药物敏感试验和消毒灭菌

试验内容和要求1.掌握药敏试验原理、步骤、结果及意义2.掌握惯用消毒与灭菌技术3.熟悉紫外线杀菌试验原理4.了解细菌L型诱导和菌落类型药物敏感试验和消毒灭菌第1页2一、药敏试验在感染性疾病防治中意义

近年来，因为各种抗菌药品广泛应用，造成耐药菌株快速增多。尤其是广谱及超广谱抗生素普遍使用，造成耐药菌株大量出现，给临床治疗带来极大困难。同时，因为不合理使用抗生素，治疗失败率及不良反应都有增加。所以，药敏试验在感染性疾病防治方面含有日益主要实际意义。药物敏感试验和消毒灭菌第2页3二.培养+药敏目标

1、确定造成感染病原菌种类，对于不一样病原菌（G-杆菌或G+球菌，条件致病菌或急性传染病病原菌）需要采取不一样治疗办法。

2、确定病原菌对各种抗生素敏感性，指导临床依据病人情况合理用药。因为细菌耐药性快速增加，单纯依赖经验选取药品经常无效，在更多时候需要参考药敏试验结果。

3、用于流行病学调查及院内感染监控，降低耐药菌株流行。药物敏感试验和消毒灭菌第3页4三、什么情况下需要做培养+药敏？感染原因无法确定。病原菌耐药性无法确定，经验用药可能失败（尤其是免疫力低下患者、长久使用抗生素者、ICU病房、院内感染患者、接收导管插入或其它创伤性治疗患者。）病人对可用药品过敏，需要检测其它药品耐药性。病人个体情况要求对一些药品准确用药，需要测定其最低抑菌浓度（MIC）。 药物敏感试验和消毒灭菌第4页四、惯用抗菌药品敏感性试验与耐药检测方法介绍其原理：体外测定抗生素药品抑菌或杀菌能力。可帮助临床对感染性疾病选择最正确用药，还可进行流行病学调查，了解一些致病菌耐药性变异情况。纸片扩散法（Kirby-Bauertest）稀释法（dilutiontest）E试验法（Etest）联合药品敏感试验特殊耐药菌及耐药酶表型检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）检测β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等药物敏感试验和消毒灭菌第5页五、纸片扩散法（K-B法）原理：含有定量抗菌药品纸片贴在已接种测试菌琼脂平板上，纸片所含药品吸收琼脂中水分溶解后便不停向纸片周围区域扩散，形成递减梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内细菌生长被抑制，形成透明抑菌圈。抑菌圈大小反应测试菌对测定药品敏感程度，并与该药对测试菌最低抑制浓度（minimalinhibitoryconcentration，MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。药物敏感试验和消毒灭菌第6页方法：菌液制备：挑取孵育16-24h血平板上数个菌落置于生理盐水管中，校正浓度至0.5麦氏标准；涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多出菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60º，最终沿平板内缘涂抹1周；贴含药纸片：平板在室温下干燥3-5min，用无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm；孵育：35ºC16-18h，量取抑菌圈直径。药物敏感试验和消毒灭菌第7页注意事项1纸片应分布均匀，中心距离大于24mm。2含菌平板必须防止过浓或过稀。3纸片贴完后应在15min内将平板反过来，置于37度温箱中。4纸片一旦接触培养基就不应再挪动位置。5要注意无菌操作。药物敏感试验和消毒灭菌第8页影响药敏结果原因培养基应依据试验菌营养需要进行配制。倾注平板时，厚度适当（约5-6mm），不可太薄，普通90mm直径培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽可能防止有抗菌药品拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺药和TMP活性。细菌接种量细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶菌株更可破坏药品抗菌活性。药品浓度药品浓度和总量直接影响抑菌试验结果，需准确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。培养时间普通培养温度和时间为37℃，8-18小时，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药平板培养基，先置4℃冰箱内2~4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，能够推迟细菌生长，而得到较大抑菌圈。药物敏感试验和消毒灭菌第9页结果判读：用刻度尺量取抑菌圈直径，依据CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）标准判读结果；汇报：细菌对该抗生素是敏感（susceptible，S）；耐药（resistant，R）；还是中介（intermediate，I）。药物敏感试验和消毒灭菌第10页11六、怎样了解MIC值及药敏结果？

