高中生物第十单元生物技术实践第35讲微生物的培养与应用省公开课一等奖新名师获奖课件

第35讲微生物培养与应用第1页考情分析·备考导航最新考纲全国卷六年考题统计全国卷六年考题分值统计1.微生物分离和培养全国Ⅰ卷T39;全国Ⅲ卷T39;全国Ⅱ卷T39;全国Ⅱ卷T39;全国卷T392.某种微生物数量测定全国Ⅰ卷T39;全国Ⅰ卷T393.培养基对微生物选择作用全国Ⅰ卷T39;全国Ⅰ卷T39;全国Ⅱ卷T394.利用微生物发酵来生产特定产物以及微生物在其它方面应用第2页知识梳理

自主学习扎实基础1.培养基(1)概念:人们按照微生物对

不一样需求,配制出供其生长繁殖

。(2)成份:(3)分类:按照物理性质能够分为

和固体培养基。考点一微生物试验室培养营养物质营养基质水、碳源、氮源、无机盐pH氧气液体培养基第3页2.无菌技术(1)目标:取得

。(2)关键:预防

入侵。(3)无菌技术主要方法及适用对象[连线]答案：纯净培养物外来杂菌第4页3.大肠杆菌纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算→

→溶化→

→

.(2)纯化大肠杆菌方法①纯化培养原理:在培养基上得到

肉眼可见

,即可取得较纯菌种。②纯化大肠杆菌关键步骤:

。③惯用微生物接种方法有两种。a.平板划线法:经过

在琼脂固体培养基表面

操作,将聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面。b.

法:将菌液进行一系列

,然后将

.

菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面,进行培养。(3)菌种保留方法①对于频繁使用菌种,能够采取

方法。②对于需要长久保留菌种,能够采取

方法。称量灭菌倒平板由一个细胞繁殖而来菌落接种接种环连续划线稀释涂布平板梯度稀释不一样稀释度暂时保藏甘油管藏第5页重点透析

剖析考点拓展深化微生物纯化培养方法平板划线法稀释涂布平板法优点能够观察菌落特征,对混合菌进行分离能够计数,能够观察菌落特征缺点不能计数吸收量较少,较麻烦,平板不干燥效果不好,轻易蔓延第6页注意事项(1)接种环灼烧①第一次划线前:杀死接种环上微生物,防止污染培养物②每次划线前:杀死残留菌种,确保每次划线菌种来自上次划线末端③划线结束后:杀死残留菌种,防止污染环境和感染操作者(2)灼烧接种环之后,要冷却后再进行操作,以免温度太高杀死菌种(3)划线时最终一区域不要与第一区域相连(4)划线用力要大小适当,预防用力过大将培养基划破(1)稀释操作时:每支试管及其中9mL水、移液管等均需灭菌;操作时,试管口和移液管应在离火焰1～2cm处(2)涂布平板时①涂布器用体积分数为70%酒精消毒,取出时,让多出酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少许酒精涂布器在酒精灯火焰上引燃②不要将过热涂布器放在盛放酒精烧杯中,以免引燃其中酒精③酒精灯与培养皿距离要适当,移液管管头不要接触任何物体第7页题组例练

分类例练提炼方法1.(·江西宜春模拟)回答以下问题:(1)微生物所需营养成份普通包含

、

、水和无机盐。

(2)培养微生物时,除考虑微生物生长所需营养外,还要考虑微生物生长所需温度、

以及是否需要O2等。

解析:(1)微生物营养成份主要有碳源、氮源、水和无机盐等。(2)微生物培养需要考虑温度、pH和O2等条件。答案:(1)碳源氮源(2)pH第8页(3)对培养基进行灭菌时,多采取

法,而对接种环灭菌时则用

法。

(4)平板划线时,为确保每次划线都从上次划线末端微生物浓度开始,所以每次划线前都要

,平板划线结束后,最终一次划线不能与第一次划线

。

解析:(3)培养基因为含有微生物生活所必需水,所以只能用高压蒸汽灭菌法灭菌,接种环属于金属接种工具,能够用灼烧灭菌。(4)平板划线法接种时,为确保每次划线都不能有杂菌污染,每次划线前都要对接种环灼烧灭菌;平板划线结束后,最终一次划线不能与第一次划线相交(相接、相连、交叉等)。答案:(3)高压蒸汽灭菌灼烧灭菌(4)对接种环灼烧灭菌相交(相接、相连、交叉等)第9页2.(·安徽名校联盟模拟)依据微生物分离和培养知识,回答以下问题:(1)分离纯化大肠杆菌关键步骤是

,该步骤惯用方法有两种:

