DB32T3762.11-2020新型冠状病毒检测技术规范 第11部分:全基因组测序_第1页
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文档简介

ICS11.020

C62

DB32

江苏省地方标准

DB32/T3762.11—2020

新型冠状病毒检测技术规范

第11部分:全基因组高通量测序

TechnicalspecificationsforSARS-CoV-2detection

Part11:Wholegenomehigh-throughputsequencing

2020-07-29发布2020-07-30实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/T3762.11—2020

新型冠状病毒检测技术规范第11部分:全基因组高通量测序

1范围

本部分规定了新型冠状病毒全基因组高通量测序的环境与设施、设备与耗材、试剂、样本前处理与

核酸提取、全基因组测序、结果分析。

本部分适用于新型冠状病毒全基因组高通量测序。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

新型冠状病毒实验室生物安全指南中华人民共和国国家卫生健康委员会

医疗机构临床基因扩增管理办法原卫生部办公厅

医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则原卫生部检验中心

国家卫生计生委对高通量测序试点实验室的要求原国家卫生计生委

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

3.1

全基因组测序wholegenomesequencing

对生物体整个基因组序列进行测定,以获得完整的基因组信息。

3.2

高通量测序high-throughputsequencing

能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定的技术,又称“下一代”测序

("next-generation"sequencing)或深度测序(deepsequencing)技术。

3.3

Reads

高通量测序平台产生的序列称为reads,即测序读到的碱基序列片段,是测序的最小单位。

3.4

测序深度sequencingdepth

测序得到的总碱基数与待测基因组大小的比值。

1

DB32/T3762.11—2020

3.5

测序覆盖度sequencingcoverage

测序得到的序列占整个基因组的比例。

4环境与设施

4.1实验室资质及级别要求

应符合《新型冠状病毒实验室生物安全指南》的要求,未经培养的感染性材料的操作在采用可靠的

方法灭活前进行核酸提取及临床样本的灭活等操作,应在生物安全二级实验室(BSL-2)进行,同时采

用生物安全三级实验室(BSL-3)的个人防护;感染性材料或活病毒在采用可靠方法灭活后进行的核酸

检测操作应在BSL-2进行。cDNA制备后的相关操作可在生物安全一级实验室(BSL-1)进行。全基因组

测序实验室应符合GB19489、《国家卫生计生委对高通量测序试点实验室的要求》、《医疗机构临床

基因扩增管理办法》、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》相关要求。

4.2操作人员资质及防护要求

实验操作人员应经过生物安全培训并取得实验活动上岗证,在身体健康状态良好的情况下准入。样

本制备及核酸提取防护参照DB32/T3762.3的第4章进行,测序相关操作采用BSL-1的个人防护。

5设备与耗材

5.1设备

PCR扩增仪、核酸提取仪、核酸定量仪、高通量测序仪。

5.2耗材

微量移液器及各种配套带滤芯Tip头、96孔板磁力架、1.5mLEP管、0.2mL8联排管、96孔PCR板。

6试剂

核酸提取试剂盒、核酸定量试剂盒、第一链cDNA合成试剂盒、随机六聚体引物、经验证可靠的适

合多重反应的PCR扩增试剂盒、DNA纯化磁珠、文库制备试剂盒、高通量测序试剂盒。

7样本前处理与核酸提取

参照DB32/T3762.3的第7章进行。

8模板制备

8.1cDNA制备

以提取的核酸为模板,采用第一链cDNA合成试剂盒和随机六聚体引物,根据试剂盒说明书在PCR

扩增仪上制备第一链cDNA。

2

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8.2混合引物

8.2.1将所有扩增引物(附录A)配置为100µM储存浓度,将49对Pool1的引物各取5µL混匀,得

490µLPool1引物池(引物总浓度为100µM),同样将49对Pool2的引物各取5µL混匀,得490µLPool

2引物池(引物总浓度为100µM)。

8.2.2以去离子水分别将Pool1和Pool2引物池作10倍稀释,使其引物总浓度均为10µM,分装后储

存以防止污染和降解。

8.3多重PCR扩增

8.3.1采用PCR扩增试剂盒,根据试剂盒说明书配置多重PCR扩增体系,反应体系中每一条引物的

终浓度为0.015µM,Pool1和Pool2各配置一套扩增体系,每25µL反应体系中加入2µLcDNA模板。

8.3.2按以下参数进行PCR扩增:98℃30s;98℃15s,65℃5min,扩增30循环;4℃hold。

8.4PCR产物的纯化

8.4.1将每一份样本的Pool1扩增产物和Pool2扩增产物混合于新的8联排PCR管或96孔PCR板中。

8.4.2采用DNA纯化磁珠法对混合后的扩增产物进行纯化,以30µLTEbuffer(10mMtris-HClpH8.0,

0.1mMEDTA)洗脱纯化后的产物。

9DNA文库构建

9.1纯化产物的定量与标化

使用核酸定量试剂盒对纯化产物进行双链DNA定量,根据所使用建库试剂盒说明对其进行标化。

9.2DNA文库制备与混合

根据所使用的建库试剂盒说明书进行文库制备、定量和文库混合。

10上机测序

根据高通量测序试剂盒和高通量测序仪操作说明完成试剂装载,设置测序参数进行测序。

11结果分析

可采用不同的生物信息学软件进行测序结果的分析:首先去除测序数据中的PCR引物序列(按照最

大引物长度30bp进行Trim)和低质量的Reads,然后以SARS-CoV-2参考基因组(GeneBank号:

MN908947.3)为模板进行序列mapping,mapping之后对测序覆盖度和测序深度进行分析,最终生成一

致性(consensus)序列,即为待测样本的全基因组序列。

3

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AA

附录A

(规范性附录)

