妇科五联检技术

关于妇科五联检技术12提纲背景1.阴道微生态环境2.常见的阴道疾病3.白带检测方法4.方法优势第2页,共33页，2024年2月25日，星期天3背景女性生殖道感染性疾病是全球重大社会问题和公共卫生问题WHO1995年统计全球每年有3.33亿可治愈的新病例发生，主要在发展中国家。生殖道感染造成不育达20-60%不等，发达国家36%，不发达国家达85%中国2011年8月6日公布每年有2亿人感染，5%-8%患者一年中有3次以上复发，治疗费达400亿人民币。60%的输卵管性不育为感染造成。常见病、多发病导致不孕不育、流产，出生人口素质下降，增加感染HIV的机会，危害女性身心健康，对婚姻质量及家庭稳定产生潜在和深远影响。第3页,共33页，2024年2月25日，星期天4背景常见疾病发病率1、念珠菌外阴阴道炎发病率31.3%2、细菌性阴道病发病率10.44%3、滴虫性阴道炎7.44%4、生殖道菌群失调：89.26%《中国实用妇产科杂志》2009年12月第25卷第12期《阴道炎的诊治进展》文章，对6982例门诊就诊女性的统计分析。作者：吴文湘、廖秦平第4页,共33页，2024年2月25日，星期天52006年3月-2007年10月，对北京大学第一人民医院妇产科门诊的6982例女性就诊者数据分析微生态正常微生态失调例数7506232背景第5页,共33页，2024年2月25日，星期天6背景BVVVCBV+VVC菌群异常pH、清洁度、H2O2功能异常72915279512292652第6页,共33页，2024年2月25日，星期天7一.阴道微生物群定植于阴道内的微生物主要由：细菌、真菌、原虫和病毒组成。阴道菌群约有29种，由多种厌氧菌和需氧菌构成。1.革兰氏阳性需氧菌及兼性厌氧菌：乳酸杆菌、棒状杆菌、非溶血性链球菌、肠球菌及表皮葡萄球菌

2.革兰氏阴性需氧菌及兼性厌氧菌：加德纳菌、大肠埃希菌及摩根菌

3.厌氧菌：消化球菌、消化链球菌、类杆菌、动弯杆菌、梭杆菌及普雷沃菌

4.其它条件致病菌：支原体、衣原体、念珠菌第7页,共33页，2024年2月25日，星期天8阴道微生态环境中，保持着协调平衡的状态虽然正常阴道内有很多种细菌存在，但是由于阴道与这些菌群之间形成生态平衡并不致病，在维持阴道生态平衡中，雌激素、乳酸杆菌及阴道PH起重要作用。阴道正常酸性环境（PH≤4.5，多在3.8-4.4）

但是阴道生态平衡一旦被打破或外源性病原体侵入，即可导致炎症发生。若体内雌激素下降或阴道PH升高，如频繁性交（性交后PH可上升至7.2维持6-8小时）、阴道灌洗等均可使阴道PH升高，不利于乳酸杆菌生长。此外长期应用抗生素抑制乳酸杆菌生长，或机体免疫力低下，均可使其他致病菌成为优势菌，引起炎症。

第8页,共33页，2024年2月25日，星期天9阴道优势菌的特点乳酸杆菌：革兰氏阳性杆菌、无芽孢、鞭毛、荚膜，细长有弯曲或呈球杆状、杆状、单个、双极链状无动力的厌氧或兼性厌氧菌。生长适宜温度30-40℃，最适PH3.0-4.8阴道内最常见乳杆菌有：

1、嗜酸、卷曲、格氏、詹氏乳杆菌主要产H2O2

2、唾液乳杆菌

3、发酵乳杆菌等20多种第9页,共33页，2024年2月25日，星期天10阴道优势菌的作用乳酸杆菌的作用：1、分解糖原，维持阴道酸性环境2、产生多种抑菌物质：乙酸、H2O2、乳酸菌素、硬脂酸等3、竞争粘附：也称占位性保护4、竞争营养：大量定制于阴道中的乳酸杆菌营养处于竞争优势状态，利用阴道上皮细胞中的糖原，减少其它菌群的碳源供应，通过竞争营养物而干扰其它菌的生长。第10页,共33页，2024年2月25日，星期天11二.阴道最常见感染常见感染性疾病

1、细菌性阴道病（BV）细菌性阴道病（BacteralVaginosis,简称BV）它是由于阴道内微生态平衡失调，对人体有益的优势菌—乳酸杆菌的大量减少或消失，而加特纳氏菌、动弯杆菌属、类杆菌属、普氏杆菌属等厌氧菌大量增生所引起的一种无阴道粘膜炎症性表现的综合症。第11页,共33页，2024年2月25日，星期天12致病机理

