植物组织培养基的配制（植物组织培养技术课件）

培养基成分与种类1培养基的分类2培养基的成分3基本培养基的类型

目录1培养基的分类2培养基的成分3基本培养基的类型

目录一、培养基的分类（一）根据态相不同：固体培养基（加琼脂的培养基）

液体培养基（不加琼脂的培养基）（二）根据培养物的培养过程：初代培养基（第一次接种外植体的培养基）继代培养基（用来接种继初代培养之后培养物的培养基）生根培养基（用来诱导试管菌生根的培养基）（三）根据营养水平不同：基本培养基（只含有大量元素、微量元素、有机营养物质）完全培养基（在基本培养基的基础上，添加植物生长调节质以及特殊

添加物的培养基）

1培养基的分类2培养基的成分3基本培养基的类型

目录二、培养基的成分通常植物组织培养所用培养基主要包括：水分、无机盐、有机营养成分、植物生长调节物质、介质、糖类。（一）水分水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。水分类型：蒸馏水、自来水、纯水等

选择：研究上，通常用蒸馏水；

生产上，可用高质量自来水。（二）无机盐类类型：大量元素和微量元素大量元素是指植物所需浓度大于0．5mmol／L的元素微量元素是指植物所需浓度小于0．5mmol／L的元素大量元素：碳、氢、氧、氮、磷、钾、钙、镁、硫碳、氢、氧主要来源于水。氮：蛋白质的主要成分。

大多数培养基既含有销态氮又含铵态氮。铵态氮对植物生长较为有利。供应的物质有KN03、NH4NO3等。有时，也添加氨基酸来补充氮素。NH4+浓度过高时对培养物有毒害作用磷：磷脂的主要成分，而磷脂又是原生质体、细胞核的重要组成成分。常用的物质有磷酸二氢钾或磷酸氢二钾等。钾：调节细胞渗透压，同时是植物体内多种酶的活化剂。制备培养基时，常以氯化钾、硝酸钾等盐类提供。钾促植物生长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。钙：是构成细胞壁的一种成分，钙促进幼根生长。常以CaCl2·2H20提供。镁：镁影响酶的活性，并决定新陈代谢过程。硫：硫是含硫氨基酸和蛋白质的组成成分。它们常以MgS04·7H20提供。微量元素：主要有铁、锰、锌、铜、硼、碘、钼、钴铁:

铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时，它又是叶绿素形成的必要条件。微量元素中，铁的使用量最大。在制做培养基时用FeS04·7H20和Na2-EDTA（乙二胺四乙酸二钠）结合成螯合物使用。锰：参与植物的光合、呼吸代谢过程，影响根系生长。锌：是各种酶的构成要素，能增强光合作用效率，参与生长

素的代谢，促进生殖器官发育和提高抗逆性。铜：有促进离体根生长的作用。硼：能促进生长器官的正常发育，参与蛋白质合成或糖类运输。钼：参与氮素代谢（三）、有机营养成分主要包括：各种维生素、肌醇、氨基酸和天然有机添加物。维生素主要有盐酸硫胺素（VB1）、盐酸吡哆醇(VB6)、烟酸（VB3）、抗坏血酸（VC）、泛酸钙、生物素（VB7）、叶酸（VB11）、钴胺素、VB2等。一般用量为0.1～1.0mg／L。有时用量较高。其中盐酸硫胺素可全面促进植物生长；抗坏血酸有抗氧化功能，防止褐变；盐酸吡哆醇能促进根的生长。Vc有防止组织变褐的作用。维生素具有热易变性，易在高温下降解，可进行过滤灭菌肌醇使用浓度一般为l00mg／L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。氨基酸是很好的有机氮源，是蛋白质的组成成分，可直接被细胞吸收利用，对外植体的芽、根、胚状体的生长、分化均有良好的促进作用。

培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。

有时应用水解乳蛋白或水解酪蛋白，它们是含有约20种氨基酸的混合物，用量在10～1000mg／L之间。由于它们营养丰富，极易引起污染。天然有机添加物其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。主要有椰乳、酵母提取液、马铃薯、香蕉汁、番茄汁等椰乳：在愈伤组织和细胞培养中作用明细，一般使用浓度为10-20%香蕉汁

用量为150～200ml/l。用黄熟的小香蕉，加入培养基后变为紫色。对pH值的缓冲作用大。主要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进作用。马铃薯

去掉皮和芽后，加水煮30min，再经过过滤，取其滤液使用。用量为150～200g／L。对pH值缓冲作用也大。添加后可得到健壮的植株。（四）、生长调节物质是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等许许多多的生理生化活动。在培养基的各成分中，植物激素是培养基的关键物质，对植物组织培养起着决定性作用常用的有生长素类和细胞分裂素类。生长素类

常用的生长素类有IAA(吲哚乙酸)IBA(吲哚丁酸)NAA(萘乙酸)

2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。细胞分裂素类主要有：6-BA(6-苄基氨基嘌呤)、Kt(kinetin激动素)、Zt(zeatin玉米素)等。其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是6-BA。赤霉素GA培养基中添加的是GA3赤霉素不耐热，高压灭菌后将有70％～100％失效，应当采用过滤灭菌法加入。（五）、糖类

