药材三七、葛根及其制剂中农药多残留测定研究

药材三七、葛根及其制剂中农药多残留测定研究中成药脑得生片由​三七、川芎、红花、葛根、山楂五味药材组成，其中三七和葛根药材为生粉入药，且三七和葛根都为根及根茎类药材，是农药富集较为严重的部位。且两者用量占处方总量较大，所以本研究就生粉入药的药材及成药脑得生片进行农药残留研究。目前我国大多采用LC-MS和GC-MSMS两种仪器测定农药多残留。LC-MS偏向于测定极性较大的农药，GC-MSMS偏向于测定极性较小的农药。由于实验条件限制，本研究只采用GC-MSMS作为分析仪器进行农残分析测定。农药多残留分析过程中，样品前处理过程主要包括取样、提取、净化、富集浓缩等过程。将农药充分提取的同时，又要有效地去除杂质，同时要保持较高的回收率，这些问题成为农残分析的关键。中药中农药多残留的测定不同于食品和环境中农药多残留分析，由于中药种类多，药用部位不同，基质种类复杂。现阶段在农药多残留方面，依靠现有技术手段建立统一的前处理方法，是不现实的，因根据具体品种，具体分析。1实验仪器与材料1.1仪器与设备GCMS-TQ8040气质联用仪（三重四级杆）（日本岛津），Talboys旋涡混合器(上海安谱实验科技股份有限公司），SCANPEED1580高速离心机（丹麦基因公司），BSA224S-CW电子天平（赛多利斯科学仪器公司），XS105DU电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司），分散固相萃取净化管[无水硫酸镁900mg，N-丙基乙二胺（PSA)300mg，十八烷基硅烷键合硅胶300mg，硅胶300mg，石墨化炭黑150mg]。1.2标准品实验所用标准品名称、英文名、生产厂家见表1。表1标准品信息表编号名称英文名批号供货单位标示浓度单标浓度µg/ml混标浓度µg/ml1氯氰菊酯Cypermethin913001中国计量科学研究院/121.55642.43112毒死蜱Chlorpyrifos138849农业部环境保护科研100µg/ml10023溴氰菊酯Deltamethrin5219100µg/ml10024苯醚菊酯Phenothrin4213100µg/ml10025三唑醇TaiadimenolG130479

德国Dr.Ehrenstorfer公司/103.05382.06116P,P’-滴滴伊P,P’-DDE201709/100.42.0087腐霉利ProcymidoneG128442/195.01683.90038山梨醇D-Sorbit92129///9D(+)-核糖酸-γ-内酯D(+)-RibonicAcidGamma-Lactone919545///10倍硫磷d6Fenthiob-d6295514上海安谱实验科技股份有限公司///1.3供试品7批三七药材和7批葛根药材信息见表2；中成药脑得生片信息见表3。类别编号供样单位三七1云南龙发制药有限公司2云南文山三七国际交易市场3哈尔滨华雨制药集团有限公司4怀化正好制药有限公司5白云山和记黄埔莱达制药（汕头）有限公司6吉林省松辽制药有限公司7景忠山国药（唐山）有限公司葛根1云南龙发制药有限公司2葵花药业集团（伊春）有限公司3西安北方药业有限公司4吉林省松辽制药有限公司5怀化正好制药有限公司6江苏同济医药有限公司7白云山和记黄埔莱达制药（汕头）有限公司表2药材信息表表3脑得生片信息表生产企业剂型批数批号1吉林省松辽制药有限公司片剂920160403，20160502，20160504，20160505，20160601，20160602，20160901，20160902，201912022哈尔滨华雨制药集团有限公司1020150408，2016010201，2016050502，20161001，20161002，2016110101，2016110102，20170101，20170201，20170202013景忠山国药（唐山）有限公司6160102，160401，160501，160502，160602，1701014西安北方药业有限公司3150101，160502，1610015黑龙江红豆杉药业有限责任公司2160302，1503036广东国医堂制药股份有限公司3160401，160701，1608017白云山和记黄埔莱达制药（汕头）有限公司11601028江西华太药业有限公司4160807，161014，161250，1612559葵花药业集团（伊春）有限公司320151101，20171103，2017020110四平市吉特药业有限公司220170702，201510010211四平正和制药有限公司3160601，161001，16120112云南龙发制药有限公司116010113卫材（辽宁）制药有限公司1C161001214辽宁彭健药业有限公司12015020115怀化正好制药有限公司1160301总计501.4试剂乙腈、正己烷、乙酸乙酯、丙酮，以上均为色谱级试剂，无水硫酸钠为分析纯。