细菌性阴道病为内源性感染，主要是由于正常阴道菌群（乳酸杆菌)被阴道加特纳杆菌、厌氧菌及人型支原体等混合菌群替代所致。促发阴道正常菌群发生转变，发展成BV的启动因素和机制尚不清楚。乳酸杆菌对维持正常阴道的生态内环境十分关键。患BV时乳酸杆菌减少而其它细菌增多，导致乙酸浓度降低，胺类和氨增加，使阴道分泌物PH值增加，厌氧菌的代谢产物如腐胺、尸胺和三甲胺，使阴道分泌物具有鱼腥样气味。

BV相关的病原体可产生毒力因子包括细胞毒素、唾液酸酶、粘多糖酶和胶原酶，造成上皮细胞损伤，使液体渗出及阴道鳞状上皮细胞脱落，产生典型的细菌性阴道病的分泌物。第12页,共33页，2024年2月25日，星期天13流行病学

细菌性阴道病的患病率随种族及人群而异。国外资料表明在非选择性人群中BV的患病率为10%-20%.在性病门诊就诊妇女中的患病率36-50%.因该病除分泌物异常外，无其它症状，患者常不就医，因此很难估计人群中的发病情况。第13页,共33页，2024年2月25日，星期天142、霉菌性阴道炎(VVC）

主要分为白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌。对909例培养阳性的VVC进行研究,白念珠菌占77.1%,光滑念珠菌占14.6%,克柔念珠菌占4.0%,热带念珠菌占2.3%,近平滑念珠菌占0.6，其它占1.2%。

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3、滴虫性阴道炎（TV)

一种常见的妇科感染性疾病，1、滴虫性阴道炎的危害主要主要是会令人难受及疼痛不适；2、滴虫性阴道炎可并发滴虫性尿道炎、膀胱炎、肾盂炎；3、由于滴虫能吞噬精子，可引起不孕症，影响生活质量；4、阴道毛滴虫长期存在于阴道内，消耗或吞噬阴道上皮细胞内的糖原，阻碍乳酸生成，不仅破坏阴道的弱酸性环境，还有可能引起阴道细胞发育异常，诱发癌前期病变

第15页,共33页，2024年2月25日，星期天16

三.目前常规检测方法：

阴道分泌物检查镜检项目：

白细胞（清洁度）念珠菌（霉菌）滴虫线索细胞（显微镜下很难观察）是判定BV的一个必要条件。第16页,共33页，2024年2月25日，星期天171.4清洁度判断标准清洁度白细胞上皮细胞乳酸杆菌杂菌Ⅰ度0-5（-）大量++++大量+++—Ⅱ度5-15（±）中量+++中量++少Ⅲ度(+）15-30（++）少++少+较多

Ⅳ度≥30（+++）少+—大量第17页,共33页，2024年2月25日，星期天18优势菌及病原体染色图片优势菌：乳酸杆菌念珠菌白细胞、滴虫线索细胞第18页,共33页，2024年2月25日，星期天19目前检测现状由于分泌物标本成份复杂，湿片高倍镜检下易漏检、误判第19页,共33页，2024年2月25日，星期天20目前白带常规镜检特点及存在问题：1、镜检观察，检测标准不统一，操作人员需依赖较强的工作经验，人为因素影响大，主观性强，稍有疏忽或经验欠缺者，容易漏检，误判。2、医院标本量大、劳动强度大，易视觉疲劳致漏检，误判。3、一般是不进行染色，因此乳酸杆菌不好辨认；4、观察清洁度容易受到涂片厚薄、均匀与否、细胞破碎的影响，5、观察念珠菌容易受到杂质粒子干扰；6、观察滴虫容易受到温度的影响或送检时间及时性的影响；7、线索细胞在镜下不好观察，因此不好判定BV第20页,共33页，2024年2月25日，星期天21四、检测方法比较细菌性阴道病唾液酸酶检测

唾液酸酶活性增加的主要病原菌是高浓度加德纳菌、普雷沃菌、消化链球菌、动弯杆菌等革兰氏阴性菌和厌氧菌增多的产物。单一检测有可能漏检部分加德纳菌、动弯杆菌，能通过脯氨酸氨基肽酶活性检测才能弥补其不足提高BV检出率。

