,共72页，2024年2月25日，星期天血培养标本采集与运送第5页,共72页，2024年2月25日，星期天最新的指导原则浙江省临床实验室血培养指导原则和操作指南（试行）浙江省医学会医学检验分会浙江省临床检验中心浙江省医院感染管理质控中心浙江省临床细菌耐药监控中心浙江省护理学会第6页,共72页，2024年2月25日，星期天血培养的采集时间对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。必须同时或间隔短时间内采集２套以上血培养标本。第7页,共72页，2024年2月25日，星期天血培养的采集次数患者：推荐同时采集２－３套（不同部位）血培养标本。（即双瓶双臂同时采集血培养标本。）婴幼儿患者：推荐同时采集２次（不同部位）血培养标本。第8页,共72页，2024年2月25日，星期天血培养的采血量成年患者：推荐采血量为每套不少于10ml，每瓶不少于5ml。婴幼儿患者：推荐采血量每瓶不少于2ml。（少于病人总血容量的1%）第9页,共72页，2024年2月25日，星期天血液标本在需氧瓶和厌氧瓶中的分配常规血培养组合：一个需氧瓶和一个厌氧瓶作为一套血培养。当被用来做培养的采血量少于推荐值时，血必须首先接种需氧瓶，然后将剩余的血液接种入厌氧瓶。第10页,共72页，2024年2月25日，星期天皮肤消毒推荐使用碘町、洗必泰或碘伏作为皮肤消毒剂。碘町作用1min碘伏作用1.5-2min洗必泰作用时间与碘町一样（但不能用于少于2个月婴儿皮肤消毒）第11页,共72页，2024年2月25日，星期天采集部位推荐从外周静脉采集血液标本。不推荐动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大。不推荐静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本以帮助阳性结果的判读提供解释。第12页,共72页，2024年2月25日，星期天采集方法在采血之前，血培养瓶的橡皮塞需使用70%酒精消毒并干燥。然后再进行穿刺部位的皮肤消毒。严格按照“酒精、含碘消毒剂、酒精”的消毒步骤操作，并等待足够的消毒时间。严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手接触静脉，除非带有无菌手套。不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头。第13页,共72页，2024年2月25日，星期天血培养标本的运送采集后的血培养瓶应在1小时之内送往实验室。血培养瓶在采血接种后在室温不超过数小时。血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏或冷冻。第14页,共72页，2024年2月25日，星期天血培养标本的拒收瓶子上帖的标签错误或未帖标签。血培养瓶打破的、损坏的或渗漏。血液凝固。第15页,共72页，2024年2月25日，星期天培养基的选择推荐使用商品化的培养基使用添加抗菌药物吸附剂的血培养瓶有助于提高已接受抗菌药物治疗患者血培养的检出率，增加细菌的分离率和分离速度，但同时也会增加污染菌的检出率。第16页,共72页，2024年2月25日，星期天真菌血培养真菌血培养采用需氧血培养瓶采集标本。采用中和/灭活抗菌药物的血培养瓶可提高真菌的检出率。自动化血培养系统不能用于双相真菌的检测。第17页,共72页，2024年2月25日，星期天婴幼儿血培养推荐同时采集2次（不同部位）血培养标本。采血量每瓶不少于2ml。（少于病人总血容量的1%）推荐采用儿童专用血培养瓶。第18页,共72页，2024年2月25日，星期天分枝杆菌血培养必须采用特殊的商品化分枝杆菌血培养瓶。所有培养基都必须孵育至少4周。第19页,共72页，2024年2月25日，星期天感染性细菌性心内膜炎急性：在经验性抗生素用药前30min之内采集血培养。亚急性：在30分钟至1小时之内连续抽取数套血培养。最初采集3套血培养。假如这些血培养在24小时之内结果是阴性的，再采集2套血培养，总共5套。第20页,共72页，2024年2月25日，星期天导管相关的血流感染短期外周导管：通过静脉穿刺获得病人的两套外周血培养。无菌操作拔去导管并半定量培养。中心静脉导管及静脉留置口：至少两套血培养，其中至少一套采集自外周血静脉，另一套应该从导管口或VAP隔膜无菌采集，两套血培养采集时间应相近。第21页,共72页，2024年2月25日，星期天痰培养标本采集与运送第22页,共72页，2024年2月25日，星期天病原体种类繁多而复杂使下呼吸道感染病原诊断成为难题细菌（包括放线菌与奴卡菌，厌氧菌与分枝杆菌）真菌（包括肺孢子菌）病毒支原体、衣原体与立克次体原虫寄生虫第23页,共72页，2024年2月25日，星期天咳痰途经口咽部唾液中口咽部定植菌的浓度可达108-109/ml。研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现象。