进出口食品中稻瘟灵残留量的检测方法 气相色谱-质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品中稻瘟灵残留量检测方法Determinationofisoprothiolaneresiduesinfoodstuffs2008-11-18发布国家质量监督检验检疫总局本标准的附录A和附录B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位；中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局，中华人民共和国内蒙古出入境检验检疫局。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。进出口食品中稻瘟灵残留量检测方法24仪器和设备4.1气相色谱仪：配ECD检测器。4.2气相色谱-质谱联用仪：配负化学电离源。4.3电子天平；感量0.01mg.0.01g。4.4固相萃取装置。4.5微波炉：650W。4.6粉碎机。4.7组织捣碎机。4.8离心机：4000r/min。4.9旋涡混合器。4.10旋转蒸发器。4.11氮吹仪。4.12均质器：12000r/min。4.13具塞玻璃离心管：15mL、50mL。4.14无水硫酸钠柱；8.0cm×1.5cm(内径)玻璃柱，内装5cm高无水硫酸钠。5试样制备与保存5.1试样制备取有代表性样品约500g(不可用水洗涤),将其可食部分切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。取有代表性样品约500g(不可用水洗),将其可食部分切成约2cm的段，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。取有代表性样品约500g.用粉碎机粉碎，混匀，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。取有代表性样品约500g,将其可食部分切碎后，用组织捣碎机将充分捣碎均匀，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。取有代表性样品约500g。对于无结品的群品将其搅拌均匀；对于有结品析出的样品，在密闭情况下，将样品置于不超过60℃的水浴中温热，待样品全部融化后搅拌均匀，迅速冷却至室温。在融化时应注意防止水分挥发。装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。5.2试样保存玉米、大米、茶叶、松籽仁、弊花籽仁、蜂资和牛奶等试样于4℃以下保存；柑橘、苹果、菠菜、大葱、牛肝、鸡肾和鱼等试样于—18℃以下保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。6测定步骤称取试样约5g(精确到0.01g)于50mL,离心管中，加入5g无水硫酸钠(3.8)和20mL,乙腈(3.3),用均质器以10000r/min均质2min,4000r/min离心5min。将上清液转移至100mL浓缩瓶中。再用20mL乙腈重复提取一次，合并提取藏于同一100mL浓缩瓶中，55℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入6mL.正已烷(3,2)溶解残渣待净化。称取试样约5g(精确到0.01g)于50ml.离心管中，加入10g无水硫酸钠和20ml.正己烷-丙酮(3.9)溶液，用均质器以12000r/min均质2min,4000r/min离心5min。将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于100ml.浓缩瓶中。再用20mL正已烧-丙酮(3.9)溶液重复提取一次，合并提取波于同一100mL,浓缩瓶中.45℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入5mL正已烷溶解残渣待净化。称取试样约2g(精确到0.01g)于50mL离心管中，加入4mL饱和氯化钠溶液(3.14),在旋润混合器上充分混合0.5min,放置0.5h,加入20mL乙腈，用均质器以10000r/min均质2min,4000r/min离心5min。将上清液转移至100ml.浓缩瓶中。再用20mL.乙腈重复提取一次，合并提取液于同一100mL.浓缩瓶中，55℃旋转浓缩约5mL。将浓缩提取液转移至250ml.分液漏斗中，加入100mL硫酸钠溶液(3.15)和40mL正己烷，振摇2min,静置分层，将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于200ml.浓缩瓶中。再用40ml.正己烷重复提取一次，合并提取液于同一200ml.浓缩瓶中，45℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入5ml.正己烷溶解残渣待净化。称取试样约5g(精确到0.01g)于50ml离心管中，加入15mL.水和5mL丙酮(3.1),在旋涡混合器上充分混合0.5min。然后加入5g氯化钠(3.7)和20mL正己烷·在旋涡混合器上充分混合2min。4000r/min离心5min。将上清液通过无水硫酸的柱脱水于100mL浓缩瓶中。再用20mL正已烷重复提取一次，合并提取液于同一100mL浓缩瓶中，45℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入6mL30%甲醇溶液(3.12)溶解残渣待净化。称取试样约5g(精确到0.01g)于50mL离心管中，加入2g氯化钠和20ml.正己烷-丙酮(3.9)溶液，在旋涡混合器上充分混合2min,4000r/min离心5min。将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于100ml.浓缩瓶中。再用20ml.正己烷重复提取一次，合并提取液于同一100ml.浓缩瓶中，45℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入6ml.正已烷溶解残渣待净化。称取试样约5g(精确到0.01g)于50ml.离心管中，置于微波炉(中火)中处理40s.加入2g氯化钠和20mL乙腈，用均质器以10000r/min均质2min,4000r/min离心5min,将上清液转移至预先加入100mL磷酸盐缓冲溶液(3.16)的250mL分液漏斗中。再用20ml.