消毒灭菌与病原微生物实验室安全

第三章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全

细菌的生命活动与环境密切相关.适宜的环境,能促进细菌的生长繁殖.环境不适宜时,可引起细菌的变异或抑制其生长,甚至杀灭细菌.制作人：蒋小平1消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024

微生物无处不在，医疗中如何创造无菌的条件？2消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024第一节消毒灭菌一、概念：

1、消毒（disinfection）：

2、灭菌（sterilization）：杀灭物体上所有微生物的方法

3、防腐（antisepsis）：防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法，不一定杀死微生物

:杀死物体上或环境中的病原微生物,不能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法

3消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024第一节消毒灭菌一、概念：

4、无菌（asepsis）：无菌是无活菌的意思，多是灭菌的结果

。

5、无菌操作：防止细菌进入人体或其它物品的操作技术。

4消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024

热力灭菌法辐射灭菌法物理方法

滤过除菌法超声波杀菌法干燥和低温抑菌法等

高效消毒剂-含氯、醛类消毒剂环氧乙烷等化学方法

中效消毒剂-含碘消毒剂醇类（异丙醇）

低效消毒剂-季铵盐类氯已定高锰酸钾

第二节消毒灭菌的方法5消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024第二节消毒与灭菌二、物理消毒灭菌法：（一）热力消毒灭菌法：1、干热灭菌法：焚烧烧灼干烤6消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024第二节消毒与灭菌二、物理消毒灭菌法：（一）热力消毒灭菌法：2、湿热消毒灭菌法：巴氏消毒法

61.1/62.8℃15-30min71.7℃15-30秒

煮沸法

100℃5分钟间歇蒸气消毒法

100℃15—30分钟过夜（循环3次）7消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024高压蒸汽灭菌法：最有效的灭菌方法，为一密闭容器中，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。第二节消毒与灭菌8消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024高压蒸汽灭菌基本原理：

加热密闭容器中水至沸腾产生蒸汽，排尽原锅内的冷空气后，闭阀升压，使水沸点升高，从而导致菌体蛋白质凝固变性失活。第二节消毒与灭菌9消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024

高压蒸汽灭菌主要对象：牛肉膏蛋白胨、营养肉汤等培养基、生理盐水、手术器械及耐高温、湿热的物品。第二节消毒与灭菌10消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024同温度下湿热灭菌较干热效果好的原因：（1）湿热中菌体吸水，蛋白质易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固点降低。（2）湿热穿透力明显大于干热。（3）湿热蒸汽有潜热存在，能迅速提高被灭物体的温度，从而增加灭菌效力。第二节消毒与灭菌11消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024高压灭菌几点注意事项：12消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024第二节消毒与灭菌二、物理消毒灭菌法：（二）电磁波辐射杀菌法：

紫外线波长在265-266nm杀菌能力最强,它能干扰DNA复制,导致细菌变异或死亡,但穿透力弱,故只能用于房间空气和物品表面的消毒.1、日光与紫外线：13消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/20242、电离辐射

包括β和γ射线，电离射线具有较高的能量，对各种细菌均有致死作用，机制是干扰DNA合成、破坏细胞膜、引起酶系统紊乱等，主要用于一次性医用塑料制品消毒，食品、药品等消毒灭菌，而不破坏其营养。第二节消毒与灭菌14消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/20243、微波

波长1-1000mm的电磁波，可穿透玻璃、陶瓷和塑料，但不能穿透金属表面。主要用于食品、非金属器械、检验室用品等消毒，原理是极性分子摩擦生热，内外升温达到杀毒灭菌的目的。第二节消毒与灭菌15消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024第二节消毒与灭菌二、物理消毒灭菌法：（三）滤过除菌法：

主要用于不耐高温的血清、抗毒素、抗生素、药液的除菌。16消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024第二节消毒与灭菌三、化学消毒灭法：（一）常用化学消毒剂的种类及用途（二）化学消毒剂的杀菌机制：

1、使菌体蛋白变性或凝固；

2、干扰微生物的酶系统和代谢；

3、损伤细胞膜；17消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024种类常用浓度用途作用机制1.高效消毒剂含氯消毒剂；漂白粉次氯酸钠