多重PCR扩增引物序列

序号引物名称所属引物池引物序列(5′-3′)长度

1nCoV-2019_1_LEFTPool1ACCAACCAACTTTCGATCTCTTGT24

2nCoV-2019_1_RIGHTPool1AAGTGCCATCTTTAAGATGTTGACG25

3nCoV-2019_2_LEFTPool2CTGTTTTACAGGTTCGCGACGT22

4nCoV-2019_2_RIGHTPool2TAAGGATCAGTGCCAAGCTCGT22

5nCoV-2019_3_LEFTPool1CGGTAATAAAGGAGCTGGTGGC22

6nCoV-2019_3_RIGHTPool1AAGGTGTCTGCAATTCATAGCTCT24

7nCoV-2019_4_LEFTPool2GGTGTATACTGCTGCCGTGAAC22

8nCoV-2019_4_RIGHTPool2CACAAGTAGTGGCACCTTCTTTAGT25

9nCoV-2019_5_LEFTPool1TGGTGAAACTTCATGGCAGACG22

10nCoV-2019_5_RIGHTPool1ATTGATGTTGACTTTCTCTTTTTGGAGT28

11nCoV-2019_6_LEFTPool2GGTGTTGTTGGAGAAGGTTCCG22

12nCoV-2019_6_RIGHTPool2TAGCGGCCTTCTGTAAAACACG22

13nCoV-2019_7_LEFTPool1ATCAGAGGCTGCTCGTGTTGTA22

14nCoV-2019_7_RIGHTPool1TGCACAGGTGACAATTTGTCCA22

15nCoV-2019_8_LEFTPool2AGAGTTTCTTAGAGACGGTTGGGA24

16nCoV-2019_8_RIGHTPool2GCTTCAACAGCTTCACTAGTAGGT24

17nCoV-2019_9_LEFTPool1TCCCACAGAAGTGTTAACAGAGGA24

18nCoV-2019_9_RIGHTPool1TTTATGACAGCATCTGCCACAA22

19nCoV-2019_10_LEFTPool2TGAGAAGTGCTCTGCCTATACAGT24

20nCoV-2019_10_RIGHTPool2TCATCTAACCAATCTTCTTCTTGCTCT27

21nCoV-2019_11_LEFTPool1GGAATTTGGTGCCACTTCTGCT22

22nCoV-2019_11_RIGHTPool1TCATCAGATTCAACTTGCATGGCA24

23nCoV-2019_12_LEFTPool2AAACATGGAGGAGGTGTTGCAG22

24nCoV-2019_12_RIGHTPool2TTCACTCTTCATTTCCAAAAAGCTTGA27

25nCoV-2019_13_LEFTPool1TCGCACAAATGTCTACTTAGCTGT24

26nCoV-2019_13_RIGHTPool1ATAACCACAGCAGTTAAAACAC22

27nCoV-2019_14_LEFTPool2CATCCAGATTCTGCCACTCTTGT23

28nCoV-2019_14_RIGHTPool2AGTTTCCACACAGACAGGCATT22

29nCoV-2019_15_LEFTPool1ACAGTGCTTAAAAAGTGTAAAAGTGCC27

30nCoV-2019_15_RIGHTPool1AGAAACAGAAACTGTAGCTGGC22

31nCoV-2019_16_LEFTPool2AATTTGGAAGAAGCTGCTCGGT22

32nCoV-2019_16_RIGHTPool2CACAACTTGCGTGTGGAGGTTA22

33nCoV-2019_17_LEFTPool1CTTCTTTCTTTGAGAGAAGTGAGGACT27

34nCoV-2019_17_RIGHTPool1TTTGTTGGAGTGTTAACAATGCAGT25

35nCoV-2019_18_LEFTPool2TGGAAATACCCACAAGTTAATGGTTTAAC29