乙睛重复提取一次，合并提取液于同一250mL分液漏斗中，加入40mL正己烷，振摇2min,静置分层，将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于200mL浓缩瓶中。再用40mL正已烷重复提取一次，合并提取液于同一200mL浓缩瓶中，45℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入5mL正己烷溶解残渣待净化。将上述样液全部转移到中性氧化铝固相萃取桂(3.20)中，控制流速在1ml,/min~2ml//min,弃去流出液。再自上而下将中性氧化铝固相萃取柱与氟罗里硅土固相萃取柱(3.21)串接，加人10mL.正己烷-丙酮(3.11)溶液洗脱，控制流速在1mL/min～2mL/min.收集洗脱液。洗脱液经60℃氮吹仪吹干后，用正己烷溶解并定容5mL,供气相色谱和气相色谱-质谐仪测定。将上述样液全部转移到石墨炭黑固相萃取柱(3.19)中，控制流速在1mL/min~2mL/min,弃去流出液。再自上而下将石墨炭黑固相萃取柱与氟罗里硅土固相萃取柱申接，加入10mL.正已烷-丙酮4(3.10)溶液洗脱，控制流速在1mL/min~2mL/min,收集洗脱液。洗脱液经60℃氮吹仪吹干后，用正己烷溶解并定容5mL,供气相色谱和气相色谱-质谱仪测定。将上述样液全部转移到石墨炭黑固相萃取柱中，控制流速在1ml/min~2mL/min.弃去流出液。再自上而下将石墨炭黑固相萃取柱与氟罗里硅土固相萃取柱串接，加入10ml.正己烷-丙酮(3.10)溶液洗脱控制流速在1mL/min~2mL/min,收集洗脱液。洗脱液经60℃氮吹仪吹干，用6ml.30%甲醇溶液(3.12)溶解残渣转移到HLB固相萃取柱(3.22)中，控制流速在1mL/min~2mL/min.弄去流出液。加入14mL80%甲醇溶液(3.13)溶液洗脱，控制流速在1mL/min~2mL/min.收集洗脱液。洗脱液经60℃氮吹仪吹至约3mL后，准确加入2mL正己烷和5mL硫酸钠水溶液，在旋润混合器上充分混合2min,在3000r/min下离心3min。取上清液供气相色谱和气相色谱-质谱仪测定。将上述样液全部转移到HLB固相萃取柱上，控制流速在1mL/min~2ml/min,弃去流出液。加入14mL80%甲醇溶液(3.13)溶液洗脱，控制流速在1mL/min～2mL/min,收集洗脱液。洗脱液经60℃氮吹仪吹至约3ml.后，准确加入5ml.正已烷和5ml.硫酸钠水溶液，在旋涡混合器上充分混合2min,3000r/min离心3min。取上清液供气相色谱和气相色谱-质谱仪测定。将上述样液全部转移到氟罗里硅土固相草取柱上，控制流速在1mL/min～2mL/min,弃去流出液。加入10mL正已烧-丙酮(3.10)溶液洗脱，控制流速在1mL/min~2mL/min,收集洗脱液。洗脱液经60℃氮吹仪吹干后，用正已烷溶解并定容5mL,供气相色谱和气相色谱-质诺仪测定。6.3.1气相色谱条件a)色谱柱；R1x-1701石英毛细管柱，30m×0.25mm(内径》×0.25pm或相当者；20℃/min升至270℃,保持3min;c)进样口温度：260℃;d)检测器(ECD)温度：350℃;e)载气：氮气，纯度大于99.999%,恒流模式，1.0ml,/min;g)进样方式：无分流进样，0.75min后开阀。6.3.2气相色谱-质谱条件a)色谱柱；DB-5ms石英毛细管柱，30m×0.25mm(内径)×0.25μm或相当者；20℃/min升至270℃,保持3min;c)进样口温度：260℃;d)色谱-质谐接口温度：280℃;e)载气：氮气，纯度大于99,999%,恒流模式，1.0mL./min;g)进样方式：无分流进样，0.75min后开阀；h)电离方式：负化学电离；i)电离能量；174.7eV;j)离子源温度；150℃;k)四极杆温度：150℃;1)反应气；甲烷，纯度大于99.99%; (1)添加浓度/(pg/kg)谬加浓虚/(pg/kg)5555555鱼55S5555样品的深加浓度及回收率的数据见表3。添加浓度/(pg/kg)谬加浓虚/(pg/kg)5555555鱼55S555573.4~103.(资料性附录)(资料性附录)DeterminationofisoprThisstandardspecifiesthemethodofdeterminatiThisstandardisapplicabletothedetermaize,orange,apple,spinach.scallion.pinenutkernel,sunflowerseedTheisoprothiolaneresiduesinthetesacetonitrile.Aftertheextractsisevaporated,theresid(SPE)withagraphitizodcarbonblankcartridgeortridgeorHLBcartridge.TheresiduesUnlessotherwisespecifisd.allreagentsareanalyticallypure,"water"i3.3Acetonitrile:LCgr4.1Gaschromatographyequipped4.2Gaschromatography-massspectrometryequippedwithnegativechem4.5Micro-waveove4.11Nitrogen4.12Highspeedhomogenizar:124.13Centrifugetubeswithgroundstopper4.14Columnofanhydroussodiumsulfate:8.0cm×1,5cm(i.d.),anhydroussodiumsulf5.1.1Orange,appleandsTakeapproximately500gofrepresentatandcrushedintopulpwithatissuehomogeniatcomparableconcentrations.theallowedrelativedeviationofrelativeintenthetable1tolerance,thesamecompoundinsamplemustbeconfirmed.UndeTable1—MaximurmpermittedtolerancesforrelativeioniCalculatethecontentofisoprothiolaneresidueinthetestsamplebyGC.GC-MSDdataprocessc—theconcentrationofisoprothiolaneinthestandardworkingsolu