不可避免地受到污染第24页,共72页，2024年2月25日，星期天我国痰细菌培养现状标本送检率低苛养菌检出率极低结果重复性差报告速度慢感染菌与污染菌不易区分药敏结果与治疗反应存在差距第25页,共72页，2024年2月25日，星期天下呼吸道感染病原学诊断注意事项痰标本的正确采集（包括导痰）痰标本及时运送和处理的重要性痰标本的洗涤与匀化痰涂片：质量评估和细菌、真菌初步报告接种平板：质量与质控，血、巧克力、麦康凯、沙保弱培养环境：CO2培养时间：24h，48h菌落观察要点结果报告：所有菌种（群），包括半定量临床意义判定其他病原体的检测：结核、真菌、厌氧菌、非典型病原体第26页,共72页，2024年2月25日，星期天咳痰标本的采集标本采集方法医师或护士直视下采集标本病人先漱口，去除表面的菌群教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液临床上约半数咳痰标本不合格！第27页,共72页，2024年2月25日，星期天关于咳痰标本在抗生素应用前采集痰标本;标本采集后1～2h内必须立即进行实验室处理；咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本;取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口;深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导;无痰可用3％～5％NaCl5ml雾吸约5min导痰；也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰；第28页,共72页，2024年2月25日，星期天5种筛选标准判断14001份痰标本合格率比较

合格不合格不能归类

标本数率％标本数率％标本数率％标准1474033.9925366.1*80.1标准2358325.611097.9*930966.5标准3483234.5916965.5－－标准4911565.1488634.9－－标准5637845.6762354.4－－注：标准2：卫生部医政局《全国临床检验操作规程》第29页,共72页，2024年2月25日，星期天咳痰标本不合格，退检吗？如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于25个，白细胞小于10个，应不做或仅在特殊要求时做培养。如做培养，报告中注明“镜检结果表明标本口咽分泌物污染明显”。第30页,共72页，2024年2月25日，星期天几种下呼吸道直接采集的标本经气管穿刺吸引（transtrachealaspiration,TTA）经胸壁针刺吸引（transthoracicneedleaspiration,TNA）经支气管镜采样支气管肺泡灌洗（bronchoalveolarlavage,BAL）经支气管镜直接吸引防污染样本毛刷（protectivespecimenbrush,PSB）开胸肺活检（open-lungbiopsy，OLB）经人工气道吸引分泌物（endotrachealaspirates，ETA）第31页,共72页，2024年2月25日，星期天痰培养的送检次数对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2～3天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检；怀疑军团菌或深部真菌感染，痰标本理想的送检次数尚无定论。第32页,共72页，2024年2月25日，星期天痰培养的运送和保存尽快（<2h）送至实验室。如不能及时送达，应将标本暂存于4℃，但放置时间不可超过24h。厌氧培养标本的最佳运送时间取决于标本量。被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于厌氧菌培养。第33页,共72页，2024年2月25日，星期天痰培养的拒收光学显微镜细胞学检查发现口咽分泌物污染明显。没有标签或贴错标签。运送容器选择不当或有渗漏。标本采集不符合要求。同一天同一试验重复送检2次。延时送至实验室的标本。第34页,共72页，2024年2月25日，星期天尿培养标本采集与运送第35页,共72页，2024年2月25日，星期天你知道吗？尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道内或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能导致错误的培养结果。诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份标本就已足够，治疗48-72小时后再采集第二份标本。对于症状不明显的病人，需采集2-3份标本。怀疑肾结核时，应连续3天采集晨尿。多次收集或24小时尿不能用作培养。申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于定量培养分析非常重要，尤其只有少量尿液标本。室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此若30min内不能及时培养尿液则必须冷藏，但也不能超过24小时。