2实验方法2.1溶液的制备2.1.1农药单标准对照品贮备液的配制精密称取固体对照品10mg，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，摇匀，即得。已是液体的对照品浓度合适，不用再单独配制。具体浓度见表1。2.1.2混合对照品贮备液的配制精密吸取各配制好的单标农药和成品液体农药200ml，至10ml量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，即得。具体浓度见表1。2.1.3内标贮备液的配制倍硫磷d-6对照品浓度为50mg/L，精密量取1ml，至10ml量瓶中，加乙腈定溶至刻度，摇匀，即得浓度为50µg/ml的倍硫磷d-6内标贮备液。2.1.4GCMSMS分析用内标-分析保护剂的配制:取D(+)-核糖酸-γ-内酯99.98mg置10ml量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度（A液:浓度9.998mg/ml）。另取山梨醇49.88mg，置10ml量瓶中，加水2ml溶解，加乙腈至刻度（B液：浓度4.988mg/ml）。精密量取A液，B液5ml至25量瓶中，再加入上述内标贮备液5ml，加乙腈溶解并定容至刻度，得GCMSMS分析用内标-分析保护剂。(D(+)-核糖酸-γ-内酯1.996mg/ml，山梨醇0.9996mg/ml，倍硫磷d-610µg/ml)2.1.5供试品溶液的制备提取：取供试品，粉碎成粉末（过三号筛）。精密称取供试品粉末5g，置50ml具塞离心管中，加丙酮40ml，再加无水硫酸镁1g，振荡30分钟（转速2000转/min），离心，分取丙酮置圆底烧瓶中，残渣再加40ml丙酮，振荡30分钟（转速2000转/min），离心，分取上清液丙酮，合并两次分取的丙酮。置旋转蒸发仪上，低于40℃，蒸至近干，加入乙腈5ml，再旋蒸置近干，用乙腈转移近干的提取物至10ml量瓶中，混匀。净化：取上述溶液6ml，置已预先装有净化材料的分散固相萃取净化管，振荡5分钟（转速2000转/min），离心，取上清液，即得。2.1.6空白试样溶液的制备不加供试品，按供试品溶液的制备方法制成空白试样溶液。2.1.7空白溶剂的制备取色谱级乙腈直接进样。2.1.8GCMSMS测定精密量取空白试样、混合对照品、供试品溶液800µl，加分析用内标-分析保护剂200µl，混匀，滤过。分别精密吸取1µl注入气相色谱串联质谱仪，测定，以内标校准曲线法计算，即得。2.2色谱条件2.2.1气相色谱条件色谱柱：SH-Rxi-5SilMS柱（30.0M×0.25mm×0.25µm）；载气：高纯氦气；进样口温度：65℃；进样方式：分流进样，分流比20；进样时间：1min；进样量：1µl；采用线速度控制模式，线速度36.2cm/sec；吹扫流量5.0ml/min。程序升温见表4。表4气相柱箱程序升温表速率（℃/min）最终温度（℃）保持时间(min)-40425125010300252.2.2质谱条件（1）特征离子的确定。将较高浓度的75种农药的混标选择全扫描（SCAN）模式扫描，扫描质量范围（40-500），得到75种农药（含内标）的总离子流色谱图（TIC），提取每个峰的质谱图，再化合物谱库中进行检索，确证每一种农药。然后逐个优化各农药的质谱条件，在每种农药的质谱图中选择三至四个丰度高、质量数大、干扰小的碎片离子作为相应农药定性、定量特征检测离子。最终优化好的参数表见附录。（2）质谱参数。离子源温度：250℃；接口温度：280℃；相对于调谐结果0.1KV；溶剂延迟时间：6min；阈值：100。检测方式：分段扫描，MRM参数见4.3。GC程序时间：49.90min。2.3GCMSMS测定步骤2.3.1质谱条件采用上述优化好的参数对样品进行MRM分段扫描，先用正构烷烃（C9-C40）校正相对保留时间。