消毒与灭菌（动物微生物课件）

化学因素对微生物的影响高效消毒剂可杀灭一切微生物，包括芽孢(碘酊、福尔马林等)。中效消毒剂可杀灭细菌繁殖体，不能杀灭芽孢(乙醇、碘伏等)。低效消毒剂可杀灭细菌繁殖体，不能杀灭结核杆菌、亲水性病毒或芽孢(苯扎溴铵、氯己定等)。类别作用机制常用种类酚类蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸醇类蛋白变性乙醇氧化剂氧化、蛋白沉淀高锰酸钾、过氧乙酸、碘酒重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭染料干扰氧化、抑制繁殖龙胆紫酸碱类破坏膜、壁，蛋白凝固醋酸、生石灰烷化剂蛋白质、核酸烷基化环氧乙烷将物品洗净、擦干后，浸没在消毒液中进行消毒灭菌的方法。浸泡法利用喷雾器将消毒剂变成微粒气雾弥散在空气中，对空气和物品表面进行消毒灭菌的方法。喷雾法将消毒剂加热或加人氧化剂，使其产生气体来进行消毒灭菌的方法。熏蒸法用消毒剂直接擦拭机体或物品表面，如皮肤、桌椅等，达到消毒灭菌的方法。擦拭法B干扰微生物酶系统和影响其代谢C改变细菌细胞壁或细胞膜的通透性A使菌体蛋白变性或凝固消毒剂的性质、浓度与作用时间微生物的种类与数量环境中有机物的存在生物因素对微生物的影响1共生2寄生3拮抗一种生物从另一生物获取其所需的营养，赖以为生，并往往对后者呈现伤害作用的现象，称为寄生。如病原微生物与其寄生的动物之间两种或多种生物生活在一起时，彼此并不相互损害而是互为有利的现象，称为共生。反刍动物瘤胃微生物与动物机体的共生现象最为典型。豆科植物与固氮菌之间也存在共生关系。当两种微生物生活在一起时，一种微生物能产生另一种微生物毒害作用的物质，从而抑制或杀灭另一种微生物的现象，称为拮抗。

拮抗的作用方式

拮抗的作用方式干扰素细菌素抗生素噬菌体植物杀菌素微生物在自然界的分布土壤的环境适合微生物的生长微生物的种类：细菌、放线菌、真菌、螺旋体、噬菌体等。其中主要是细菌，占土壤微生物总数的70%～90%。

微生物在土壤中的分布特点：

表层微生物数量较少。在离地面10～20cm深的土层中微生物的数量最多。愈往深处则微生物愈少，在数米深的土层处几乎可达无菌。土壤中的病原微生物来源病原微生物可随着动、植物尸体及人、畜排泄物、分泌物、污水、垃圾等废弃物一起进入土壤的。常见的病原微生物少数抵抗力强的芽孢菌（如炭疽杆菌、破伤风梭菌、腐败梭菌、魏氏梭菌等的芽孢），一些抵抗力较强的非芽孢病原菌常以土壤为媒介进行疫病的传播。来源随土壤、动物的排泄物、动植物残体、垃圾、污水和雨水等汇集到水中。种类腐生性细菌、真菌、螺旋体、噬菌体等。分布地面水比地下水含菌量多，雨水和雪水含菌数量少。水中常见的病原微生物炭疽杆菌、猪丹毒杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌、鼻疽杆菌、布氏杆菌、巴氏杆菌、钩端螺旋体、口蹄疫病毒和猪瘟病毒等。被病原微生物污染的水体，是传染病发生和流行的重要传播媒介。水质细菌学检查三项指标指标名称意义国家标准菌总数检定1ml自来水中所含各种活细菌数<100个大肠杆菌价能检出1个大肠杆菌的最小自来水量>300ml大肠杆菌指数在1000ml自来水中检出的大肠杆菌数<3个种类主要是真菌和细菌。来源人、动植物及土壤中的微生物通过水滴、尘埃、飞沫或喷嚏等微粒一并散布进入，以气溶胶的形式存在。霉菌的孢子，则能被气流直接吹入空气中。分布一般在畜舍、医院、宿舍、城市街道等地空气中含微生物量较高，而在大洋、高山或极地上空的空气中，微生物的含量就很少。