和

,其中后者是将菌液进行一系列

,然后将不一样稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面进行培养。

解析:(1)分离纯化大肠杆菌关键步骤是接种,该步骤惯用方法有:平板划线法和稀释涂布平板法。其中稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释,然后将不一样稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面进行培养。答案:(1)接种平板划线法稀释涂布平板法梯度稀释第10页(2)在微生物试验室培养过程中,取得纯净培养物关键是

,所以需要对培养基和培养皿进行

处理,操作者双手需要进行清洁和

。

(3)分离分解尿素细菌培养基中要以尿素为唯一

(填“碳源”或“氮源”)。

解析:(2)在微生物试验室培养过程中,取得纯净培养物关键是预防外来杂菌入侵,所以需要对培养基和培养皿进行灭菌处理,操作者双手需要进行清洁和消毒。(3)分离分解尿素细菌培养基中要以尿素为唯一氮源。答案:(2)预防外来杂菌入侵灭菌消毒(3)氮源第11页知识梳理

自主学习扎实基础1.土壤中分解尿素细菌分离与计数考点二微生物分离、计数及应用项目详细内容试验原理(1)能合成细菌才能分解尿素(2)配制以为唯一氮源培养基,能够生长细菌就是能分解尿素细菌数量统计(1)

法(显微镜下用特定细菌计数板或血细胞计数板)(2)间接计数法:

.试验流程土壤取样→样品稀释→培养与观察→细菌计数脲酶尿素直接计数稀释涂布平板法第12页2.分解纤维素微生物分离(1)纤维素酶①组成:纤维素酶是一个

,普通认为它最少包含三种组分,即

。②作用:复合酶C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶纤维素

.纤维二糖葡萄糖(2)纤维素分解菌筛选①原理:②筛选方法:

染色法,即经过是否产生

来筛选纤维素分解菌。红色复合物透明圈刚果红透明圈第13页③培养基:以

为唯一碳源选择培养基。④试验流程:土壤取样:富含

环境↓选择培养:用

培养,以增加纤维素分解菌浓度↓

:制备系列稀释液↓涂布平板:将样品涂布到

培养基上↓挑选产生

菌落纤维素纤维素选择培养基梯度稀释判别纤维素分解菌透明圈第14页重点透析

剖析考点拓展深化1.筛选微生物两个实例比较比较项目土壤中分解尿素细菌分离分解纤维素微生物分离方法利用以尿素为唯一氮源选择培养基进行选择培养利用纤维素为唯一碳源选择培养基进行选择培养原理只有分解尿素细菌能够合成脲酶,才能在以尿素为唯一氮源培养基上生长因为培养基中纤维素为唯一碳源,只有分解纤维素微生物能够生存下来从而大量繁殖鉴定在培养基中加入酚红指示剂,指示剂变红说明尿素被分解,从而说明菌落中菌体为分解尿素细菌刚果红染色法,菌落周围出现红色消失透明圈,该菌落为分解纤维素微生物菌落第15页2.测定微生物数量惯用方法(1)显微镜直接计数法①原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积样品中微生物数量。②方法:用计数板计数。③缺点:不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)①原理:当样品稀释度足够高时,培养基表面生长一个菌落,起源于样品稀释液中一个活菌。经过统计平板上菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。②计算公式:每克样品中菌株数=(C÷V)×M,其中,C代表某一稀释度下平板上生长平均菌落数,V代表涂布平板时所用稀释液体积(mL),M代表稀释倍数。③操作:设置重复组,增强试验说服力与准确性。同时为了确保结果准确,普通选择菌落数在30～300平板进行计数。第16页3.选择培养作用原理(1)在培养基中加入某种化学物质,如加入青霉素能够分离出酵母菌和霉菌;加入高浓度食盐能够得到金黄色葡萄球菌。这里加入是在满足基本所需培养成份基础上加入。(2)改变培养基中营养成份,如缺乏氮源时能够分离出固氮微生物;以石油作为唯一碳源时,能够分离出能消除石油污染微生物。(3)改变微生物培养条件,如将培养基放在高温环境中培养能够得到耐高温微生物,在高盐环境中培养可分离得到耐盐菌。第17页4.选择培养基与判别培养基比较种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入一些化学物质依据一些微生物对一些物质或环境条件癖好、抗性而设计从众多微生物中分离所需微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌判别培养基培养基中加入某种指示剂或化学药品依据微生物产生某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应,产生显著特征改变而设计判别不一样种类微生物伊红—美蓝培养基能够判别大肠杆菌第18页【易错点拨】

正确了解“选择菌落在30～300平板”计数(1)只好到1个菌落数在30～300平板是错误。原因是不符合试验重复标准,易受到偶然原因影响。(2)并不是只要得到3个“菌落数在30～300平板”即可,而应该是涂布同一稀释度平板符合“菌落数在30～300平板”且无较大差异,才能按照计算公式进行计算,如得到3个平板菌落数分别为230,30,240,即使菌落数均在“30～300”之间,但“30”与“230”“240”差异太大,应重新试验找出原因。第19页题组例练