每种药品均提供定性和定量两种结果。定性：敏感（S）表示该药品对该细菌有抑制或杀灭作用。使用常规剂量能够到达有效治疗效果。

中介（中度敏感，I）表示细菌对该药品治疗敏感性低于敏感菌株，必须加大剂量以到达更高血药浓度才能在特定生理部位取得有效临床效力；对于使用剂量有严格限制药品则必须重复测试以确定敏感还是耐药。

耐药（R）表示药品常规剂量所到达药品浓度不能抑制或杀死细菌，即使加大剂量也不能到达治疗效果或者超出了人体正常耐受水平。定量：MIC（最低抑菌浓度）表示在体外到达抑制细菌生长所需要最低药品浓度。临床治疗要求血药浓度普通为MIC值（μg/ml）

4-8倍。对于不一样部位不一样药品，其浓度可能更高或更低。应详细情况详细分析，不可一概而论。

药物敏感试验和消毒灭菌第11页12长久使用抗生素病人应该怎样做药敏试验？

长久使用抗生素病人尤其是住院病人应该经常做药敏试验。所谓长久，并不是一个很长时间概念，住院病人每隔3-4天就需要做一次细菌学检验。对于ICU病房病人，可能天天都要做细菌学检验。因为这些病人多数免疫力较差，轻易受条件致病菌侵犯，而且重复发作。另外病原菌常呈多重耐药性，产超广谱β-内酰胺酶G-杆菌（ESBL）以及耐甲氧西林葡萄球菌（MRSA和MRSCN）、产AmpC酶阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌在ICU病房最为常见。对于长久使用抗生素病人，其感染有以下几个特点；

1.长久使用抗生素病人，不一样时期（即使在很短时间内）感染病原菌种类可能不一样，耐药性所以也不相同。

2、同一株细菌，在长时间用药时，仅需要3-4天就能够从对某种药品敏感发展为耐药。

3.长久使用抗生素轻易诱发细菌产生L型变异。常规培养阴性时，进行L型细菌培养能够提升检出率。药物敏感试验和消毒灭菌第12页形成条件：生物学特征：与医学关系：细胞壁中肽聚糖结构受理化或生物原因直接破坏或合成抑制而形成。形态多形性；染色革兰阴性；培养高渗培养基；菌落油煎蛋样

仍有一定致病性细菌L型－细胞壁缺点细菌临床分离葡萄球菌L型葡萄球菌L型回复后药物敏感试验和消毒灭菌第13页14灭菌－杀灭或除去全部微生物繁殖体和芽胞。消毒－杀灭或除去病原微生物。防腐－抑制微生物生长与繁殖。抑菌剂或防腐剂。除菌:用冲洗、过滤等机械伎俩除去微生物方法化疗：用对病原菌有毒力但对机体无害化学物质杀灭或抑制机体内病原微生物方法消毒与灭菌技术

基本概念药物敏感试验和消毒灭菌第14页擦拭法高压蒸汽灭菌法惯用消毒灭菌方法物理法

化学法浸泡法熏蒸法喷雾法热力消毒法生物净化法辐射消毒法燃烧法烤箱法煮沸法干热法湿热法日光曝晒法紫外线灯照射法电子灭菌灯法电离辐射法药物敏感试验和消毒灭菌第15页煮沸消毒法操作规程将物品刷洗洁净，全部浸没在水中，或在水中加入碳酸氢钠配成1％一2％浓度，可将沸点提升到105℃．还可去污防锈。加热煮沸。水沸后开始计时5—10min，如中途加入物品，则在第二次水沸后重新计时。关闭热源，用无菌持物钳取出消毒物品。药物敏感试验和消毒灭菌第16页

