组培苗生产技术-外植体的选择、处理与接种（植物组织培养课件）

外植体的离体培养技术

一、外植物体的选择与处理（一）外植体的选择1、外植体（Explant）：是指植物离体培养中的各种接种材料。包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。2、外植体选择的要求选择优良的种质：材料的选择要有目的,具有一定的代表性,提高成功率,增加实用性。选择健壮的植株：选取发育正常的器官或组织，因为这些器官或组织代谢旺盛，再生能力强，组培易成功。选择合适的大小：根据不同的植物而异，太大容易污染，太小，多形成愈伤组织甚至难于成活。一般在0.5-1.0cm之间。如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。选择最适的时期：组织培养选择材料时，一般按植物生长的最适时期选取材料，要注意植物的生长季节和植物的生长发育阶段。这样不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高；花药培养应在花粉发育到单核期时取材，这时比较容易形成愈伤组织。（二）外植体的处理1、外植体的基因型不同种类的植物同一植物的不同器官

对诱导条件反应是不一致的，有的部位诱导分化的成功率高，有的部位却很难脱分化，或者再分化频率很低单子叶植物不易诱导器官发生。b.木本植物较难诱导。c.存在基因型差异（如番茄29%~63%）d.开始生长季节取材容易诱导。外植体种类及基因型外植体的离体培养技术

任务外植体的选择与处理

任务：

以小组为单位，取飘香藤顶芽或叶片，进行无菌操作，要求每瓶接种1-2个材料，接种完成后，作记号，放入培养室培养，7天后记录观察结果并完成实训报告。四、外植体的接种（一）外植体的接种（无菌操作）

是把经过表面消毒后的植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞，并将它们转移到无菌培养基上的全部操作过程。整个接种过程均须无菌操作。操作过程中引起的污染，主要由空气中的细菌和工作人员本身引起的。因此除接种室空气消毒外，应特别注意防止工作人员本身引起的污染。接种注意事项1．操作人员需着经消毒的白色工作服，戴口罩。进入接种室前，工作人员的双手必须进行消毒，用肥皂和水洗涤能达到良好的效果,进行操作前再用70%的酒精擦洗双手。2．操作期间经常用75%的酒精擦拭双手和台面。特别注意防止“双重传递”的污染，例如器械被手污染后又污染培养基等。

3．在打开培养瓶、三角瓶或试管时，最大的污染危险是管口边沿沾染的微生物落入管内，解决这个问题，可在打开前用火焰烧瓶口。如果培养液接触了瓶口，则瓶口要烧到足够的热度，以杀死存在的细菌。为避免灰尘污染瓶口，可用纸包扎瓶口和塞子，以遮盖瓶子颈部和试管口，相对地减少污染机会。4．工具用后及时消毒，避免交叉污染。5．工作人员的呼吸也是污染的主要途径。通常在平静呼吸时细菌是很少的，但是谈话或咳嗽时细菌便增多，因此操作过程应禁止不必要的谈话并戴上口罩。

6．由于空气中有灰尘，因此在操作时，仍要注意避免灰尘的落入。尽量把盖子盖好，当打开瓶子或试管时，应拿成斜角，以免灰尘落入瓶中。刀、剪、镊等用具，一般在使用前浸泡在95%酒精中，用时在火焰上消毒，待冷却后使用。每次使用前均需进行用具消毒。外植体接种全过程酒精擦拭手外植体消毒浸泡5min器械消毒酒精灯灼烧酒精擦拭培养皿酒精擦拭旋转灼烧取外植体接种盖好瓶塞修剪外植体灭菌烧杯、无菌水、洗液、灭菌剂、镊子、超净台等工作前准备任务实施分六组，各组采取植物外植体进行消毒1、外植体的选取2、外植体的消毒工作实施外植体的离体培养技术

外植体的消毒是组培成功与否的第一关键步骤。

外植体的预处理：对外植体进行修整,去掉不要的部分,在流水下冲洗干净.

外植体的表面灭菌：原则：充分灭菌，但不伤外植体；不同的外植体，灭菌的要求也不一样。三、外植体的消毒外植体消毒灭菌的要求包括两个方面：把外植体上带的一切微生物，包括真菌、细菌及其他微生物都杀死不能损伤组织材料，保持外植体的生活力，使外植体在良好的培养条件下很快恢复生机，正常生长和繁殖.消毒剂的要求要求：具有良好的消毒作用，既不会杀死植物的组织细胞，又易被无菌水冲洗掉，不影响消毒后外植体的生长和分化.灭菌剂使用浓度（%）清除的难易消毒时间效果次氯酸钠9—10易5—30很好次氯酸钙2易5—30很好漂白粉饱和浓度易5—30很好氯化汞0.1—1较难2—10最好酒精70—75易0.2—2好过氧化氢10—12最易5—15好溴水1—2易2—10很好硝酸银1较难5—30好抗菌素4—50mg/L中30—60较好常用灭菌药剂的使用和效果外植体消毒顺序:灭菌烧杯、无菌水、洗液、灭菌剂、镊子、超净台等工作前准备任务实施分六组，各组采取植物外植体进行消毒1、外植体的选取2、外植体的消毒工作实施外植体的离体培养技术

二、外植物体的种类与选择（一）外植体的类型1、茎尖（园艺植物组织培养中应用最多，繁殖率高，不易发生遗传变异，但取材有限）2、茎段（采用嫩茎的切段促进腋芽萌发，取材容易）3、叶（幼嫩叶片组织通过愈伤组织或不定芽分化产生植株，取材容易，操作方便，但易发生变异）；4、花球和花蕾5、种子、根、块根、块茎、花瓣等。（二）实例分析1、花卉（非洲菊）常用茎尖、嫩叶、花托进行非洲菊的组织培养，也有利用种子进行组织培养的。茎尖培养操作麻烦，但对于脱毒苗的生产是最有效的。花托培养可直接成苗，既可保持种性，又易行、耗时短，是首选的外植体。

首先要选择花大、花色艳丽、市场流行的品种，然后再选择无病虫害、植株生长健壮、花色纯正的优良品种单株进行取材。一旦选出优株后，应进行挂牌标记，并一直在其上采取花蕾。作为外植体的花蕾要选取直径在1㎝左右，而且未露心的小花蕾，太大或是太小的花蕾均不能获得满意的效果。2、水果（草莓）（1）选择结果性优良的草莓母株上新抽出的匍匐茎作外植体，以每年6～7月份最为适宜。（2）在无病虫害的田块，连续晴天3～4d时选取生长健壮、新萌发且未着地的匍匐茎段3cm长作外植体。3、蔬菜（龙牙百合）龙牙百合特征:鳞茎，无皮，广卵形，外部鳞片长,将整个鳞茎包裹，直径5~15厘米，白色，茎高90厘米左右，直立茎上叶多而散生，披针形，叶色从浓绿，光滑。花单生茎顶。花朵呈喇叭状长筒形，白色，有清香。

龙牙百合的许多器官、组织都可作为外植体，如鳞片、花梗、叶片、茎尖、腋芽、花瓣、