液相色谱柱该如何清洗 液相色谱维护和修理保养

第第页液相色谱柱该如何清洗液相色谱维护和修理保养液相色谱柱，是一种用于液体色谱分析仪器

1、反相色谱柱

分别用甲醇:水=90:10，纯甲醇（HPLC级），异丙醇（HPLC级），二氯甲烷（HPLC级）等溶剂作为流动相，依次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积.然后再以相反的次序冲洗。

2、正相色谱柱

分别用正己烷（HPLC级），异丙醇（HPLC级），二氯甲烷（HPLC级），甲醇（HPLC级）等溶剂做流动相，顺次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积（异丙醇粘度大，可降低流速，避开压力过高）.注意使用溶剂的次序不要颠倒，用甲醇冲洗完后，再以相反的次序冲洗至正己烷，全部的流动相必需严格脱水。

3、离子交换色谱柱

长时间在缓冲溶液中使用和进样，将导致色谱柱离子交换本领下降，用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生，反之，用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。

另外，还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗。但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的.假如柱子装反了，可以调回来，但可能会造成柱内担体塌陷.在不得已的情况下尽量不要反装色谱柱。

一般来说，全部的清洗方法都有仿佛的形式。所用的溶剂都是随溶剂强度加添，常常后一个溶剂是特别疏水的（如醋酸乙酯甚至是烃）可以用来溶解非极性物质如脂质和油类。我们必需保证一系列溶剂中每个溶剂都能与下一个溶剂互混。清洗过程要结束时，必需借助一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂系统。例如，异丙醇是一个特别好的作为中心步骤的溶剂，由于它能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度特别大，必需确保较低的流速以免使泵压过高。当然，假如使用紫外检测器的话，避开溶剂在紫外区域有吸取，要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。

对于典型的硅胶键合柱来说假如没有缓冲溶液的话推举使用以下溶剂系列：

100%甲醇

100%乙晴

75%乙晴—25%异丙醇

100%异丙醇

100%二氯甲烷

100%正己烷

用二氯甲烷或正己烷以后，由于溶剂相容性柱子必需用异丙醇冲洗后才能用原来的水相溶剂。每种溶剂至少冲洗10个柱体积。如250mm

4.6mmHPLC分析柱，分析者可以用1～2ml/min的流速来冲洗，要回复原来的溶剂体系，不需要每一步都冲洗，可以跳过中心步骤。中心步骤推举使用异丙醇，然后用没有缓冲的流动相，后回复起始流动相配置。4氢呋喃是另外一种比较受欢迎的去除污染的溶剂。假如使用者怀疑柱子被严重污染，可以二甲基亚砜（DMSO）或者二甲基甲酰铵和水按50：50的比例混合用低于0.5ml/min的流速流过色谱柱。成功再生反相柱子是一个特别耗时间的过程，溶剂冲洗可以利用梯度系统过夜操作。

液相色谱仪原理与应用液相色谱仪的应用，可用于高沸点、热稳定性差以及具有生理活性物质的分析。一般来说，沸点在450℃以下，相对分子质量小于450的有机物可用液相色谱仪分析，但这些物质只占有机物的15%～20%，其余的80%～85%有机物原则上都可接受高效液相色谱仪分析。

色谱柱的使用和维护，色谱柱的正确使用和维护特别紧要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。

在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。调整流速太快，避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的蓦地变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。

反冲色谱柱，一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会快速降低柱效，预柱和保护柱，选择使用适合的流动相（尤其是pH），以避开固定相被破坏。

有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶基质被溶解。

避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相像固定相的短柱。保护柱可以而且应当常常更换。

液相色谱仪的基本结构，由输液系统、进样系统、分别系统、检测系统和数据处理系统等构成。

工作原理，利用混合物各组分在固定相和流动相中溶解、调配或吸附等化学作用性能的差异，使各组分在作相对运动的两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分别。

从液相色谱仪工作流程中看到，色谱柱是实现分别的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱结构、填料特性、填充质量和使用条件有关。

色谱填料：经过制备处理后，用于填充色谱柱的物质颗粒，通常是5—10粒径的球形颗粒。

色谱柱管：内部抛光的不锈钢管。典型的液相色谱分析柱尺寸是内径4.6mm，长250mm。

色谱柱：也称固定相，是将色谱填料填充