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项目15-1蛋黄中免疫球蛋白的提取

给鸡注射液疫苗，能大大提高鸡蛋中1g的活性，并有抑制4种肠道菌的作用。

鸡的免疫：肠素Ecoli(ETEC)菌株H1047在37℃培养18h后，加入0.4%的甲醛溶液48h后灭活，离心，沉淀，用PBS洗涤，重复三四次后，把收集的菌体冻干并储存于同样的缓冲液中。上述的抗原悬浮液（2×109个菌体/mL）与等体积的不完全Freund’s试剂相混匀，即为注射试剂，用8只25周龄的蛋鸡，在每只鸡的翼处4个不同处注射。每隔2周注射1次，共3次，每日收集鸡蛋备用。项目15-1蛋黄中免疫球蛋白的提取

1．Ig分离

取1体积的蛋黄加4体积的蒸馏水混合均匀后于4℃静止8h，然后在12000r/min下冷冻离心15min，取上清液，加入19%的Na2SO4，缓慢搅拌1h后，在同样条件下离心、沉淀，用PBS悬浸（1mg/mL），在4℃下对PBS透析8h。然后上DEAE-纤维素柱，分离得到免疫球蛋白。项目15-1蛋黄中免疫球蛋白的提取

2．活性检测方法

用Ecoli细胞悬浮液（108个/mL）包被酶联反应板，4℃下吸附过夜。然后用0.1%的PBS-TN洗涤，加入稀释好的IgG样品。37℃下温育3h，洗涤后每孔加入碱性磷酸脂酶（sigma）。37℃下温育2h，再洗涤后每孔加入100µL底物，37℃下温育0.5h。观察颜色变化，加入2mol/L的NaOH终止反应，在405nm下用酶联阅读仪进行测试。IgG的活性越高，仪器上反应出来的OD值相应也越高。项目15-1蛋黄中免疫球蛋白的提取

2．活性检测方法

免疫球蛋白抑制试验是将免疫球蛋白PHS稀释至2mg/mL，然后和细菌悬浮液（106个Ecoli/mL）混合。用未加Ig的菌液做空白对照。在37℃培养，分别在1h、3h、7h、12h取样，平板计数。结果表明，空白对照液在12h后，大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌4种菌液的生长浓度均达到109/mL，而加入Ig菌液12h后，四种菌液中添加免疫球蛋白对四种肠道致病菌的生长起到明显的抑制作用。项目15-1蛋黄中免疫球蛋白的提取

2．活性检测方法

经酶联免疫吸附法检测免疫过与未免疫过的鸡蛋中的Ig活力，结果前者的OD值明显高于后者。免疫过的鸡蛋中的Ig浓度稀释16～32倍以后，OD值和未免疫过的鸡蛋中的Ig相同。可见，从免疫过的鸡蛋中提取的Ig活性有很大的提高。体外模拟实验：在pH2.8，温度3

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