4

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序号引物名称所属引物池引物序列(5′-3′)长度

36nCoV-2019_18_RIGHTPool2AGCTTGTTTACCACACGTACAAGG24

37nCoV-2019_19_LEFTPool1GCTGTTATGTACATGGGCACACT23

38nCoV-2019_19_RIGHTPool1TGTCCAACTTAGGGTCAATTTCTGT25

39nCoV-2019_20_LEFTPool2ACAAAGAAAACAGTTACACAACAACCA27

40nCoV-2019_20_RIGHTPool2ACGTGGCTTTATTAGTTGCATTGTT25

41nCoV-2019_21_LEFTPool1TGGTGGCTATTGATTATAAACACTACACA29

42nCoV-2019_21_RIGHTPool1TAGATCTGTGTGGCCAACCTCT22

43nCoV-2019_22_LEFTPool2ACTACCGAAGTTGTAGGAGACATTATACT29

44nCoV-2019_22_RIGHTPool2ACAGTATTCTTTGCTATAGTAGTCGGC27

45nCoV-2019_23_LEFTPool1ACAACTACTAACATAGTTACACGGTGT27

46nCoV-2019_23_RIGHTPool1ACCAGTACAGTAGGTTGCAATAGTG25

47nCoV-2019_24_LEFTPool2AGGCATGCCTTCTTACTGTACTG23

48nCoV-2019_24_RIGHTPool2ACATTCTAACCATAGCTGAAATCGGG26

49nCoV-2019_25_LEFTPool1GCAATTGTTTTTCAGCTATTTTGCAGT27

50nCoV-2019_25_RIGHTPool1ACTGTAGTGACAAGTCTCTCGCA23

51nCoV-2019_26_LEFTPool2TTGTGATACATTCTGTGCTGGTAGT25

52nCoV-2019_26_RIGHTPool2TCCGCACTATCACCAACATCAG22

53nCoV-2019_27_LEFTPool1ACTACAGTCAGCTTATGTGTCAACC25

54nCoV-2019_27_RIGHTPool1AATACAAGCACCAAGGTCACGG22

55nCoV-2019_28_LEFTPool2ACATAGAAGTTACTGGCGATAGTTGT26

56nCoV-2019_28_RIGHTPool2TGTTTAGACATGACATGAACAGGTGT26

57nCoV-2019_29_LEFTPool1ACTTGTGTTCCTTTTTGTTGCTGC24

58nCoV-2019_29_RIGHTPool1AGTGTACTCTATAAGTTTTGATGGTGTGT29

59nCoV-2019_30_LEFTPool2GCACAACTAATGGTGACTTTTTGCA25

60nCoV-2019_30_RIGHTPool2ACCACTAGTAGATACACAAACACCAG26

61nCoV-2019_31_LEFTPool1TTCTGAGTACTGTAGGCACGGC22

62nCoV-2019_31_RIGHTPool1ACAGAATAAACACCAGGTAAGAATGAGT28

63nCoV-2019_32_LEFTPool2TGGTGAATACAGTCATGTAGTTGCC25

64nCoV-2019_32_RIGHTPool2GGTAATAGCACATCACTACGCAAC24

65nCoV-2019_33_LEFTPool1ACTTTTGAAGAAGCTGCGCTGT22

66nCoV-2019_33_RIGHTPool1TGGACAGTAAACTACGTCATCAAGC25

67nCoV-2019_34_LEFTPool2TCCCATCTGGTAAAGTTGAGGGT23

