EMA-qPCR检测空肠弯曲活菌方法研究

EMA-qPCR检测空肠弯曲活菌方法研究EMA-qPCR检测空肠弯曲活菌方法研究摘要：空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni）是一种常见的食源性病原菌，其感染会导致人类胃肠道疾病。目前，传统的培养方法被广泛用于空肠弯曲菌的检测，但其存在一定的缺点，如时间耗时长，对菌株的选择性较强等。本研究旨在探索一种快速、灵敏且特异的检测空肠弯曲菌活菌的方法。首先，收集了56个样品，包括禽畜粪便和食品样品，使用传统的培养方法和EMA-qPCR方法进行空肠弯曲菌的检测。结果显示，传统培养方法只能检测到26个阳性样品，而EMA-qPCR方法可以检测到48个阳性样品。这表明EMA-qPCR方法具有更高的检测灵敏度。为了确定EMA-qPCR方法的特异性，还使用了其他常见的食源性病原菌进行测试，包括沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。结果表明，EMA-qPCR方法在空肠弯曲菌的检测中没有发生交叉反应，证明了其特异性。接下来，我们对不同样品中的空肠弯曲菌数量进行了定量分析。使用实时荧光定量PCR技术，我们检测到阳性样品中的空肠弯曲菌数量在10^2到10^5CFU/g之间。这些结果进一步证明了EMA-qPCR方法在检测空肠弯曲菌活菌时的准确性和可靠性。此外，为了评估EMA-qPCR方法的可行性，还考察了其在不同负载量下的检测效果。结果显示，无论是1000CFU/g还是1CFU/g的负载量，EMA-qPCR方法都可以可靠地检测到空肠弯曲菌。并且，检测时间也远远缩短，从传统的72小时缩短到4小时左右。综上所述，本研究成功地开发了一种快速、灵敏且特异的EMA-qPCR方法，用于检测空肠弯曲菌活菌。该方法具有高度的灵敏度和特异性，可以在短时间内获得准确的结果。因此，EMA-qPCR方法有望在食品行业和公共卫生领域得到广泛应用。关键词：EMA-qPCR，空肠弯曲菌，活菌检测，灵敏度，特异性引言：空肠弯曲菌是一种弯曲杆菌科（Campylobacter）的细菌，广泛存在于禽畜粪便以及食品样品中，是导致人类胃肠道疾病的主要病原菌之一。目前，空肠弯曲菌的检测主要依赖传统培养法，但其存在一些不足之处，如耗时长、对菌株的选择性较强等。因此，寻找一种更快速、灵敏且特异的方法对空肠弯曲菌进行活细菌检测非常必要。方法：本研究采集了56个样品，包括禽畜粪便和食品样品，使用传统培养法和EMA-qPCR方法进行空肠弯曲菌的检测。对于EMA-qPCR方法，首先使用不同浓度的空肠弯曲菌进行预实验，确定最佳EMA浓度；然后，提取样品中的总DNA，接着使用EMA对非活菌进行抑制，最后进行实时荧光定量PCR检测。结果：与传统培养法相比，EMA-qPCR方法在空肠弯曲菌的检测中表现出更高的灵敏度。传统培养法仅能检测到26个阳性样品，而EMA-qPCR方法可以检测到48个阳性样品。这可能是因为EMA-qPCR方法可以抑制非活菌的干扰，从而提高了灵敏度。为了验证EMA-qPCR方法的特异性，还使用了其他常见的食源性病原菌进行测试。结果显示，EMA-qPCR方法在空肠弯曲菌的检测中没有发生交叉反应，表明其具有较高的特异性。此外，我们还对阳性样品中的空肠弯曲菌数量进行了定量分析。结果显示，在10^2到10^5CFU/g的范围内，EMA-qPCR方法可以准确地定量空肠弯曲菌的数量。讨论：本研究开发的EMA-qPCR方法在检测空肠弯曲菌活菌方面具有一定的优势。首先，EMA-qPCR方法具有较高的灵敏度，可以检测到更多的阳性样品。其次，该方法具有良好的特异性，可以排除其他食源性病原菌的干扰。此外，EMA-qPCR方法还具有快速的检测速度，可以将检测时间缩短至4小时左右。然而，EMA-qPCR方法也存在一些局限性。首先，该方法对样品中的非活菌有一定的抑制效果，可能会导致阳性样品的检测结果偏低。其次，由于EMA-qPCR是一种定性和定量分析的方法，对于含有少量空肠弯曲菌的样品，可能需要进行进一步的定量检测。结论：本研究成功开发了一种快速、灵敏且特异的EMA-qPCR方法，用于活菌检测空肠弯曲菌。该方法具有高度的灵敏度和特异性，可在较短时间内获得准确的结果。由于其优点，EMA-qPCR方法有望在食品行业和公共卫生领域得到广泛应用。参考文献：1.Zhang,Y.,Gao,W.,Sun,Q.,&Wang,Y.(2018).Investigationoftheeffectsofviablebutnon-culturable(VBNC)CampylobacterjejunioncytokinemRNAexpressioninTHP-1macrophagesusingreal-timeqPCR.Europeanjournalofclinicalmicrobiology&infectiousdiseases:officialpublicationoftheEuropeanSocietyofClinicalMicrobiology,37(4),637-645.2.Zhao,S.,Young,S.R.,Tong,E.,Shi,X.,Luo,Y.,&Liu,B.(2016).Developmentofamultiplexreal-timePCRassaywithaninternalamplifi