确定筛选范围为：《中国药典》2015年版四部通则2341农药残留量测定法第四法农药多残留质谱测定法下75种农药（包括内标）。所得色谱图根据相对保留时间提取质量色谱图进行特征离子和离子比率匹配选择，对样品中存在的农药种类的定性方法。2.3.2定量测定根据定性筛查结果，筛选检出率较高的农药进行定量测定。定量法用标准曲线法，采用内标进样测得。2.4方法学验证2.4.1专属性实验取空白溶剂、空白试样、三七供试品、葛根供试品、脑得生片供试品溶液分别采用上述MRM定性筛查方法进样。结果表明：空白溶剂和空白试验中均未检出农药，表明专属性良好。2.4.2线性范围分别配置了10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml、2000ng/ml不同浓度的混合标准溶液，每个样品中均含有相同量的GCMSMS分析用内标-分析保护剂，以化合物定量例子的峰面积对浓度做线性回归，标准曲线见图1-7。线性关系方程及相关系数见表5。编号名称标准曲线方程相关系数R线性范围ng/ml1腐霉利Y=0.0074X+23.760.999119.5015～3900.32毒死蜱Y=0.0067X+20.580.999610～20003溴氰菊酯Y=0.0456X+66.5820.991610～20004氯氰菊酯Y=0.0145X+69.7840.993812.1555～2431.15三唑醇Y=0.0059X+26.4410.998910.3055～2061.16苯醚菊酯Y0.0121X+43.4280.99710～20007P,P’-DDEY=0.0024X+5.88090.999810.04～2008表5标准曲线信息表图1腐霉利标准曲线图1腐霉利标准曲线图2毒死蜱标准曲线图2毒死蜱标准曲线图4P,P’-DDE标准曲线图3三唑醇标准曲线图4P,P’-DDE标准曲线图3三唑醇标准曲线图6氯氰菊酯标准曲线图5苯醚菊酯标准曲线图6氯氰菊酯标准曲线图5苯醚菊酯标准曲线图7溴氰菊酯标准曲线图7溴氰菊酯标准曲线由上表可知，7种农药的回归方程相关系数R在0.99～1之间，在各自的浓度范围内呈现良好的线性关系。2.4.3回收率考察分别对三七药材、葛根药材和脑得生片进行回收率试验，每个平行测定2份。分别取2.5g上述三种供试品，加入适量对照品，按供试品溶液制备的方法进行制备。精密量取供试品溶液800µl，加分析用内标-分析保护剂200µl，混匀，滤过，即得。回收率结果见表6。表6回收率结果表编号农药名称三七葛根脑得生片回收率（%）RSD（%）回收率（%）RSD（%）回收率（%）RSD（%）1腐霉利90.64.089.84.689.64.92毒死蜱88.85.2//82.26.53溴氰菊酯80.35.480.27.677.47.84氰氯菊酯75.67.774.25.974.19.65三唑醇80.25.578.65.678.56.96苯醚菊酯////74.28.67P,P’-DDE82.34.679.35.580.29.4注：/：低于检出限，未检出。各农药回收率在74～90.6%之间，RSD<10%。其中菊酯类农药回收率低于其他农药，因为菊酯类农药受基质效应影响更大，虽然已通过加入分析保护剂来避免基质干扰，但菊酯类农药仍不理想。但74%的回收率也符合农药多残留的规定。3样品测定3.1定性筛查结果及分析利用分段扫描信息，对不同企业不同批号脑得生片和三七、葛根药材进行定性筛查。样品中检出的农药相应的图谱见图8，药材筛查结果见表7脑得生片筛查结果表8。图8检出农药色谱图表7药材筛查出农药信息表类别编号供样单位检出农药种类三七1云南龙发制药有限公司五氯苯胺、甲基五氯苯基硫醚、毒死蜱、艾氏剂、三唑酮、腐霉利、氯氟氰菊酯、溴氰菊酯2云南文山筋条杀螟硫磷、毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯3哈尔滨华雨制药集团有限公司四氯硝基苯、b-六六六、毒死蜱、三唑酮、三唑醇、腐霉利、氯氟氰菊酯、溴氰菊酯4怀化正好制药有限公司毒死蜱、腐霉利5白云山和记黄埔莱达制药（汕头）有限公司六氯苯、甲基五氯苯基硫醚、毒死蜱、艾试剂、腐霉利、氯氟氰菊酯、溴氰菊酯6吉林省松辽制药有限公司毒死蜱、腐霉利、三唑醇、异菌脲、溴氰菊酯7景忠山国药（唐山）有限公司毒死蜱、腐霉利、P，P’-DDE、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯葛根1云南龙发制药有限公司腐霉利、氯氰菊酯