检测空气中微生物常用的方法主要有滤过法和沉降法两种。滤过法的原理是使一定体积的空气通过一定体积的某种无菌吸附剂（通常为无菌水），然后用平板培养吸附剂中的微生物，以平板上出现的菌落数推算空气中的微生物数。沉降法的原理是将盛有培养基的平板置空气中暴露一定时间后，经过培养用出现的菌落数来推算空气中的微生物数。正常菌群

概念

正常菌群对机体的有益作用正常动物体的微生物的分布体表

消化道

呼吸道

泌尿生殖道菌群失调与菌群失调症菌群失调的概念菌群失调症：概念

原因

避免措施无菌动物和无特定病原体动物

正常菌群概念在正常动物的体表或与外界相通的腔道经常有一些微生物存在，它们对宿主不但无害，而且是有益的和必需的，这些微生物称为正常微生物群或正常菌群。2.正常菌群对机体的有益作用：营养作用

免疫作用

生物颉颃

体表的微生物种类以球菌最多，包括葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等。当皮肤出现创伤时，其中某些菌是引起化脓感染的主要原因。如金黄色葡萄球菌

消化道中的微生物口腔

较多，有葡萄球菌、链球菌、乳酸杆菌、棒状杆菌等。食道

很少。胃单胃动物：有乳酸杆菌、幽门螺杆菌和胃八叠球菌等少量细菌。反刍动物瘤胃：有大量细菌，其中分解纤维素的细菌有产琥珀酸纤维菌、黄色瘤胃球菌、白色瘤胃球菌、小生纤维梭菌和小瘤胃杆菌；合成蛋白质的细菌有淀粉球菌、淀粉八叠球菌和淀粉螺旋菌等；瘤胃厌氧真菌具有降解纤维和半纤维的能力，有的还具有降解淀粉、蛋白质能力。小肠：很少，肠道后段逐渐增多，主要有大肠杆菌、肠球菌等。呼吸道中的微生物常见的有葡萄球菌、链球菌、巴氏杆菌和肺炎球菌等。以鼻腔内细菌为最多，其中主要是葡萄球菌，它们一般随空气进入。上呼吸道黏膜，主要是扁桃体黏膜上常栖居着一些微生物，有葡萄球菌、肺炎球菌、巴氏杆菌等。这些微生物在动物抵抗力减弱时，就可大量繁殖，引起原发、并发或继发感染。支气管末梢和肺泡内一般无细菌，只有在宿主患病时才有微生物存在。泌尿生殖道的微生物在正常情况下，泌尿系统中的肾脏、输尿管、睾丸、卵巢、子宫以及输精管、输卵管等是无菌的，只是在泌尿生殖道口有细菌。阴道中微生物主要为乳杆菌，其次是葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、抗酸杆菌等；尿道中一般可检测到葡萄球菌、棒状杆菌等，偶有肠球菌和霉形体。尿道口常栖居一些革兰氏阴性或阳性球菌，以及若干不知名的杆菌。如发生上行性感染，细菌如大肠杆菌等可在膀胱、肾脏检出。菌群失调的概念宿主受到日粮突然变化、环境变化、患病、手术等应激，或是滥用抗菌药物等情况下，正常菌群中的微生物种类、数量发生改变，菌群平衡受到破坏，即称为菌群失调。无菌动物（GF动物）无菌动物是用无菌操作方法从母体取出正常健康的胎儿，在无菌环境中，采用一切杜绝微生物传入的手段进行饲养培育而成的。这种动物可用于研究消化道微生物与动物营养的关系、免疫、肿瘤等方面的问题。无特定病原体动物（SPF动物）在胎儿取出的最初两周，饲养方法同无菌动物，以后饲养于有屏障系统的室内，严格防止特定病原体的感染，但可能自然感染除特定病原体以外的一般微生物。各个国家根据控制疫病规定的标准对无特定病原体动物有不同的要求。培育无特定病原体动物是为生产和实验提供没有特定病原体抗体的健康动物，如培育成的SPF鸡胚已大量应用于疫苗的制造和病毒的分离鉴定。消毒与灭菌灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。消毒：杀死物体表面上的病原微生物，达到控制微生物传染的方法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。无菌：不存在活菌的意思。防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。1消毒2灭菌对有害微生物的控制方法消毒是相对的，不一定达到无菌的要求。消毒是一种采用较温和的化学、物理等方法，仅杀死物体表面或内部一部分对人体或动、植物有害的病原菌，而对被消毒的对象基本无害的措施。通常采用化学方法消毒。消毒剂：用于消毒的化学药品称为消毒剂。例如：对皮肤、水果、饮用水进行药剂消毒的方法；对啤酒、牛奶、果汁和酱油等进行消毒处理的巴氏消毒法等。

