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文档简介

月季的植物组织培养实验目的1．掌握蔷薇科月季的组织培养技术2．熟悉、稳固无菌操作技术实验器皿及试剂仪器及用品：超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、电热炉酒精灯、镊子、解剖刀、解剖剪、烧杯、三角瓶、培养皿、滤纸、封口膜2.试剂：MS+6BA1+NAA1〔诱导〕培养基、MS+6BA2+NAA2〔继代〕培养基、70%酒精、3%次氯酸钠、无菌水3.材料：月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药。实验步骤配制诱导培养基：MS+6BA1+NAA1，1升，灭菌后分装到35个培养皿中。取材：将采集的月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药冲洗干净，按不同部位分装到3个500烧杯中，放入超净工作台；先用70%酒精浸没并轻摇10秒进行预消毒；倒出酒精，参加3%次氯酸钠浸没，轻摇11分钟；倒净次氯酸钠，用无菌水冲洗5遍以上，倒出无菌水。将消毒后的外植体放入带有滤纸的无菌平皿中，用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成5mm2大小、茎段长2—3cm每段至少有1个侧芽、将花苞翻开取花药，分别接种到带有培养基的平皿中并封口〔每皿3—5个〕。标记好后，放入培养室中培养〔2周左右〕。配制分化培养基：MS+6BA2+NAA2培养基，配制1升，灭菌后分装到35个100ml的三角瓶中。挑选长有愈伤组织的外植体，将其转移到分化培养基中。在超净工作台中，将培养皿封口膜在酒精灯旁翻开，将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从平皿中取出，转移到带有分化培养基三角瓶中〔每瓶最多〕并封口。标记好后，放入培养室培养。继续观察愈伤组织的生长情况。实验结果茎段出愈率=25根出愈/总接种40根*100%=63%叶片出愈率=5片出愈／总接种30片*100%=17%花药及萼片出愈率=1片出愈/总接种20片*100%=5%通过实验得出月季茎段的出愈率最高，其次是叶片及花药。接种过程中有三个平皿出现污染现象。问题分析及解决三个污染的外植体，两个是叶片内延至周围。其原因可能是在外植体灭菌过程中个别没有灭菌完全，是自生菌；或者升汞灭菌后没有将升汞完全洗干净。另一个是长满了平皿，分析是因为培养基内水分较大，在培养过程中平皿上方形成很多水珠，造成加大了污染几率。叶片的出愈率不高，分析可能是因为叶片的取材不够好，应该去茎尖上最幼嫩的叶片，这样它的分化能力会更强，更容易长出愈伤组织；在切割组织块时候，用酒精灯灭刀、剪后未完全晾凉就切割叶片，因为温度太高将叶片杀死；叶片比起茎段来说组织较薄胶脆弱，灭菌很可能伤害到组织内部，影响其愈伤组织的形成。花药及萼片出愈率很低，原因可能

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