2葵花药业集团（伊春）有限公司氯氰菊酯3西安北方药业有限公司P，P’-DDE、甲氧滴滴涕、氯氰菊酯4吉林省松辽制药有限公司氯硝胺、氯氰菊酯、溴氰菊酯5怀化正好制药有限公司腐霉利、溴氰菊酯6江苏同济三唑酮、氟节胺、氯氰菊酯、溴氰菊酯7白云山和记黄埔莱达制药（汕头）有限公司腐霉利表8脑得生片筛查出农药信息表编号生产企业批号检出农药类型1吉林省松辽制药有限公司20160403毒死蜱、腐霉利、氯氰菊酯220160502毒死蜱、腐霉利320160504毒死蜱、腐霉利420160505五氯硝基苯、毒死蜱、腐霉利、氯氰菊酯520160601毒死蜱、腐霉利、氯氰菊酯620160602毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯720160901毒死蜱、腐霉利、P，P’-DDE820160902毒死蜱、腐霉利、氯氰菊酯、溴氰菊酯920161202毒死蜱、腐霉利10哈尔滨华雨制药集团有限公司20150408毒死蜱、腐霉利112016010201五氯硝基苯、甲基五氯苯基硫醚、毒死蜱、腐霉利、三唑醇、溴氰菊酯122016050502毒死蜱、腐霉利、氯氰菊酯1320161001毒死蜱、腐霉利1420161002毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯152016110101毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯162016110102毒死蜱、甲基五氯苯基硫醚、腐霉利、溴氰菊酯1720170101毒死蜱、腐霉利1820170201毒死蜱、腐霉利、P，P’-DDE192017020201腐霉利20景忠山国药（唐山）有限公司160102毒死蜱、腐霉利，苯醚菊酯21160401八氯二丙醚、毒死蜱、腐霉利、苯醚菊酯、溴氰菊酯22160501八氯二丙醚、毒死蜱、腐霉利、P，P’-DDE23160502毒死蜱、腐霉利24160602毒死蜱、三唑醇、腐霉利、O，P’-DDE25170101毒死蜱、腐霉利26西安北方药业有限公司150101毒死蜱、腐霉利27160502毒死蜱、腐霉利28161001毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯苯醚菊酯29黑龙江红豆杉药业有限责任公司150302毒死蜱、腐霉利30150303氯硝胺、毒死蜱、腐霉利31广东国医堂制药股份有限公司160401腐霉利、毒死蜱32160701毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯33160801毒死蜱、腐霉利34白云山和记黄埔莱达制药（汕头）有限公司160102毒死蜱、腐霉利35江西华太药业有限公司160807腐霉利36161014腐霉利37161250毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯38161255毒死蜱、腐霉利39葵花药业集团（伊春）有限公司20151101毒死蜱、腐霉利、苯醚菊酯4020151103六氯苯、毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯4120170201毒死蜱、腐霉利42四平市吉特药业有限公司20150702毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯432015100102毒死蜱、腐霉利、P，P’-DDE44四平正和制药有限公司160601毒死蜱、腐霉利45161001毒死蜱、腐霉利46161201毒死蜱、腐霉利、狄氏剂、氯氰菊酯、溴氰菊酯47云南龙发制药有限公司160101毒死蜱、腐霉利48卫材（辽宁）制药有限公司C1610012腐霉利、三唑醇、溴氰菊酯49辽宁彭健药业有限公司20150201腐霉利50怀化正好制药有限公司160301毒死蜱、腐霉利、O，P’-DDE通过对7批三七药材，7批葛根药材和50批脑得生片进行GCMSMS定性筛查，分析所有供试品农药的检出情况：三七中检出农药15种，其中农药残留较高的是腐霉利和毒死蜱，检出率100%，见图9；葛根中检出农药10种，其中农药残留较高的是氯氰菊酯，腐霉利，溴氰菊酯，见图10；成药脑得生片中检出农药14种，其中农药残留检出率较高的7种分别是腐霉利，毒死蜱，溴氰菊酯，氯氰菊酯、P，P’-DDE，三唑醇，苯醚菊酯，每一批次中都检出有腐霉利，实验每进五针会加一针空白溶剂或空白试样，已排除残留干扰。