68nCoV-2019_34_RIGHTPool2AGTGAAATTGGGCCTCATAGCA22

69nCoV-2019_35_LEFTPool1TGTTCGCATTCAACCAGGACAG22

70nCoV-2019_35_RIGHTPool1ACTTCATAGCCACAAGGTTAAAGTCA26

71nCoV-2019_36_LEFTPool2ATTACAGTTAATGTTTTAGCTTGGTTGTA22

72nCoV-2019_36_RIGHTPool2GAACAAAGACCATTGAGTACTCTGGA26

73nCoV-2019_37_LEFTPool1ACACACCACTGGTTGTTACTCAC23

74nCoV-2019_37_RIGHTPool1GTCCACACTCTCCTAGCACCAT22

75nCoV-2019_38_LEFTPool2ACTGTGTTATGTATGCATCAGCTGT25

76nCoV-2019_38_RIGHTPool2ATCATAAACACCAAGAGTCAGTCTAAA25

5

DB32/T3762.11—2020

序号引物名称所属引物池引物序列(5′-3′)长度

77nCoV-2019_39_LEFTPool1AGTATTGCCCTATTTTCTTCATAACTGGT29

78nCoV-2019_39_RIGHTPool1TGTAACTGGACACATTGAGCCC22

79nCoV-2019_40_LEFTPool2TGCACATCAGTAGTCTTACTCTCAGT26

80nCoV-2019_40_RIGHTPool2CATGGCTGCATCACGGTCAAAT22

81nCoV-2019_41_LEFTPool1GTTCCCTTCCATCATATGCAGCT23

82nCoV-2019_41_RIGHTPool1TGGTATGACAACCATTAGTTTGGCT25

83nCoV-2019_42_LEFTPool2TGCAAGAGATGGTTGTGTTCCC22

84nCoV-2019_42_RIGHTPool2CCTACCTCCCTTTGTTGTGTTGT23

85nCoV-2019_43_LEFTPool1TACGACAGATGTCTTGTGCTGC22

86nCoV-2019_43_RIGHTPool1AGCAGCATCTACAGCAAAAGCA22

87nCoV-2019_44_LEFTPool2TGCCACAGTACGTCTACAAGCT22

88nCoV-2019_44_RIGHTPool2AACCTTTCCACATACCGCAGAC22

89nCoV-2019_45_LEFTPool1TACCTACAACTTGTGCTAATGACCC25

90nCoV-2019_45_RIGHTPool1AAATTGTTTCTTCATGTTGGTAGTTAGAGA30

91nCoV-2019_46_LEFTPool2TGTCGCTTCCAAGAAAAGGACG22

92nCoV-2019_46_RIGHTPool2CACGTTCACCTAAGTTGGCGTA22

93nCoV-2019_47_LEFTPool1AGGACTGGTATGATTTTGTAGAAAACCC28

94nCoV-2019_47_RIGHTPool1AATAACGGTCAAAGAGTTTTAACCTCTC28

95nCoV-2019_48_LEFTPool2TGTTGACACTGACTTAACAAAGCCT25

96nCoV-2019_48_RIGHTPool2TAGATTACCAGAAGCAGCGTGC22

97nCoV-2019_49_LEFTPool1AGGAATTACTTGTGTATGCTGCTGA25

98nCoV-2019_49_RIGHTPool1TGACGATGACTTGGTTAGCATTAATACA28

99nCoV-2019_50_LEFTPool2GTTGATAAGTACTTTGATTGTTACGATGGT30

100nCoV-2019_50_RIGHTPool2TAACATGTTGTGCCAACCACCA22