糖作为碳源在植物组织培养中是必不可少的，它不仅能够提供给植物材料能量，而且也能维持一定的渗透压。常用的糖是蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨糖等，麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在组织培养中也有应用。蔗糖使用浓度在2％～3％，在大规模生产时，可用食用白糖作为碳源。（六）、介质或载体琼脂(agar)在固体培养时琼脂是最好的固化剂。琼脂的用量在6～10g／L之间。卡拉胶又称为鹿角菜胶、角叉菜胶。卡拉胶的水溶性很好，在70℃开始溶解，80℃则完全溶解。卡拉胶在国内外组培上已经大量使用。（七）、其他物质抗生物质主要有青霉素、链霉素、庆大霉素等活性炭1培养基的分类2培养基的成分3基本培养基的类型

目录三、基本培养基的类型1、含盐量较高的培养基主要包括MS、LS、BL、ER培养基等特点：无机盐浓度高，特别是硝酸根离子、钾离子和铵离子含量丰富。2、硝酸钾含量较高的培养基

主要有B5、N6、SH培养基等特点：培养基盐类浓度较高，氨态氮含量较低，硝酸钾和盐酸硫铵素含量高3、无机盐含量中等的培养基主要有H、Miller、Nitsch培养基等。特点：大量元素含量约为MS培养基的一半，微量元素种类少但含量高，维生素种类多。4、无机盐低含量的培养基

主要有White、WS、HB培养基等。母液配制一、蝴蝶兰简介

蝴蝶兰又名蝶兰，为兰科蝴蝶兰属多年生常绿附生草本观赏植物，其花朵形似蝴蝶。是世界著名的热带兰花，素有“洋兰皇后”的美誉，又因其在年宵盆花排行榜上高高在上，名列前茅，被誉为“花市皇后”。大辣椒黄金树绿熊v3一、母液的概念及配制母液的意义母液：培养基中各组分以10倍、100倍甚至1000倍量配制成的浓缩液。意义：1、方便快速配制培养基

2、各成分用量准确一般大量元素、微量元素、有机营养成分分别配制成一个母液，铁盐和钙盐为单独母液，各种植物生长调节物质，在各种培养基中通常也单独配成母液。二、母液配制（以MS铁盐为例）（1）计算培养基铁盐母液的称取量：铁盐母液各成分称取量=培养基配方用量（mg/L）*浓缩倍数*所配制母液体积(L)配置体积根据生产产量来定。计算时带单位如：七水硫酸亚铁(FeSO4.7H2O)称取量=27.8mg/L*100*1L=2780mg=2.78g

乙二胺四乙酸二钠（EDTA）的称取量=37.3mg/L*100*1L=3730mg3.73g计算：母液各成分称取量=培养基配方用量（mg/L）*浓缩倍数*所配制母液体积(L)

1、MS培养基配制大量元素母液时，已知母液浓缩倍数为50倍，母液体积为500ml，则大量中，KNO3、NH4NO3、MgSO4•7H2O的称取量分别为多少克？2、MS培养基配制微量元素母液时，已知母液浓缩倍数为100倍，母液体积为200ml，则微量中，KI、ZnSO4•7H2O的称取量分别为多少克？3、MS培养基配制有机物母液时，已知母液浓缩倍数为50倍，母液体积为2000ml，则有机物中，烟酸、肌醇的称取量分别为多少克？计算：1、MS培养基配制大量元素母液时，已知母液浓缩倍数为50倍，母液体积为500ml，则大量中，KNO3、NH4NO3、MgSO4•7H2O的称取量分别为多少克？47.5g、41.25g、9.25g2、MS培养基配制微量元素母液时，已知母液浓缩倍数为100倍，母液体积为200ml，则微量中，KI、ZnSO4•7H2O的称取量分别为多少克？0.0166g、0.172g3、MS培养基配制有机物母液时，已知母液浓缩倍数为50倍，母液体积为2000ml，则有机物中，烟酸、肌醇的称取量分别为多少克？0.05g、10g（2）称量电子天平注意事项：干净、干燥、水平、校正、量程、归零、读数电子天平使用方法：开机-检查-放烧杯-归零-放药品-读数-关机（3）溶解将蒸馏水或去离子水倒入烧杯中，用玻璃棒轻轻搅动使其溶解，使其沉淀后将上清液倒入容量瓶，反复操作，直至全部药品完全溶解。注意事项：用温水、酸、碱或醇等助溶加水宜少不宜多多次反复溶解（4）定容：将已完全溶解的药品倒入容量瓶定容至所配制母液的体积（1L）。母液成分比较多时要注意顺序，容量瓶定容后要充分摇匀再倒入广口瓶内保存注意容量瓶的使用：干净、平视凹液面（5）保存：将定容好的母液充分摇匀后倒入干净棕色瓶或无色试剂瓶内，贴上标签放入试剂柜或冰箱内保存。标签注明母液名称、配制时间、母液吸取量=1000/浓缩倍数ml/L有机物、激素等要低温、避光保存，铁盐、微量等要避光保存母液配制一、实训目的：1、了解MS培养基母液成分