图9三七中残留农药检出率图表图10葛根中残留农药检出率图表图11脑得生片中残留农药检出率图表所有供试品中共检出农药24种，大部分农药残留在三七和葛根中。由于三七和部分葛根为生粉入药，成药中的农药极大可能由生粉带入，且成药中检出率较高的农药正是三七和葛根中检出率较高的农药，如腐霉利在三七中检出率100%，成药亦如此。故推断生粉中农药残留过量导致成药中可以检出相应农药，具体为见图12。图12所有供试品中残留农药检出批数统计图3.2检出农药性质及最大残留量制定3.2.1农药性质通过对14批药材和50批脑得生片的定性筛查。确认检出率较高的七种农药分别是：腐霉利、毒死蜱、氯氰菊酯、溴氰菊酯、三唑醇、P,P’-DDE，苯醚菊酯。查阅文献对上述农药的性质简要介绍。检出农药为两类，一类是杀虫剂，一类是杀菌剂。腐霉利为新型低毒杀虫剂。用于果树、蔬菜、花卉等的菌核病、灰霉病、黑星病、褐腐病、大斑病的防治。对眼睛和皮肤有刺激作用。动物试验无致畸、致突变作用，二代繁殖试验也未见不良影响。毒死蜱广谱杀虫、杀螨剂。用于多种咀嚼式和刺吸式口器害虫，也可用于防治卫生害虫。对眼睛有轻度刺激，对皮肤有明显刺激，长时间接触会产生灼伤。在试验剂量下未见致畸、致突变、致癌作用。对鱼和水生动物毒性较高，对蜜蜂有毒。氯氰菊酯为中等毒性杀虫剂。适用于防虫杀虫，例如蝇类、蚊类和蚋属等昆虫。刺激呼吸系统和皮肤，与皮肤接触可能致敏。溴氰菊酯为中等毒性杀虫剂。用于防治农业害虫、仓库害虫、卫生害虫。皮肤接触可引起刺激症状，出现红色丘疹。急性中毒时，轻者有头痛、头晕、恶心、呕吐、食欲不振、乏力，重者还可出现肌束震颤和抽搐。对人的皮肤及眼粘膜有刺激作用，对鱼和蜜蜂剧毒。苯醚菊酯为低毒杀虫剂。用于防治棉花；水稻；蔬菜；果树茶树等多种作物害虫，也用于防治卫生害虫及牲畜害虫。对眼睛有轻度刺激作用。对兔皮肤无刺激作用。误服，引起头痛、头晕、恶心、呕吐、流涎和血尿等。严重者出现抽搐和意识障碍。三唑醇为低毒性杀菌剂。用于防治黑穗病、白粉病、锈病、丝黑穗病。无慢性毒性。3.2.2MRL值和RL值的制定最大残留限量（MRL)：是指农畜产品中农药残留的法定最高允许量，其数值必须是毒理学上可以接受的。本研究参考GB2763-2016食品中农药残留最大限量和中国农药信息网农药残留限量，综合考虑制定MRL。检测限(RL)：是指残留量被作为数值报告的最低浓度，在欧盟地区将此概念称为报告限。该值具有可接受的准确度和精密度，是高于实际方法定量限的一个人为规定的固定数值。一般认为：当MRL≧0.1mg/kg时，检测限应≦1/10MRL；当MRL<0.1mg/kg时，检测限应≦1/5MRL。最大残留量的制定是一个既专业又复杂过程，本研究制定的MRLs仅供参考。表9各农药MRL和RL值农药类别最大残留量标准值MRL(mg/kg)检测限RL（mg/kg)腐霉利50.5毒死蜱10.1溴氰菊酯0.50.05氯氰菊酯10.1三唑醇0.50.05苯醚菊酯0.50.05P,P’-DDE0.50.053.3定量结果及分析采用2.3.2的方法对14批药材和50批成药进行定量测定。结果如下：表10药材中检出农药含量名称企业毒死蜱mg/kg腐霉利mg/kg氯氰菊酯mg/kg溴氰菊酯mg/kgP,P’-DDEmg/kg三唑醇mg/kg苯醚菊酯mg/kg三七云南龙发制药有限公司<RL<RL<RL0.1565<RL<RL<RL云南文山筋条<RL<RL<RL0.1815<RL<RL<RL哈尔滨华雨制药集团有限公司<RL1.0161<RL0.1549<RL0.0742<RL怀化正好制药有限公司<RL3.8074<RL<RL<RL<RL<RL白云山和记黄埔莱达制药（汕头）有限公司<RL<RL<RL0.2438<RL<RL<RL吉林省松辽制药有限公司<RL<RL<RL0.1921<RL0.0588<RL景忠山国药（唐山）有限公司0.31411.3363<RL0.2037<RL0.0770<RL葛根云南龙发制药有限公司<RL<RL0.6100<RL<RL<RL<RL葵花药业集团（伊春）有限公司<RL<RL0.3158<RL<RL<RL<RL西安北方药业有限公司<RL<RL1.0848<RL<RL<RL<RL吉林省松辽制药有限公司<RL<RL0.42760.1867<RL<RL<RL江苏同济<RL<RL0.45870.3167<RL<RL<RL白云山和记黄埔莱达制药（汕头）有限公司<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL怀化正好制药有限公司<RL<RL<RL0.1638<RL<RL<RL注：<RL:低于检测限。