101nCoV-2019_51_LEFTPool1TCAATAGCCGCCACTAGAGGAG22

102nCoV-2019_51_RIGHTPool1AGTGCATTAACATTGGCCGTGA22

103nCoV-2019_52_LEFTPool2CATCAGGAGATGCCACAACTGC22

104nCoV-2019_52_RIGHTPool2GTTGAGAGCAAAATTCATGAGGTCC25

105nCoV-2019_53_LEFTPool1AGCAAAATGTTGGACTGAGACTGA24

106nCoV-2019_53_RIGHTPool1AGCCTCATAAAACTCAGGTTCCC23

107nCoV-2019_54_LEFTPool2TGAGTTAACAGGACACATGTTAGACA26

108nCoV-2019_54_RIGHTPool2AACCAAAAACTTGTCCATTAGCACA25

109nCoV-2019_55_LEFTPool1ACTCAACTTTACTTAGGAGGTATGAGCT28

110nCoV-2019_55_RIGHTPool1GGTGTACTCTCCTATTTGTACTTTACTGT29

111nCoV-2019_56_LEFTPool2ACCTAGACCACCACTTAACCGA22

112nCoV-2019_56_RIGHTPool2ACACTATGCGAGCAGAAGGGTA22

113nCoV-2019_57_LEFTPool1ATTCTACACTCCAGGGACCACC22

114nCoV-2019_57_RIGHTPool1GTAATTGAGCAGGGTCGCCAAT22

115nCoV-2019_58_LEFTPool2TGATTTGAGTGTTGTCAATGCCAGA25

116nCoV-2019_58_RIGHTPool2CTTTTCTCCAAGCAGGGTTACGT23

117nCoV-2019_59_LEFTPool1TCACGCATGATGTTTCATCTGCA23

6

DB32/T3762.11—2020

序号引物名称所属引物池引物序列(5′-3′)长度

118nCoV-2019_59_RIGHTPool1AAGAGTCCTGTTACATTTTCAGCTTG26

119nCoV-2019_60_LEFTPool2TGATAGAGACCTTTATGACAAGTTGCA27

120nCoV-2019_60_RIGHTPool2GGTACCAACAGCTTCTCTAGTAGC24

121nCoV-2019_61_LEFTPool1TGTTTATCACCCGCGAAGAAGC22

122nCoV-2019_61_RIGHTPool1ATCACATAGACAACAGGTGCGC22

123nCoV-2019_62_LEFTPool2GGCACATGGCTTTGAGTTGACA22

124nCoV-2019_62_RIGHTPool2GTTGAACCTTTCTACAAGCCGC22

125nCoV-2019_63_LEFTPool1TGTTAAGCGTGTTGACTGGACT22

126nCoV-2019_63_RIGHTPool1ACAAACTGCCACCATCACAACC22

127nCoV-2019_64_LEFTPool2TCGATAGATATCCTGCTAATTCCATTGT28

128nCoV-2019_64_RIGHTPool2AGTCTTGTAAAAGTGTTCCAGAGGT25

129nCoV-2019_65_LEFTPool1GCTGGCTTTAGCTTGTGGGTTT22

130nCoV-2019_65_RIGHTPool1TGTCAGTCATAGAACAAACACCAATAGT28

131nCoV-2019_66_LEFTPool2GGGTGTGGACATTGCTGCT22

132nCoV-2019_66_RIGHTPool2TCAATTTCCATTTGACTCCTGGGT24

133nCoV-2019_67_LEFTPool1GTTGTCCAACAATTACCTGAAACTTACT28

134nCoV-2019_67_RIGHTPool1CAACCTTAGAAACTACAGATAAATCTTGGG30