过氧乙酸

过氧化氢

戊二醛甲醛（福尔马林）

有效氯量:4g/L

有效氯量:100-1000g/L0.2%-1%

3%-25%

2%

35%-40%饮水消毒皮肤、物体表面、排泄物、污水皮肤、物表面、空气

皮肤、物表面、空气

医疗器械

医疗，防腐氧化作用,蛋白质变性与沉淀,灭活酶类

氧化作用,蛋白质沉淀菌体蛋白质及核酸烷基化

常用消毒剂的种类、浓度、用途及作用机制18消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024常用消毒剂的种类、浓度、用途及作用机制（一）种类常用浓度用途作用机制2.中效消毒剂乙醇

碘酊

碘伏3.低效消毒剂苯扎溴铵（新洁尔灭）

氯已定（洗必泰）高锰酸钾

70%-75%

20g碘/L75%乙醇

1-2mg游离/L0.4%-1.6%溶液

0.5%-4.0%1-10g/L

医疗器械、皮肤

皮肤、黏膜、物表面皮肤、黏膜、物表面皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、食具、蔬菜、水果

蛋白质变性凝固、干扰代谢

19消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024第三节

消毒灭菌的运用

皮肤、黏膜、空气、饮水、环境、医疗器械、病人污染物品、病人排泄物与分泌物的消毒灭菌。（具体自己看书）20消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024影响消毒灭菌效果的因素：1、消毒剂的性质、浓度和作用时间2、细菌的种类与生活状态（P44）3、温度4、酸碱度5、有机物第四节影响消毒灭菌效果的因素21消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024第五节

病原微生物实验室生物安全

一、生物安全（biosafety）即生物技术安全（safetyofbiotechnology）指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康及生态环境所产生的危害或潜在风险。22消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024

在安全的实验室内使用安全的方法从事与病原微生物菌（毒）种、样本有关的教学、检测、诊断、研究等活动，达到保护实验室工作人员和公众健康的目的。核心是防感染和防扩散！23消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024二、病原微生物的分类

根据传染性和危害程度，病原微生物分为四类：

第一类是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。

第二类是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。24消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024

第三类是指能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。25消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024病原微生物实验室生物安全防护水平（BSL）分级级别安全装备处理对象一级无特别需求，开放式实验桌、洗手槽对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子。二级一级或二级生物安全柜、灭菌压力锅、防护衣、手套、面罩等对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，具有有效的预防和治疗措施。三级除上述，还增加特殊防护衣、进入管制、定向气流对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施。四级三级生物安全柜，隔离区域，有送风、排风、真空、消毒系统，正压防护衣对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗措施。26消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/2024复习思考题1.杀灭芽孢最常用和有效的方法是（）A、紫外线照射B、煮沸5minC、巴氏消毒法D、高压蒸汽灭菌法2.灭菌方法错误的是（）A、手术室空气-紫外线B、排泄物-漂白粉C、饮水-氯气D、含血清培养基-高压蒸汽灭菌DD27消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/20243.常用于基础培养基灭菌（）A、高压蒸汽灭菌法B、紫外线照射法C、滤过除菌法D、巴氏消毒法4、常用于手术器械的灭菌（）A、紫外线照射法B、高压蒸汽灭菌C、滤过除菌法D、巴氏消毒法AB28消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/20245.关于紫外线，说法错误的是____________。(第03章)a.其杀菌作用与波长有关b.可损坏细菌的DNA构型c.265-266nm杀菌作用最强d.其穿透力弱，故对人体无损害e.紫外线适用空气和物体表面的消毒6.常用于空气或物体表面的消毒____________。(第03章)a.高压蒸气灭菌法b.紫外线照射法c.滤过除菌法d.巴氏消毒法e.干烤法

db29消毒灭菌与病原微生物实验室安全5/9/20247.将牛奶加热62℃30分钟的目的是____________。a.使牛奶中的蛋白质变性，易于吸收b.杀灭牛奶中的所有微生物c.杀死牛奶中的病原菌d.使牛奶不含活菌e.防止或抑制微生物在牛奶中生长和繁殖8.乙醇消毒剂常用的浓度是：____________。a.100％b.95％c.75％d.50％e.30％cc30消