通过表10可以看出：14批药材检出的农药部分未到达检测限，过了检测限的农药未超过最大残留限量，在监测范围内药材农药残留基本安全。通过试验，三七中腐霉利、葛根中氯氰菊酯残留检出率较高，虽未超过最大残留量，但仍需提高意识进行防范。表11药材中检出农药含量编号企业批号毒死蜱mg/kg腐霉利mg/kg溴氰菊酯mg/kg氯氰菊酯mg/kgP，P'-DDEmg/kg三唑醇mg/kg苯醚菊酯mg/kg1吉林省松辽制药有限公司20160403<RL<RL<RL0.2572<RL<RL<RL220160502<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL320160504<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL420160505<RL<RL<RL0.2207<RL<RL<RL520160601<RL<RL<RL0.2161<RL<RL<RL620160602<RL<RL0.1630<RL<RL<RL<RL720160901<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL820160902<RL<RL0.16170.1877<RL<RL<RL920161202<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL10哈尔滨华雨制药集团有限公司20150408<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL112016010201<RL<RL0.1428<RL<RL0.0688<RL122016050502<RL<RL<RL0.1751<RL<RL<RL1320161001<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL1420161002<RL<RL0.2004<RL<RL<RL<RL152016110101<RL<RL0.1714<RL<RL<RL<RL162016110102<RL<RL0.1796<RL<RL<RL<RL1720170101<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL1820170201<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL192017020201<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL20景忠山国药（唐山）有限公司160102<RL<RL<RL<RL<RL<RL0.097621160401<RL<RL0.1489<RL<RL<RL0.131322160501<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL23160502<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL24160602<RL<RL<RL<RL<RL0.0784<RL25170101<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL26西安北方药业有限公司150101<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL27160502<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL28161001<RL<RL0.1584<RL<RL<RL0.105229黑龙江红豆杉药业有限责任公司150302<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL30150303<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL31广东国医堂制药股份有限公司160401<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL32160701<RL<RL0.2038<RL<RL<RL<RL33160801<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL34白云山和记黄埔莱达制药（汕头）有限公司160102<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL35江西华太药业有限公司160807<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL36161014<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL37161250<RL<RL0.1664<RL<RL<RL<RL38161255<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL39葵花药业集团（伊春）有限公司20151101<RL<RL<RL<RL<RL<RL0.13644020151103<RL<RL0.2284<RL<RL<RL<RL4120170201<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL42四平市吉特药业有限公司20150702<RL<RL0.1564<RL<RL<RL<RL432015100102<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL44四平正和制药有限公司160601<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL45161001<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL46161201<RL<RL0.24100.1764<RL<RL<RL47云南龙发制药有限公司160101<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL48卫材（辽宁）制药有限公司C1610012<RL<RL0.1665<RL<RL0.0789<RL49辽宁彭健药业有限公司20150201<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL50怀化正好制药有限公司160301<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL注：<RL:低于检测限。通过表11可以看出：50批脑得生片农药残留均未超限。其中腐霉利、毒死蜱、P,P’-DDE均未过检测限。而溴氰菊酯、氯氰菊酯、苯醚菊酯和三唑醇仅有个别过了检测限，但低于MRL，符合安全性限度规定。相对药材，成药在农药残留这方面相对安全。但在生粉投料时，需要对药材进行严格把控，药材好，药才好。3.4总体结论：从三七和葛根药材以及脑得生片农药多残留研究数据可以看出：高检出率，高合格率。高检出率代表了在药材种植过程中农药滥用情况切实存在。高合格率代表了中药的使用特点，需要炮制，不是新鲜使用，因此很多农药会在贮藏过程中讲解，所以安全使用的风险仍属基本可控。但是，按着国家食品药品监督管理局的要求，标准要严谨，监管必须零容忍。所以即使样品安全风险尚属可控，也有必要加强种植等生产环节的监管。4讨论4.1样品前处理条件考察4.1.1提取溶剂的考察根据各农药的性质选用乙腈、乙酸乙酯、丙酮作为提取溶剂的考察对象，以三七药材和成药脑得生中检出残留农药峰面积作为评价指标。结果发现：乙酸乙酯提取后指标成分峰面积较小，丙酮和乙腈提取效率相近。但考虑到用量大，而乙腈的毒性较大，价格较贵，所以最终选择用丙酮作为提取溶剂。此外，丙酮沸点低，在浓缩过程中缩短样品处理时间，提取效率更高。但在浓缩定容的环节，用乙腈代替丙酮进样，是由于丙酮沸点低，无法保证进样体积的稳定性，而乙腈进样对色谱柱稍有损害，但为了保证实验数据的精密性和准确性，选择用乙腈进样，并选择PTV分流进样，减少乙腈对色谱柱的损伤。4.1.2提取方法的选择根据样品的性质，选用常用的超声提取法和振荡提取法作为提取方法的考察对象，以三七药材和成药脑得生中检出残留农药峰面积作为评价指标。