2、能正确配制MS培养基母液二、实训内容：1、配制大量元素母液500mL，母液倍数20倍（大量1：硝酸钾、硝酸铵、7水硫酸镁、磷酸二氢钾大量2：2水氯化钙）

2、配制铁盐母液250mL，母液倍数100倍三、实训材料：1、实训设备

2、实训药品四、实验步骤五、注意事项培养基的配制培养基（medium）

是离体培养的植物细胞、组织和器官等的主要营养来源，培养基的营养成分、理化性质等直接影响培养材料的生长分化。热灌装：1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出，按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。2、取少量蒸馏水或去离子水（培养基总量的1/2-2/3的蒸馏水）加入烧杯中。3、按需称取琼脂后加入（2）水中加热搅拌均匀。加入称好的糖。4、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。（一般最后加激素母液）5、定容。6、调PH值。用0.1mol/L、0.5mol/L、1mol/LNaOH和HCl调至所需数值。7、分装。8、封口。9、灭菌10、冷却备用。书写标签（培养基类型代码、配制日期、配制人）讲

PH应根据所培养的植物种类来确定。pH过高，培养基会变硬；pH过低，影响培养基的凝固。如何配置1mol/LNaOH100ml?m=CVM=1mol/L*0.1L*40g/mol配制100ml，则NaOH称取量为4g。冷灌装1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出，按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。2、取少量蒸馏水或去离子水（培养基总量的1/2-2/3的蒸馏水）加入烧杯中。3、按需称取琼脂、糖。4、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。（一般最后加激素母液）5、定容。6、调PH值。用0.1mol/L、0.5mol/L、1mol/LNaOH和HCl调至所需数值。7、分装。8、封口。9、灭菌10、冷却备用。书写标签（培养基类型代码、配制日期、配制人）吸取母液一看二摇三取配制1L培养基母液吸取量ml=（1/母液倍数）*培养基体积（ml）=(1/50)*1000ml=20ml定容、混匀调整PH值至5.8过碱了加酸调节过酸了加碱调节分装、密封灭菌（温度121℃，时间20min）3mg/L6-BA*250ml=0.1mg/ml6-BA*x3mg/L6BA*0.250L=0.1mg/ml6-BA*x0.75mg=0.1mg/ml*xx=7.5ml大量Ⅰ母液吸取量（50倍）：2.5ml大量Ⅱ母液吸取量（50倍）：2.5ml微量母液吸取量(200倍)：1.25ml铁盐母液吸取量（20倍）12.5m有机物母液吸取量：甘氨酸（200倍）：1.25ml

盐酸硫胺素+盐酸吡哆醇+烟酸：1.25ml

肌醇母液吸取量（50倍）：5ml6-BA:7.5ml

NAA:5ml大量Ⅰ母液吸取量（20倍）：6.25ml大量Ⅱ母液吸取量（20倍）：6.25ml微量母液吸取量(200倍)：1.25ml铁盐母液吸取量（100倍）：2.5ml有机物母液吸取量：甘氨酸（200倍）：1.25ml

盐酸硫胺素+盐酸吡哆醇+烟酸：1.25ml

肌醇母液吸取量（50倍）：5ml6-BA:7.5ml

NAA:0.5ml分化：1/2MS+2.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+20g/L白糖+4g/L琼脂壮苗：2/3MS+1g/L蛋白胨+1g/L活性炭+22g/L白糖+4g/L琼脂生根：1/2MS+1g/L活性炭+0.1mg/LNAA+18g/L白糖+4g/L琼脂每种500ml25、30、35ml/瓶分化：1/2MS+2.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+20g/L白糖+4g/L琼脂

大量Ⅰ母液吸取量：大量Ⅱ母液吸取量：微量母液吸取量(200倍)：铁盐母液吸取量（100倍）：有机物母液吸取量：甘氨酸（200倍）：

盐酸硫胺素+盐酸吡哆醇+烟酸：

肌醇母液吸取量（50倍）：6-BA:NAA:分化：1/2MS+2.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+20g/L白糖+4g/L琼脂500ml，每瓶分50ml，ph6.0

大量Ⅰ母液吸取量：12.5ml大量Ⅱ母液吸取量：12.5ml微量母液吸取量(200倍)：2.5ml铁盐母液吸取量（100倍）：5ml有机物母液吸取量：甘氨酸（200倍）：2.5ml(有机)盐酸硫胺素+盐酸吡哆醇+烟酸：2.5ml

肌醇母液吸取量（50倍）：10ml6-BA:12.5ml

NAA:1ml壮苗：2/3MS+1g/L活性炭+22g/L白糖+4g/L琼脂500ml，每瓶分50ml，ph6.0

大量Ⅰ母液吸取量：大量Ⅱ母液吸取量：微量母液吸取量(200倍)：铁盐母液吸取量（100倍）：有机物母液