135nCoV-2019_68_LEFTPool2ACAGGTTCATCTAAGTGTGTGTGT24

136nCoV-2019_68_RIGHTPool2CTCCTTTATCAGAACCAGCACCA23

137nCoV-2019_69_LEFTPool1TGTCGCAAAATATACTCAACTGTGTCA27

138nCoV-2019_69_RIGHTPool1TCTTTATAGCCACGGAACCTCCA23

139nCoV-2019_70_LEFTPool2ACAAAAGAAAATGACTCTAAAGAGGGTTT29

140nCoV-2019_70_RIGHTPool2TGACCTTCTTTTAAAGACATAACAGCAG28

141nCoV-2019_71_LEFTPool1ACAAATCCAATTCAGTTGTCTTCCTATTC29

142nCoV-2019_71_RIGHTPool1TGGAAAAGAAAGGTAAGAACAAGTCCT27

143nCoV-2019_72_LEFTPool2ACACGTGGTGTTTATTACCCTGAC24

144nCoV-2019_72_RIGHTPool2ACTCTGAACTCACTTTCCATCCAAC25

145nCoV-2019_73_LEFTPool1CAATTTTGTAATGATCCATTTTTGGGTGT29

146nCoV-2019_73_RIGHTPool1CACCAGCTGTCCAACCTGAAGA22

147nCoV-2019_74_LEFTPool2ACATCACTAGGTTTCAAACTTTACTTGC28

148nCoV-2019_74_RIGHTPool2GCAACACAGTTGCTGATTCTCTTC24

149nCoV-2019_75_LEFTPool1AGAGTCCAACCAACAGAATCTATTGT26

150nCoV-2019_75_RIGHTPool1ACCACCAACCTTAGAATCAAGATTGT26

151nCoV-2019_76_LEFTPool2AGGGCAAACTGGAAAGATTGCT22

152nCoV-2019_76_RIGHTPool2TCTCTGCCAAATTGTTGGAAAGGCA22

153nCoV-2019_77_LEFTPool1CCAGCAACTGTTTGTGGACCTA22

154nCoV-2019_77_RIGHTPool1CAGCCCCTATTAAACAGCCTGC22

155nCoV-2019_78_LEFTPool2CAACTTACTCCTACTTGGCGTGT23

156nCoV-2019_78_RIGHTPool2TGTGTACAAAAACTGCCATATTGCA25

157nCoV-2019_79_LEFTPool1GTGGTGATTCAACTGAATGCAGC23

158nCoV-2019_79_RIGHTPool1CATTTCATCTGTGAGCAAAGGTGG24

7

DB32/T3762.11—2020

序号引物名称所属引物池引物序列(5′-3′)长度

159nCoV-2019_80_LEFTPool2TTGCCTTGGTGATATTGCTGCT22

160nCoV-2019_80_RIGHTPool2TGGAGCTAAGTTGTTTAACAAGCG24

161nCoV-2019_81_LEFTPool1GCACTTGGAAAACTTCAAGATGTGG25

162nCoV-2019_81_RIGHTPool1GTGAAGTTCTTTTCTTGTGCAGGG24

163nCoV-2019_82_LEFTPool2GGGCTATCATCTTATGTCCTTCCCT25

164nCoV-2019_82_RIGHTPool2TGCCAGAGATGTCACCTAAATCAA24

165nCoV-2019_83_LEFTPool1TCCTTTGCAACCTGAATTAGACTCA25

166nCoV-2019_83_RIGHTPool1TTTGACTCCTTTGAGCACTGGC22