结果表明，在其他条件一致的情况下，样品采用振荡提取的峰面积比超声提取的大，故选择振荡提取作为提取方法。4.2基质效应的考察在进行中药中农药残留分析时，基质效应对于农药的准确定性定量有较大影响。在气相色谱分析中大多数农药表现为不同程度的基质增强效应，主要表现为基体匹配标液与相同浓度的纯溶剂配制的标液相比，具有更高的吸收值和更好峰性。一般认为基质效应产生的主要原因是由于样品中的杂质组分分子会与待测物分子竞争进样口或柱头的金属离子、硅烷基以及不挥发性物质等所形成的活性位点，从而使待测物与活性位点的相互作用机会减少，而导致相同含量的待测物在实际样品中要比在纯溶剂标样中的响应值高。为了减少待测物分子与进样口、柱头活性位点相互作用，所以推荐选择一种试剂竞争性的与活性位点结合，达到屏蔽活性位点的效果，这种试剂称为分析保护剂。本研究选择D(+)-核糖酸-γ-内酯—山梨醇为分析保护剂。4.3MRM参数分段扫描MRM参数如下表：表12MRM分段扫描信息分段分段时间（min）扫描间隔（sec）目标离子对15.86-8.20.300185.0>93.028.2-11.020.038260.9>202.9169.1>66.0196.0>181.0306.1>264.1218.9>182.9283.8>248.8265.0>237.0206.0>176.0311.02-11.630.038196.0>181.0306.1>264.1283.8>248.8265.0>237.0206.0>176.0294.8>236.8231.00>174.9218.9>182.9411.63-12.130.034218.9>182.9283.8>248.8265.0>237.0206.0>176.0294.8>236.8231.0>174.9265.9>230.8177.0>127.1512.13-12.940.025218.9>182.9294.8>236.8231.00>174.9265.9>230.8177.0>127.1262.8>191.9285.0>212.0263.0>109.0271.80>236.90284.90>269.9612.94-13.380.025218.9>182.9262.8>191.9285.0>212.0263.0>109.0271.8>236.9284.9>269.9130.0>95.0277.0>260.0296.0>263.0223.9>123.1224.0>123.0713.38-13.830.018285.0>212.0263.00>109.0271.8>236.9284.9>269.9130.0>95.0277.0>260.0296.0>263.0223.9>123.1224.0>123.0313.9>257.9262.9>193.0300.9>222.9291.1>109.0208.1>181.0813.83-14.080.020271.8>236.9284.9>269.9223.9>123.1313.9>257.9262.90>193.0300.9>222.9291.10>109208.10>181.0266.1>236.1330.9>315.9914.08-14.340.019277.0>260.0296.0>263.0223.9>123.1224.0>123.0313.9>257.9262.9>193.0300.9>222.9291.1>109.0208.1>181.0250.0>139.0266.0>236.1330.9>315.9252.1>162.1366.9>212.9352.8>262.9386.8>287.01014.34-14.790.015223.9>123.1224.0>123.0313.9>257.9262.9>193.0300.9>222.9291.1>109.0208.1>181.0250.0>139.0266.1>236.1330.9>315.9252.1>162.1366.9>212.9352.8>262.9386.8>287.0352.8>289.0283.0>96.0145.1>112.1168.1>70.0358.9>302.9372.8>336.81114.79-14.970.020250.0>139.0266.1>236.1330.9>315.9252.1>162.1366.9>212.9386.8>287.0352.8>