分光光度计的工作原理及维护和修理保养_第1页
分光光度计的工作原理及维护和修理保养_第2页
分光光度计的工作原理及维护和修理保养_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

第第页分光光度计的工作原理及维护和修理保养分光光度计的工作原理

事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在确定范围内变化，即仪器有确定的精准度和精准明确度。如EppendorfBiophotometer的精准度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值确定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避开存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度削减颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值可以在0.1—1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至显现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移猛烈；必需使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能接受窗口磨损的比色杯；样品的体积必需达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。

除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个特别紧要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，由于蛋白的吸取峰是280nm。纯洁的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。假如比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯洁的核酸A260/A230的比值大于2.0、A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0、

蛋白质的直接定量（UV法）

这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程特别简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要除去320nm的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸仿佛，要求A280的吸光值至少大于0.1A，较佳的线性范围在1.0—1.5之间。试验中选择Warburg公式显示样品浓度时，发觉读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要察看A280的吸光值的变化范围不超过1%，表明结果特别稳定。漂移的原因是由于Warburg公式吸光值换算成浓度，乘以确定的系数，只要吸光值有少许更改，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯洁、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是简单受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。

比色法蛋白质定量

蛋白质通常是多种蛋白质的混合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（

人人文库> 全部分类> 应用文书 > 规章制度

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论