动物寄生虫学检验技术（动物疫病检验课件）

动物寄生虫学检验概述1病原学检查2免疫血清学诊断3分子生物学诊断病原学检查病原学检查1234粪便检查法皮肤刮取物检查法肌肉压片镜检法血液检查法5678淋巴结穿刺检查法腹水检查法实验动物接种法尿液检查法粪便要尽量新鲜，干燥粪便易导致虫卵变形，对牛和马等大动物，可通过直肠检查法从直肠掏取，对于羊、犬、猫等中小动物，一般用食指钩取少量粪便。若采样粪便不能及时检查，可将其加入到50～60℃的福尔马林溶液中，以保持虫卵的固有形态。1、粪便检查法病原学检查2、皮肤刮取物检查法在脱毛皮肤和健康皮肤交界处刮取皮屑，这里的螨较多，刮取时先剪毛，取凸刃小刀，在酒精灯上消毒，用手握刀，使刀刃与皮肤表面垂直，刮取皮屑时，应刮到皮肤轻微出血，然后将皮屑置于黑色背景的培养皿内观察是否有虫体。病原学检查主要用于旋毛虫的检测，在左右膈肌角分别剪取24粒肌肉粒，置于载玻片上，制作肌肉压片，低倍显微镜镜检观察在被检测的肌肉压片中是否含有肌旋毛虫包囊。3、肌肉压片镜检法病原学检查血液检查法用于伊氏锥虫、巴贝斯虫和泰勒虫等血液内寄生虫的检查。一般采取病畜耳静脉血液，做成血液涂片镜检，或直接鲜血压片镜检，或血液离心后将虫体浓集制片镜检，发现某种寄生虫即可确诊。4、血液检查法病原学检查消毒后术者以左手食指和拇指固定淋巴结，右手持注射器将针头直接刺入肩前淋巴结或股前淋巴结内，深度依淋巴结大小而定，然后边拔针边用力抽吸，将淋巴结内的液体和细胞成分吸出，固定注射器内栓拔出针头后将注射器取下，充气后再将针头内的抽出液喷射到玻璃片上制成均匀涂片，染色镜检。5、淋巴结穿刺检查法病原学检查本法主要用于弓形虫病的生前诊断。常规消毒局部皮肤和术者手臂，穿刺腹腔取腹水，在玻片上抹片，瑞氏染色后镜检观察是否含有滋养体。6、腹水检查法病原学检查7、实验动物接种法用采自患病动物病料对易感实验动物进行人工接种，待虫体在其体内大量繁殖后再对实验动物进行虫体检查。常采用清晨尿液，沉淀后取沉淀检查，本方法着重于检查泌尿系统寄生虫虫体，由于泌尿系统寄生虫较少，因而此法较少用，我国南方主要用于检查猪肾虫。8、尿液检查法病原学检查寄生虫本身及其分泌物、代谢产物等均可作为抗原刺激动物机体产生相应抗体，可以通过已知抗原或抗体，检测动物血清中相应抗体或者抗原的存在性，从而判断该动物是否患有这种寄生虫病。免疫血清学诊断分子生物学诊断技术即基因和核酸诊断技术，主要包括DNA探针和聚合酶链反应（PCR）两种技术。分子生物学诊断

蠕虫病的实验室检验1直接涂片法2漂浮法3沉淀法尼龙筛集卵法虫卵计数法45直接涂片法直接涂片法操作方法1、取1～2滴甘油与水的等量混合液，滴在载玻片；2、用牙签取黄豆大小的粪便与载玻片上的水混匀；3、除去较粗的粪渣；4、将粪液涂成薄膜；5、盖上盖玻片，置于低倍镜下检查。直接涂片法回旋法操作步骤取2～3g粪样加清水2～3倍，充分混匀成悬液后用玻璃棒搅拌1min，使之成回旋运动，在搅拌过程中迅速提起玻璃棒，将棒端附着的液体放于载玻片上涂开，加上盖玻片在镜下检查。检查时多取几滴悬液。