安捷伦液相色谱仪HPLC系统中气泡对检测的影响及解决方法 液相色谱解决方案

第第页安捷伦液相色谱仪HPLC系统中气泡对检测的影响及解决方法液相色谱解决方案安捷伦液相色谱仪HPLC系统中气泡对检测的影响及解决方法利用安捷伦液相色谱仪分析时，若存在气泡，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。原因：一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡；二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净；三是在注入样品时不注意混入了空气。解决方法：1.吹氦脱气法使用在液体中比空气溶解度低的氦气，在0.1Mpa压力下，以约60ml/min流速通入流动相10-15min以驱除溶解的气体。此法使用于所有的溶剂。2.加热回流法此法的脱气效果较好；3.抽真空脱气法此时可使用微型真空泵，降压至0.05-0.07MPa即可除区溶解的气体。显然使用水泵连接抽滤瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成过滤机械杂质和脱气的双重任务。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化，故此法适用于单一溶剂体系脱气。对多元溶剂体系应预先脱气后再进行混合，以保证混合后的比例不变。4.超声波脱气法目前实验室使用zui广泛的脱气方法，将配制好的流动相连同容器一起放入超声波水漕中脱气10-20min即可。该方法操作简便，基本能满足日常分析的要求。5.在线真空脱气法把真空脱气装置串联到储液系统中，并结合膜过滤器，实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。此法的脱气效果明显优于上述几种方法，并适用于多元溶剂体系。6.在安捷伦液相色谱仪开始工作前，可以用注射器连接恒流泵的排空阀，抽入流动相，将流路中的空气驱赶干净。7.在注入样品前注意排出样品注射器中的空气。液相色谱仪的操作与基线问题处理高效液相色谱仪适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中针对这种精密而又运用广泛的科学仪器。下面我们来聊一聊基线。HPLC常见的基线问题主要有基线漂移以及基线噪音。基线漂移线漂移基线漂移是色谱工普遍遇到的问题。一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要30min的平衡时间，如果用了缓冲溶液、缓冲盐，或者在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，仍然发现基线漂移，原因可能有以下几种：1、柱温波动控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。2、流通池被污染或有气体用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(尽量断开柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。3、紫外灯能量不足更换新的紫外灯4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。基线噪音对于紫外检测器,氘灯光源打开后要预热30min以上,基线才能稳定。噪声是指与被测物无关的检测器输出信号的随机扰动变化,分短期噪声和长期噪声两种。基线噪音(规则的)产生基线噪音的原因有：在流动相、检测器或泵中有空气;漏液;流动相混合不完全;温度影响(柱温过高,检测器未加热);在同一条线上有其他电子设备;泵振动。了避免基线噪音,在正式进样之前,需要对流动相脱气;冲洗系统以除去检测器或泵中的空气;检查管路接头是否松动;泵是否漏液;是否有盐析出和不正常的噪音,如有必要,更换泵密封;用手摇动使溶剂混合均匀或使用低粘度的溶剂减少差异或加上热交换器;有其他电子设备时断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正;泵振动时在系统中加入脉冲阻尼器。基线噪音(不规则的)(1)漏液：检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封,检查流通池是否漏液。(2)流动相污染、变质或由低质溶剂配成：检查流动相的组成。(3)流动相各溶剂不相溶：选择互溶的流动相。(4)检测器/记录仪电子元件的问题：断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。(5)系统内有气泡：用强极性溶液清洗系统;检测器内有气泡,清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器。(6)流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音):用硝酸清洗流通池;(7)检测器灯能量时不足更换灯;(8)色谱柱填料流失或阻塞:更换色谱柱。(9)流动相混合不均匀或混合器工作不正常:维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,不建议使用泵的混合装置。高效液相色谱仪操作步骤如下：1)过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4)进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5)有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。6)调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。7)设计走样方法。8)进样和进样后操作。9)关机时，先关计算机，再关液相色谱。10)填写登记本，由负责人签字。11)流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。12)柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。13)所有过柱子的液体均需严格的过滤。14)压力不能太大，可以不要超过2000p