分类例练提炼方法1.(·江西赣州一模)某试验小组欲从豆油污染土壤中筛选出能高效降解脂肪菌株。回答以下问题:(1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以

为唯一碳源固体培养基上,从功效上讲,该培养基属于

培养基。

(2)为防止培养皿污染,需将培养皿呈

状态放置。为防止培养液中菌体浓度过高,需将培养液进行

处理。

解析:(1)欲筛选出能降解豆油菌株,培养基中应只含有豆油而无其它碳源,不能降解豆油细菌在此培养基上不能生存;从功效上讲,这类培养基属于选择培养基。(2)将培养皿呈倒置状态放置,可防止培养皿污染;为防止培养液中菌体浓度过高,需将培养液进行梯度稀释处理。答案:(1)豆油选择(2)倒置梯度稀释第20页解析:(3)因为脂肪遇苏丹Ⅳ试剂会出现红色,遇苏丹Ⅲ试剂会出现橘黄色,所认为了筛选出菌株,可将适量苏丹Ⅳ或苏丹Ⅲ试剂滴加在平板中菌落周围,洗去浮色后,假如菌落周围现象是出现透明圈、不出现红色圈或橘黄色圈,则说明此菌能够分泌脂肪酶。(4)分离纯化菌种时,需采取接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法,使聚集在一起细菌细胞分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落,方便纯化菌种。答案:(3)苏丹Ⅳ(苏丹Ⅲ)出现透明圈、不出现红色圈(橘黄色圈)(4)平板划线(或稀释涂布平板)(3)为了筛选出菌株,可将适量

试剂滴加在平板中菌落周围,洗去浮色后,假如菌落周围现象是

,则说明此菌能够分泌脂肪酶。

(4)纯化菌种时,为了得到单菌落,可采取

法接种于新培养基平板上。

第21页2.(·全国Ⅲ卷,39)某同学用新鲜泡菜滤液为试验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明,乳酸菌产生乳酸能溶解培养基中碳酸钙。回答以下问题:(1)分离纯化乳酸菌时,首先需要用

对泡菜滤液进行梯度稀释,进行梯度稀释理由是

。

(2)推测在分离纯化所用培养基中加入碳酸钙作用有

和

。

分离纯化时应挑选出

菌落作为候选菌。

解析:(1)在对泡菜滤液进行梯度稀释时,要预防杂菌污染,所以需要用无菌水;进行梯度稀释原因是泡菜滤液中乳酸菌等菌浓度高,若直接培养,极难分离得到单菌落。(2)已知分离纯化乳酸菌所用固体培养基,因含有碳酸钙而不透明,而乳酸菌产生乳酸能溶解培养基中碳酸钙,所以培养基中加入碳酸钙作用:一是可判别乳酸菌,二是能中和乳酸菌产生乳酸。分离纯化时,挑选出含有透明圈菌落即为乳酸菌,可作为候选菌。答案:(1)无菌水泡菜滤液中菌浓度高,直接培养极难分离得到单菌落(2)判别乳酸菌中和产生乳酸(或酸)含有透明圈第22页(3)乳酸菌在-20℃长久保留时,菌液中常需要加入一定量

(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。

解析:(3)长久保留菌种时,常采取甘油管藏方法,在菌液中加入一定量甘油,充分混匀后放于-20℃冷冻箱中保留。答案:(3)甘油第23页3.(·全国Ⅰ卷,39)植物秸秆中纤维素可被一些微生物分解。回答以下问题:(1)分解秸秆中纤维素微生物能分泌纤维素酶,该酶是由3种组分组成复合酶,其中葡萄糖苷酶可将

分解成

。

(2)在含纤维素培养基中加入刚果红(CR)时,CR可与纤维素形成

色复合物。用含有CR该种培养基培养纤维素分解菌时,培养基上会出现以该菌菌落为中心

。

解析:(1)纤维素酶包含三种组分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,C1酶、CX酶催化纤维素分解成纤维二糖,葡萄糖苷酶将纤维二糖分解成葡萄糖。(2)CR能与培养基中纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后,CR—纤维素复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌菌落为中心透明圈。答案:(1)纤维二糖葡萄糖(2)红透明圈第24页(3)为从富含纤维素土壤中分离取得纤维素分解菌单菌落,某同学设计了甲、乙两种培养基(成份见下表):酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR溶液水培养基甲++++-++培养基乙+++-+++注:“+”表示有,“-”表示无。据表判断,培养基甲

(填“能”或“不能”)用于分离和判别纤维素分解菌,原因是