直接涂片法注意事项1、涂片的厚薄以在载玻片的下面垫上有字的纸时，纸上的字迹隐约可见为宜。2、该法简便、易行、快速、适合于虫卵量大的粪便检查，但对虫卵含量低的粪便检出率低，故此法每个样品必须检查3～5片。3、检查虫卵时，先用低倍镜顺序观察盖玻片下所有部分，发现疑似虫卵物时，再用高倍镜仔细观察。因一般虫卵色彩较淡，镜检时视野宜稍暗一些。漂浮法漂浮法漂浮法的原理是采用比重高于虫卵的漂浮液，使粪便中的虫卵与粪便渣子分开而浮于液体表面，然后进行检查。

饱和盐水漂浮法对大多数线虫卵、绦虫卵及某些原虫卵囊均有效，但对吸虫卵、后圆线虫卵和棘头虫卵效果较差。漂浮法操作方法1、取粪便10g；2、加饱和盐水100ml；3、用玻棒搅匀，通过60目铜筛过滤到另一胶杯中；4、静置半小时；5、用干净的盖玻片与液面平行接触以沾取表面液膜，然后盖在载玻片上检查。漂浮法示意图漂浮法注意事项1、漂浮时间的选择；2、漂浮液的保存；3、漂浮液的选择；4、避免相互污染。漂浮法示意图沉淀法沉淀法沉淀法的原理是利用虫卵比重比水大的特点，让虫卵在重力的作用下，自然沉于容器底部，然后进行检查。沉淀法用于检查粪便中的吸虫卵。沉淀法操作方法1、取粪便5g；2、加清水100ml；3、用玻棒搅匀，通过60目铜筛和漏斗过滤到离心管中。4、置离心机上离心2～3分钟；5、倾去上层液，保留沉渣；6、再加清水混匀；7、再离心；8、再倾去上层液，保留沉渣；9、如此反复操作2～3次直到上层液体透明，最后倾去上层液；10、用吹吸均匀后，吸取适量沉渣检查。沉淀法注意事项1、注意此法粪量少，一次粪检最好多看几片，以提高检出率。2、可将离心沉淀法和漂浮法结合起来应用。尼龙筛集卵法尼龙筛集卵法操作方法1、取粪便5～10g；2、加水搅匀；3、通过40或60目铜筛过滤；4、滤下液再通过260目尼龙筛过滤；5、在尼龙筛中继续加水冲洗，直到洗出液变清为止；6、挑取260目尼龙筛中的粪渣抹片检查。注意事项此法适用于宽度大于60微米球虫卵囊。因通过260目尼龙筛过滤、冲洗后，直径小于40微米的细粪渣和可溶性色素均被洗去而使虫卵集中。尼龙筛集卵法虫卵计数法虫卵计数法麦克马斯特氏法计数室的构造：计数室是由两片载玻片制成，制作时为了使用方便，常将其一片切去一条，使之较另一片窄一些。在较窄的玻片上刻以1cm见方的划度2个，后选取厚度1.5mm的玻片切成小条垫于两玻片间，以环氧树脂粘合。计数室的构造操作方法1、取粪便2g，置研钵中；2、先加入10ml水，搅匀，再加饱和食盐水50ml；3、充分振荡混匀；4、用60目铜筛过滤；5、将滤液振荡混匀后立即吸取粪液充满麦克马斯特计数板两个计数室；6、置于显微镜台上，静置2～3分钟；7、计数两个计数室的虫卵数。虫卵计数法注意事项1、所取粪便应干净卵囊；2、计数虫卵时，不能有遗漏和重复；3、虫卵计数只能是对寄生虫感染程度的一个大致推断。虫卵计数法