第36页,共72页，2024年2月25日，星期天尿培养标本清洁中段尿导尿导管尿经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液送检标本以晨起第一次尿液为佳不能立即送检者，可暂存4℃冰箱，但保存不超过8h第37页,共72页，2024年2月25日，星期天清洁中段尿液尽量取早晨第一次尿液弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿详细告知病人以下操作步骤女性病人收集标本前用清洗液冲洗干净，从前向后仔细擦洗尿道区域分开阴唇，开始排尿排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿男性病人回缩包皮并清洗龟头排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿第38页,共72页，2024年2月25日，星期天导尿管尿液集尿袋内的尿液不能用作培养；导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难避免没有尿道菌群污染。留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿管但不能超过30分钟；将注射器针头插入采样端口，抽吸出尿液；注入无菌杯或试管中第39页,共72页，2024年2月25日，星期天耻骨上穿刺吸取尿液常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病人等。可避免尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少量尿液的小儿难以实施。方法：消毒自脐以下至尿道之间区域的皮肤，局麻穿刺点部位；在耻骨联合与脐连线上，高于耻骨联合2cm处进针刺入膀胱；取20ml尿液；置于无菌容器中并送往实验室。可用于厌氧菌检测第40页,共72页，2024年2月25日，星期天集尿法采集尿液怀疑结核分枝杆菌感染时，可用一清洁容器留24h尿液取其沉渣10-15ml送检。第41页,共72页，2024年2月25日，星期天粪便培养标本采集与运送第42页,共72页，2024年2月25日，星期天粪便标本的采集方法自然排便采集标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部份的粪便1～3g。液体粪便则取絮状物，一般取1～3ml，直接装入粪便容器或运送培养基中送检。直肠拭子采集粪便标本：先以肥皂、水和70%酒精，将肛门周围洗净，然后用经无菌盐水湿润的棉拭子插入肛门超越肛门括约肌约2-4cm，与直肠粘膜表面接触，轻轻旋转，必须将棉拭子置于运送培养基中送检。第43页,共72页，2024年2月25日，星期天粪便标本的运送一般粪便标本装于无菌封闭广口塑料杯；直肠拭子置于Cary－Bair拭子转运系统。做霍乱弧菌检查的粪便标本置于碱性蛋白胨水试管中。粪便标本：室温1小时内送至。直肠拭子：室温1小时内送至。高度怀疑霍乱弧菌感染的标本室温1小时内送至，运送必须符合特殊标本的安全要求。第44页,共72页，2024年2月25日，星期天你知道吗？住院超过3d或入院诊断不是胃肠炎的患者不做常规粪便培养。除婴儿和有活动性腹泻症状的患者外不推荐用拭子做常规病原检测。有腹部痉挛的患者在发病6h内采集到的血便或液状便的效果最好。对于弧菌的培养需要提出特别申请。第45页,共72页，2024年2月25日，星期天脑脊液标本采集与运送第46页,共72页，2024年2月25日，星期天脑脊液标本的采集方法以70%酒精或2%碘酊消毒背部下方，并麻醉之；然后以一特制通管针，轻轻的由第三与第四腰椎间的中线部位穿刺入脊髓蛛网膜，采集约3-5ml脑脊液于3支无菌试管中，每支试管至少1-2ml；然后马上将第2支（或第1支）送至实验室。做脑脊液培养时，建议同时做血培养。腰穿时必须作彻底消毒和无菌操作。第47页,共72页，2024年2月25日，星期天脑脊液标本的运送常温立即送检，实验室收到标本后应立即接种。脑脊液标本送检的理想时间为15分钟内，半小时送检是可接受的，如果送检时间超过1小时，则会影响结果，在结果报告时，在备注处注明此情况。如不能及时送检，可使用血培养瓶（怀疑脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染时，请勿使用血培养瓶）第48页,共72页，2024年2月25日，星期天穿刺液标本采集与运送第49页,共72页，2024年2月25日，星期天穿刺液标本的采集方法由临床医生进行。胆汁的采集方法有三种：十二指肠引流法（以“B”管—来自胆囊，做细菌培养意义较大）、胆囊穿刺法及手术采取法，由临床医生采取，约2ml左右放入无菌密封容器立即送检。其它穿刺液的采集方法：2%碘酊消毒要穿刺的皮肤后，由临床医生穿刺采集标本（2ml左右），装入无菌密封容器立即送检。第50页,共72页，2024年2月25日，星期天穿刺液标本的送运采集后应正确盖好，防止泄漏或容器外部留有残留物。保温立即送检，保证在≤15min内送至实验室，实验室收到标本后应立即接种。为提高阳性率，像胸腹水等标本，可接种到血培养瓶中送检。第51页,共72页，2024年2月25日，星期天手术切口与软组织感染标本采集与运送第52页,共72页，2024年2月25日，星期天皮肤组织标本标本的选择更大程度上依赖于感染的程度和性质而不是可疑的病原体。