167nCoV-2019_84_LEFTPool2TGCTGTAGTTGTCTCAAGGGCT22

168nCoV-2019_84_RIGHTPool2AGGTGTGAGTAAACTGTTACAAACAAC27

169nCoV-2019_85_LEFTPool1ACTAGCACTCTCCAAGGGTGTT22

170nCoV-2019_85_RIGHTPool1ACACAGTCTTTTACTCCAGATTCCC25

171nCoV-2019_86_LEFTPool2TCAGGTGATGGCACAACAAGTC22

172nCoV-2019_86_RIGHTPool2ACGAAAGCAAGAAAAAGAAGTACGC25

173nCoV-2019_87_LEFTPool1CGACTACTAGCGTGCCTTTGTA22

174nCoV-2019_87_RIGHTPool1ACTAGGTTCCATTGTTCAAGGAGC24

175nCoV-2019_88_LEFTPool2CCATGGCAGATTCCAACGGTAC22

176nCoV-2019_88_RIGHTPool2TGGTCAGAATAGTGCCATGGAGT23

177nCoV-2019_89_LEFTPool1CGCGTACGCGTTCCATGTGGTC22

178nCoV-2019_89_RIGHTPool1ATAGTAACCTGAAAGTCAACGAGAT25

179nCoV-2019_90_LEFTPool2ACACAGACCATTCCAGTAGCAGT23

180nCoV-2019_90_RIGHTPool2TGAAATGGTGAATTGCCCTCGT22

181nCoV-2019_91_LEFTPool1TCACTACCAAGAGTGTGTTAGAGGT25

182nCoV-2019_91_RIGHTPool1TTCAAGTGAGAACCAAAAGATAATAAGCA29

183nCoV-2019_92_LEFTPool2TTTGTGCTTTTTAGCCTTTCTGCT24

184nCoV-2019_92_RIGHTPool2AGGTTCCTGGCAATTAATTGTAAAAGG27

185nCoV-2019_93_LEFTPool1TGAGGCTGGTTCTAAATCACCCA23

186nCoV-2019_93_RIGHTPool1AGGTCTTCCTTGCCATGTTGAG22

187nCoV-2019_94_LEFTPool2GGCCCCAAGGTTTACCCAATAA22

188nCoV-2019_94_RIGHTPool2TTTGGCAATGTTGTTCCTTGAGG23

189nCoV-2019_95_LEFTPool1TGAGGGAGCCTTGAATACACCA22

190nCoV-2019_95_RIGHTPool1CAGTACGTTTTTGCCGAGGCTT22

191nCoV-2019_96_LEFTPool2GCCAACAACAACAAGGCCAAAC22

192nCoV-2019_96_RIGHTPool2TAGGCTCTGTTGGTGGGAATGT22

193nCoV-2019_97_LEFTPool1TGGATGACAAAGATCCAAATTTCAAAGA28

194nCoV-2019_97_RIGHTPool1ACACACTGATTAAAGATTGCTATGTGAG28

195nCoV-2019_98_LEFTPool2AACAATTGCAACAATCCATGAGCA24

196nCoV-2019_98_RIGHTPool2TTCTCCTAAGAAGCTATTAAAATCACATGG30

_________________________________

8

DB32/T3762.11—2020

前  言

DB32/T3762《新型冠状病毒检测技术规范》目前分为以下部分:

——第1部分:生物样本采集、运输和保存;

——第2部分:病毒分离与鉴定;

——第3部分:核酸荧光PCR检测程序;

——第4部分

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