螨虫病的实验室检验1病料的采集2病料的检查方法3实验的注意事项病料的采集病料的收集病料收集方法1、在新生的患部与健康部交界处，剪去长毛；2、器械消毒后取凸刃小刀在体表刮取病料，操作时使刀刃与皮肤表面垂直，反复刮取表皮，直到稍微出血为止；3、将刮到的病料收集到培养皿或其他容器内，取样处用碘酒消毒。病料的检查方法26534添加标题1直接检查法显微镜直接检查法病料的检查方法虫体浓集法温水检查法培养皿内加温法蠕形螨的检查检查方法1、直接检查法将刮下物放在黑纸上或有黑色背景的容器内，置温箱中（30～40℃）或用白炽灯照射一段时间，然后收集从皮屑中爬出的黄白色针尖大小的点状物在镜下检查。病料的检查方法2、显微镜直接检查法将刮下的皮屑，放于载玻片上，滴加煤油，覆以另一张载玻片。搓压玻片使病料散开，分开载玻片，置显微镜下检查。病料的检查方法3、虫体浓集法先取较多的病料，置于试管中，加入10%氢氧化钠溶液，浸泡过夜，使皮屑溶解，虫体自皮屑中分离出来。然后待其自然沉淀（或以每分钟2000转的速度离心沉淀5min），虫体即沉于管底，弃去上层液，吸取沉渣检查。病料的检查方法4、温水检查法

先取较多的病料，置于试管中，加入10%氢氧化钠溶液，浸泡过夜，使皮屑溶解，虫体自皮屑中分离出来。然后待其自然沉淀（或以每分钟2000转的速度离心沉淀5min），虫体即沉于管底，弃去上层液，吸取沉渣检查。病料的检查方法5、培养皿内加温法将刮取到的干的病料，放于培养皿内，加盖。将培养皿放于盛有40～45℃温水的杯上，经10～15min后，将培养皿翻转，则虫体与少量皮屑黏附于皿底，大量皮屑则落于皿盖上，取皿底检查。病料的检查方法6、蠕形螨的检查蠕形螨寄生在毛囊内，检查时先在动物四肢的外侧和腹部两侧、背部、眼眶四周，颊部和鼻部的皮肤上按摩，是否有砂粒样或黄豆大的结节。如有，用小刀切开挤压，看到有脓性分泌物或淡黄色干酪样团块时，则可将其挑在载片上，滴加生理盐水1～2滴，均匀涂成薄片，上覆盖玻片，在显微镜下进行观察。病料的检查方法实验的注意事项实验的注意事项注意事项1、螨对寄生部位有一定的选择性，多数寄生于体表皮肤柔软而毛少的部位。根据其发育规律和生活习性，确定采集虫体的时间和部位。2、虫体和病料采取中应严防散布病原。犬耳痒螨感染

原虫病的实验室检验1消化道原虫检查法2血液内原虫检查法消化道原虫检查法消化道原虫检查法根据所采取的方法不同，粪便内球虫卵囊的检查方法分为直接涂片法、漂浮法、锦纶筛兜淘洗法等。球虫卵囊检查法注意事项：①球虫卵囊一般直径小于40μm，若使用锦纶筛兜淘洗法时，虫卵可以通过260目网筛筛孔，故应取滤液检查。②当需鉴定球虫的种类时，可将浓集后的卵囊加2.5％的重铬酸钾溶液，在25℃温箱中培养，待其孢子形成后进行观察。③为了推测动物体内球虫的感染强度、判断抗球虫药物的疗效、评价疫苗的免疫保护性，通常要进行卵囊的计数，即每克粪样中球虫卵囊数值（OPG）。消化道原虫检查法球虫卵囊检查法1、血球板计数法取1g粪样，溶于10ml水中，制成10倍稀释液。搅拌均匀后，取1滴置血球计数板中，显微镜下计数。为了数据的可靠性，可以重复几次计数，算其平均值。球虫卵囊检查法消化道原虫检查法2、载玻片计数法取1g粪样，溶于10ml水中，制成10倍稀释液。