灭菌是绝对的，一定达到无菌的要求。灭菌是采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。例如：高温灭菌、辐射灭菌等手提式高压蒸汽灭菌器全自动高压蒸气灭菌器物理因素对微生物的影响超声波光线与射线渗透压湿度温度生长温度利于微生物生长繁殖，适宜于微生物培养、进行试验、食品生产等。低温大多数微生物代谢活动减弱，生长缓慢，但低温时仍保留活性。用低温保存疫苗、菌种等。高温使菌体蛋白变性或凝固，酶失去活性，导致微生物死亡。用高温进行消毒灭菌。微生物的生长温度

细菌类型

生长温度（℃）

分布最低最适最高嗜冷菌-5～010～2025～30水和冷藏环境中的细菌嗜温菌

10～2018～2840～45腐生菌10～203740～45病原菌嗜热菌25～4550～6070～85温泉及堆积肥中的细菌高温用于消毒灭菌─热力灭菌法湿热灭菌法煮沸法

流通蒸汽灭菌法

巴氏消毒法

高压蒸汽灭菌法干热灭菌法

火焰灭菌法

热空气灭菌法煮沸法方法100℃，10～20min，杀灭细菌繁殖体；加入1%碳酸钠或2%～5%石炭酸，可增强灭菌效果。所

用

仪

器

煮沸消毒器

适

用

范

围

外科手术器械、注射器等。流通蒸汽灭菌法（间歇灭菌法）方法100℃的蒸汽30min，将被灭菌物品放于37℃温箱3～4小时或过夜，第二天再100℃蒸30min，如此连续3d。仪器：用蒸笼或流通蒸汽灭菌器。适用范围：某些不耐高温的培养基。

巴氏消毒法（巴斯德首创

）类型与方法低温巴氏消毒法

：63～65℃，30min。高温巴氏消毒法

：71～75℃，15s。超高温巴氏消毒法（UHT）：132℃保持1～2s，迅速冷却至10℃以下

（冷击）。适用范围

鲜乳、果汁、葡萄酒等食品。优点

可杀灭液态食品中的病原菌或特定微生物，而不严重破坏其营养成分和风味。高压蒸汽灭菌法条件和效果

0.105MPa、121.3℃、15～30min完全灭菌所用仪器

高压蒸汽灭菌器

适用范围耐高温、高压、不怕潮湿的物品，如各种培养基、金属器械、工作服。全自动高压蒸气灭菌器火

焰

灭

菌

法灼烧灭菌主要用于接种环、试管、金属器械的灭菌。焚烧灭菌主要用于传染病病畜禽及实验感染动物的

尸体、垫料及其他污染物的灭菌。热空气灭菌法条件和效果

160℃维持1～2h，灭菌仪器

电热干燥箱适用范围

高温下不损坏、不变质的物品，如各种玻璃器皿、瓷器、金属器械等的灭菌。干燥的影响影

响干燥使微生物代谢会发生障碍，生长繁殖受阻，还可引起蛋白质变性和盐度升高而逐渐导致微生物死亡。应

用常用干燥法保存饲草、饲料、皮张、药物等。不同微生物耐干燥时间有长有短巴氏杆菌、淋球菌和鼻疽杆菌：几天；结核分支杆菌：90天；细菌的芽孢：几年至几十年。不同渗透压条件下微生物的生存状态高渗：“质壁分离”，微生物生长被抑制甚至死亡。低渗：吸水膨胀，甚至破裂，但微生物较耐低渗。等渗：保持活力

。

应用利用盐腌、糖渍等方法保存食品或果品；常在细菌人工培养基中或制备细菌悬液时加入适量氯化钠，以保持渗透压的相对平衡。超

声

波：频率在20000～200000Hz的声波称超声波。

作用原理：震荡杀菌：使微生物细胞内含物剧烈震荡而被破坏。氧化杀菌：因在水溶液中超声波能产生过氧化氢。热

效

应：破坏细胞的酶系统。空化作用：即在液体中形成许多真空状态的小空腔，空腔崩破产生的巨大压力使细胞裂解。临床应用：主要用于粉碎细胞，提取细胞组分试验研究及保藏食品等。光线射线类型作用原理作用特点应用可见光原理不