第21页,共33页，2024年2月25日，星期天22国外研究情况

美国微生物研究协会：1991年5月在《临床微生物研究杂志》上发表了“5分钟快速实现白色念珠菌菌落的鉴定方法”均对白色念珠菌特异性酶“L-脯氨酸氨基肽酶”、“乙酰氨基葡萄糖苷酶”快速检测的研究作了详细报导。2005年4月在《生物医学与药物疗法》上发表的“阴道毛滴虫中的N-乙酰-β-D-氨基己糖酶底物特异性和抑制剂活性”说明滴虫具有乙酰氨基葡萄糖苷酶活性第22页,共33页，2024年2月25日，星期天23

检验结果评估

项目灵敏度特异性总符合率备注乳酸杆菌pH+H2O2

95.7%（1316/1375）86.7%（507/585）93%（1823/1960）与革兰氏染色镜检双片结果对比白细胞WBC酯酶91.4%（702/768）92.8%（1106/1192）92.9%（1808/1960)与湿片镜检三片结果对比BV唾液酸酶+脯氨酸氨肽酶95.9%(470/490)98.1%(1442/1470)97.5%(1912/1960)与染色高倍镜检线索细胞≥20%加Nugent评分结果对比念珠菌乙酰氨基葡萄糖苷酶+脯氨酸氨肽酶81.9%(440/537)91.2%(1298/1423)88.7%(1738/1960)与念珠菌培养结果对比滴虫乙酰氨基葡萄糖苷酶85.7%(90/105)99.1%(1839/1855)98.4%(1929/1960)与滴虫培养结果对比84.7%11.2%第23页,共33页，2024年2月25日，星期天24镜检与五项联检比较项目显微镜常规镜检（形态学）五项联检（干化学酶法）设备需否需，显微镜需，温育设备需否长期经验累积需长期经验积累不需，只需简单培训结果的主客观性主观人为因素大,标准不统一客观，标准统一白细胞检测问题受细胞破损影响不受细胞破损影响细菌性阴道病检测检测线索细胞，理论上存在假阳性，湿片不易观察，存在假阴性不漏检滴虫检测能检测，但受温度和粒子影响能检测念珠菌检测能检测，但受粒子影响能检测第24页,共33页，2024年2月25日，星期天25临床实验结果项目镜检检出率五联检检出率提高检出率备注BV2.4%12.8%10.4%289份标本霉菌11%26%15%212份标本滴虫9%12%3%180份标本第25页,共33页，2024年2月25日，星期天26临床检测意义1、女性阴道微生态状况(清洁度）评估2、女性生殖道感染性疾病的筛查

细胞溶性阴道炎、外阴阴道念珠菌病、细菌性阴道病、滴虫阴道炎3、辅助诊断宫颈炎、盆腔炎（子宫内膜炎、输卵管炎）、不孕不育等4、术后感染追踪5、疗效评价

第26页,共33页，2024年2月25日，星期天27四、妇科联检试剂4.1.通过六项测定1、过氧化氢浓度测定2、白细胞酯酶活性测定3、唾液酸苷酶活性测定4、脯氨酸氨基肽酶活性测定5、氨基葡萄糖苷酶活性测定6、PH值

pH值≥4.8为滴虫pH值≤4.6为念珠菌可检测：1、乳酸杆菌2、白细胞（清洁度）3、细菌性阴道病4、念珠菌5、滴虫第27页,共33页，2024年2月25日，星期天284.2

检测原理１.过氧化氢浓度测定

标本中的过氧化氢经过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替比啉存在下，使TOOS氧化呈红色或紫红色，呈色深度与H2O2浓度成正比。2.白细胞酯酶活性测定

白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧存在的条件下呈蓝色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。3.唾液酸苷酶活性测定

唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酰神经氨酸，释放出溴吲哚基遇重氮盐起反应呈红色或紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性成正比。4.脯氨酸氨肽酶活性测定

厌氧生物以及白色念珠菌有很强的脯氨酸氨肽酶活性，水解L-脯氨酸-对硝基苯胺，释放出黄色的对硝基苯胺，呈色深度与脯氨酸氨肽酶活性成正比。5.氨基葡萄糖苷酶活性测定

白色念珠菌和滴虫有很强的乙酰氨基葡萄糖苷酶活性，水解对硝基苯-N-乙酰-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷，释放出对硝基苯酚，后者在碱性条件下呈黄色，呈色深度与乙酰氨基葡萄糖苷酶活性成正比。6.pH测定

正常白带pH为3.8-4.5，BV白带pH>4.5，滴虫白带pH大于5-6，霉菌白带pH在小于4.7。第28页,共33页，2024年2月25日，星期天29过氧化氢

用来表示分泌物中有益菌如乳酸杆菌的多少，阴性表明乳酸杆菌