取0.05ml（50微升）置于载玻片上，盖上盖玻片后，计算整个卵囊数（OPG＝b×200，b代表整个卵囊数值）。3、麦克马斯特法计数法消化道原虫检查法1、饱和蔗糖溶液漂浮法取粪样5～10克，加5倍自来水搅匀，60目筛网过滤，滤液以离心10分钟，弃上清，按粪样量的10倍体积加饱和蔗糖液，搅匀后以再离心10分钟，然后用小铁丝环蘸取漂浮液表层涂片，以10×100倍油镜镜检。隐孢子虫卵囊检查法消化道原虫检查法2、抗酸染色法取粪样5～10克，加5倍水搅匀，60目尼龙筛过滤，将滤液涂片、干燥，滴加改良抗酸染色液第一液（碱性复红4g，95%酒精20ml，石炭酸8ml，蒸馏水100ml），5～10分钟后用水冲洗，再滴加第二液（98%浓硫酸10ml，蒸馏水90ml），5～10分钟后用水冲洗，滴加第三液（0.2g孔雀绿，蒸馏水100ml）1分钟后水洗，干燥后以油镜观察。消化道原虫检查法结肠小袋纤毛虫检查法操作方法：检查时取新鲜的稀粪一小团，放在载玻片上加1～2滴温热的生理盐水混匀，挑去粗大的粪渣，盖上盖玻片，在低倍镜下检查时即可见到活动的虫体。消化道原虫检查法血液内原虫检查法将采出的血液滴在洁净的载玻片上，加等量的生理盐水与之混合，加上盖玻片，立即放显微镜下用低倍镜检查，发现有运动的可疑虫体时，可再换高倍镜检查。直接镜检法血液内原虫检查法涂片染色镜检法血液内原虫检查法涂片染色镜检法一、涂片①采血滴于洁净的载玻片一端；②另取一块边缘光滑的载玻片，作为推片。先将此推片的一端置于血滴的前方，然后稍向后移动，触及血滴，使血均匀分布于两玻片之间，形成一线；③推片于载玻片形成30～45度角，平稳快速向前推进，使血液循接触面散布均匀，即形成血薄片；④抹片后，自然干燥，滴加甲醇固定。血液内原虫检查法二、染色（1）姬姆萨染色血涂片经甲醇固定后，放置姬姆萨使用液15～30分钟（过夜效果更好），取出后，用洁净的水冲洗，自然干燥后，油镜镜检。血液内原虫检查法二、染色（2）瑞氏染色取已干燥的血涂片，滴加瑞氏染液覆盖血膜，静置2分钟，加入等量缓冲液，用吸球轻轻吹动，使染液与缓冲液充分混匀，放置5～10分钟。倾去染液，然后用水冲洗，血涂片自然干燥后即可镜检。血液内原虫检查法（3）离心集虫法在离心管中加2％的柠檬酸生理盐水3～4ml，再加血液6～7ml；混匀后，以500转/分钟离心5分钟，使其中大部分红细胞沉降；将含有少量红细胞、白细胞和虫体的上层血浆，用吸管移入另一离心管中，补加一些生理盐水，以2500转/分钟的速度离心10分钟，取其沉淀制成抹片，染色检查。血液内原虫检查法锥虫寄生虫病的免疫学诊断1皮内实验2环卵沉淀实验3间接血凝试验4酶联免疫吸附试验皮内实验实验原理：宿主在寄生虫变应原刺激后，体内产生亲细胞性抗体，当其与相应抗原结合后，肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放生物活性物质，引起注射抗原的局部皮肤出现皮丘及红疹，以此便可判断体内是否含有某种特异性抗体存在。皮内实验操作方法：按照1:3000的比例制备新鲜成虫匀浆，使用无菌注射器和皮试针头对待检动物进行皮试注