对大多数开放伤口，采集前应先去除表面菌群。除非有渗出物，干燥、结痂伤口一般不做培养。闭合脓肿应取渗出物和脓肿壁标本。开放脓肿处理同开放伤口。烧伤伤口应在广泛清洗和清创术后采集培养。建议取活检标本，伤口表面定量培养不一定有意义。代表性的标本应采自病灶活动区域或基底部有而不仅仅是脓液。第53页,共72页，2024年2月25日，星期天采集方法未破裂脓肿：不能用拭子。消毒覆于脓肿表面的皮肤，用注射器将脓肿内容物吸出。然后切开脓肿、引流，取部分脓肿壁送检。送检时，标本都置于厌氧培养基中。开放病灶和脓肿：尽量去除表面菌群，用拭子采集病灶及底部或边缘的标本，置于需氧培养基中。也可对渗出液作厌氧培养。开放病灶不能做厌氧培养。烧伤伤口：清创，出现渗出液后以拭子用力采集，仅作需氧培养。也可送检活检组织标本。脓疱或水疱：酒精消毒使之干燥，对于患儿用23号针头挑破脓疱，拭子采集脓疱液和基底部标本。标记：不要只写“伤口”标记标本，应有专门的描述和解剖来源。注明渗出液来自开放伤口还是闭合伤口。第54页,共72页，2024年2月25日，星期天注意事项迅速送往实验室，1小时内不能培养应将标本冷藏。皮肤消毒对培养结果至关重要。革兰染色对标本进行评估。涂片中如出现上皮细胞提示标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞说明标本采集正确。不要仅送检脓液。脓液不能代表伤口特点，应在病灶活动区域或基底部采集标本。小儿要求：小儿感染常出现皮疹如水泡等，应在这些地方仔细采集标本培养以发现病原体。创伤标本如没有炎性细胞可能说明采集了表皮正常菌群，与疾病过程无关，应重新采集。第55页,共72页，2024年2月25日，星期天生殖道标本采集与运送第56页,共72页，2024年2月25日，星期天生殖道标本的采集方法推荐使用男性或女性专用拭子。男性前列腺：用肥皂和水清洗阴茎头，通过直肠按摩前列腺，用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内。男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2～4cm，旋转拭子，至少停留20s，而使之容易吸收。女性阴道：擦除过多的分泌物和排出液，用2支无菌拭子从阴道穹隆部黏膜处获取分泌物。1支需要涂片,1支拭子做培养。女性尿道：患者排尿1h后采集，拭去尿道口的渗出物，用拭子通过阴道，靠着耻骨联合，按摩尿道，采集尿液。宫颈：用无润滑剂的扩阴器使宫颈可见，用拭子从宫颈上拭去黏液和分泌物，丢掉拭子，用新的无菌拭子紧帖宫颈内道轻轻采样。后穹窿：送抽吸液。第57页,共72页，2024年2月25日，星期天生殖道标本的运送标本采集后应正确盖好，防止泄漏或容器外部留有残留物。常温2h内送至。第58页,共72页，2024年2月25日，星期天眼、耳、鼻、喉标本采集与运送第59页,共72页，2024年2月25日，星期天采集方法眼结膜标本：预先沾湿拭子，在结膜上滚动采集标本。眼角膜标本：在麻醉下，用刮勺在溃疡或创伤边缘刮取碎屑，立即送检。眼部感染所获得的标本量很少，建议医师取样后直接接种在培养基平板上培养。内耳：接触耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注射器收集液体，对破裂的鼓室，借助耳科诊视器，用拭子收集液体。外耳：用湿拭子将耳道的任何碎屑或痂皮拭去，在外耳道用力旋转拭子取样。第60页,共72页，2024年2月25日，星期天采集方法鼻标本：用一根无菌棉拭子伸进一侧鼻孔约2.5cm，与鼻黏膜接触，轻轻旋转拭子，蘸取黏膜上分泌物，缓慢取出，直接送检。鼻咽：用无菌拭子经鼻轻轻插入鼻咽后部，慢慢旋转拭子5s以吸收分泌物，放入无菌管中。咽部检体，与采集前患者应用清水反复漱口，由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，将棉拭子通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，涂抹数次，但拭子要避免接触口腔和舌粘膜。第61页,共72页，2024年2月25日，星期天标本的运送标本采集后应正确盖好，防止泄漏或容器外部留有残留物。眼、耳、鼻、喉标本采集后应立即送检，防止干燥，禁止冷藏。耳部标本常温2h内送至。眼部标本应≤15min送至。第62页,共72页，2024年2月25日，星期天留置针、心脏起博器导管标本采集与运送第63页,共72页，2024年2月25日，星期天标本的采集与运送留置针：用乙醇清洗导管周围的皮肤，将导管末端及夹子5cm无菌移入无菌管，防干燥。心脏导管：按照临床特别要求采集。标本采集后应正确盖好，防止泄漏或容器外部留有残留物。应≤15min送至实验室。第64页,共72页，2024年2月25日，星期天环境微生物监测标本采集方法第65页,共72页，2024年2月25日，星期天空气采样布点方法室内面积≤30m2，设内、中、外对角线3点，内、外点布点部位距墙壁1m处；室内面积＞30m2，设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1处。平板暴露法将普通营养琼脂平板（直径为9cm）放在室内各采样点处，采样高度为距离地面1.5m