焚烧----最彻底灭菌方法烧灼----直接用火焰灭菌方法如接种环、试管口、三角瓶口干烤----加热160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷1、干热灭菌法红外线----热效应，与干烤类似灭菌效果：可杀死营养体和芽胞药物敏感试验和消毒灭菌第17页2.湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法（热压灭菌法）最有效湿热灭菌法121℃15-20mim（杀芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(杀繁殖体)-2h(杀芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽100℃15-30mim(杀繁殖体)重复屡次流动蒸汽间歇加热灭菌(杀芽胞）较低温度61℃30mim/71℃30s（杀致病菌）效果比干热好药物敏感试验和消毒灭菌第18页压力蒸汽灭菌效果监测

物理监测法用150℃或200℃留点温度计。使用前将温度计汞柱甩至50℃以下，放入包裹内，灭菌后检验其读数是否到达灭菌温度化学监测法主要是经过化学指示剂化学反应，灭菌后展现颜色改变来区分是否到达灭菌要求。临床惯用化学指示卡与化学指示胶带，化学指示卡放在包中央，化学指示胶带粘贴在包外面。生物监测法是最可靠监测法，利用对热耐受力较强非致病性嗜热脂肪杆菌芽孢作为指示剂，制成每片含106个嗜热脂肪杆菌芽孢菌纸片,使用时将10片菌纸片分别放于灭菌器四角及中央，待灭菌完成，用无菌镊取出后．再放人培养基内，在56℃温箱中培养48h至1周，若全部菌纸片无细菌生长则表示灭菌合格。药物敏感试验和消毒灭菌第19页消毒与灭菌技术

辐射灭菌法̶非电离辐射：紫外线最正确杀菌波长为250～270nm杀菌机理：干扰DNA复制与转录

特点：紫外线穿透力较弱适应范围：紫外线消毒适合用于空气消毒与物品表面消毒。药物敏感试验和消毒灭菌第20页消毒与灭菌技术

滤过除菌法杀菌机理：含有微细小孔<0.22μm,只允许液体或气体及孔径<0.22μm颗粒经过，细菌不能滤过。不能除病毒、支原体适用范围：血清、毒素、输液、生物制品、抗生素以及空气等除菌。药物敏感试验和消毒灭菌第21页促进菌体蛋白质变性凝固（酚、醇、醛、酸碱类等）干扰细菌酶系统和代谢（氧化剂、重金属盐类等）损伤细菌细胞膜，增加其通透性（表面活性剂、脂溶剂等）菌体成份氧化、水解或结构改变（氧化剂、卤素、醛、酚等）消毒与灭菌技术

化学消毒剂作用机制药物敏感试验和消毒灭菌第22页消毒剂类别名称浓度(%)用途重金属盐红汞2皮肤、粘膜、小创面消毒硫柳汞0.01生物制品防腐氧化剂高锰酸钾0.1皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒过氧化氢3皮肤、粘膜、创伤消毒过氧乙酸0.2～0.5塑料、玻璃、人造纤维消毒卤素类碘液2.5皮肤消毒醇类乙醇70～75皮肤、体温计消毒酚类石炭酸3～5地面、器皿表面和排泄物消毒来苏3～5同上、也惯用于手及皮肤消毒表面活性剂新洁尔灭0.1手术器械消毒酸碱类生石灰1:4～1:8排泄物、地面消毒染料龙胆紫2～4表浅创伤消毒药物敏感试验和消毒灭菌第23页化学消毒剂使用方法浸泡法侵泡法是将物品洗净、擦干后，浸没在消毒液中进行消毒灭菌方法。擦拭法擦拭法是用消毒剂直接擦拭人体或物品表面，如皮肤、桌