《白纹伊蚊雄蚊规模化生产技术要求》

ICS67.020

CCSX04

团体标准

T/CIRAXXXXX—2023

白纹伊蚊雄蚊规模化生产技术要求

Technicalrequirementsforlarge-scaleproductionofAedesalbopictusmale

mosquitoes

（征求意见稿）

2023年8月2日

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国同位素与辐射行业协会发布

T/CIRAXXXXX—2023

白纹伊蚊雄蚊规模化生产技术要求

1范围

本文件规定了白纹伊蚊（Aedesalbopictus）雄蚊规模化生产流程和技术要求，包括工厂设施与条件、

蚊品系建立、蚊卵孵化、幼虫饲养、雌雄分离、羽化、质量控制和关键技术指标等。

本文件适用于在昆虫不育技术框架下，在工厂条件下规模化生产白纹伊蚊雄蚊。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

NY/T1964.3-2010农药登记用卫生杀虫剂室内试验试虫养殖方法第3部分：白纹伊蚊

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

蚊品系mosquitostrain

白纹伊蚊。

3.2

扩繁inbreeding

在实验室和工厂条件下，严格按照蚊虫的生长发育过程进行饲养，扩大种群。

3.3

蚊卵孵化率egghatchrate

孵化出幼虫的数量与总孵化蚊卵数量的比值。

3.4

幼虫饲养larvalrearing

将刚孵化出来的一期幼虫转移到幼虫饲养盘中，按照幼虫的生长规律，每天给予幼虫一定量的食物。

幼虫时期约维持5～6天，经4次蜕皮后变成蚊蛹。

3.5

蚊蛹和幼虫收集collectionofmosquitopupaeandlarvae

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T/CIRAXXXXX—2023

将饲养盘中的幼虫及蛹倒入筛网，过滤掉水体，将幼虫及蛹收集在手持筛网中。

3.6

盐水浸泡salinesoaking

将蚊蛹和幼虫混合物浸泡在一定浓度的盐水中，可以特异性杀死蚊幼虫而不影响蚊蛹。

3.7

蚊蛹雌雄分离sexseparation

基于白纹伊蚊的雌蛹、雄蛹体形大小差异，通过雌雄分离仪器后，可以将雌蛹、雄蛹分离出来，并

分类收集。

3.8

羽化eclosion

指蚊蛹蜕皮变成成蚊的过程。

3.9

混雌率femalecontaminationrate

经雌雄分离后，混在雄蚊中雌蚊的百分率。

3.10

飞行率flightabilityrate

雄蚊成蚊在30分钟内自由飞离飞行测试筒的百分率。

4仪器与材料

4.1电子天平

用于蚊卵称重，最小读数为0.0001g~0.00001g。

4.2孵化液

用于孵化蚊卵，称取0.9g的酵母蛋白胨粉加入至1000ml的纯水中，搅拌均匀并密封，使酵母蛋

白胨粉完全溶解，放置在28±2℃条件下发酵24h后使用。

4.3恒温培养箱

维持蚊卵在孵化过程中温度恒定。

4.4幼虫饲养盘

用于饲养幼虫的塑料盘，规格51.5×36.0×5.5cm。

4.5幼虫食物

用于饲养幼虫的混合食物，其主要成分包括高级鱼粉、虾粉、小型甲壳类动物、优质酵母、胎贝、

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小麦粉等。

4.6网筛

不锈钢，60目。

4.7雌雄分离器

由两块大小一致的玻璃板以一定的角度贴合组成，可依据雌雄蚊蛹体形大小差异来进行分离。

4.8羽化盒

用于盛放雄蛹，规格20×30×4cm。

4.9羽化笼

在框架上缚以蚊帐纱布制成的长方形纱布笼，规格30×30×90cm，网孔目数40目。

4.10飞行测试筒

用于测定雄蚊的飞行能力，圆筒形，材质透明，规格为直径12cm和高度60cm。

5生产条件

5.1蚊卵孵化条件

恒温培养箱温度29±1℃，孵化时间为1~1.5h。

5.2幼虫饲养间条件

温度27±2℃，相对湿度75±10%，光照周期12L:12D，幼虫饲养水温度：25±2℃。

5.3羽化间条件

温度26±2℃，相对湿度75±10%。

6生产流程

6.1蚊品系建立与扩繁

从野外采集蚊幼虫，在实验室饲养至成蚊，经形态学鉴定为白纹伊蚊后，进行混合饲养，建立实验

室种群。待种群在实验室中稳定饲养多代，然后将实验室种群转移至工厂条件下进行饲养。按照蚊虫世

代增长倍数和所需雄蚊数量进行计划扩繁。

6.2蚊卵孵化

将蚊卵轻轻扫下，混匀后，根据蚊卵孵化率来确定每盘所需的蚊卵数量，根据所需蚊卵数量进行称

重。白纹伊蚊蚊卵重量与数量关系参见附录A表A.1。将称重后蚊卵转移到15mL的离心管中，加入10mL

的孵化液，然后将管放置在恒温培养箱进行孵化，随后幼虫转移至幼虫饲养间进行饲养。蚊卵孵化流程

参见附录A图A.1。

6.3幼虫饲养

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在幼虫饲养盘中加入2.5L去氯水（放置过夜的自来水），将6.2孵化出的幼虫转入饲养盘，每盆饲

养4000±500条，幼虫饲养盘放置在幼虫饲养架上，每个幼虫饲养架可放置54个幼虫饲养盘。幼虫饲养

流程参见附录B图B.1。每日添加幼虫食物量请参照附录B表B.1。

6.4盐水浸泡

第8天（蚊卵孵化当天算第1天），将幼虫饲养盘蚊蛹、幼虫和饲养水倒经60目的过滤网筛，收集蚊

蛹及幼虫，然后将其转移至含有15%盐水（氯化钠）溶液中，浸泡1h，直至幼虫全部死亡。不同盐水

浓度对白纹伊蚊幼虫和蚊蛹的存活情况参见附录C表C.1和表C.2。

6.5雌雄分离

收集6.4蚊蛹，转移至清水中，然后利用雌雄分离器来分离并分类收集雄蛹和雌蛹。

6.6雄蛹装笼与羽化

将6.5分离后雄蛹转移至羽化间，取约16000只雄蛹放入羽化盒中，加入约600mL的清水，然后转移

至羽化笼，24h后，在羽化笼上放置经过10%糖水溶液的棉球供成蚊雄蚊吸食。48h后，将羽化盒从羽

化笼中取出。

6.7质量控制

生产的雄蚊质量控制包括重量、混雌率、飞行率。

——重量：随调挑选6.6雄蚊700-1000只，低温下冻晕后进行称重，然后计算单只雄蚊重量。

——混雌率：随机挑选6.6雄蚊700-1000只，冻死后，根据蚊虫形态学特征，记录混入雌蚊数量，

计算混雌率。

——飞行率：随机挑选6.6雄蚊700-1000只，转移至培养皿中，然后将飞行测试筒竖立在培养皿上，

30分钟后记录雄蚊飞离测试筒的数量，计算飞行率。

7雄蚊规模化生产关键技术指标

——雄蚊平均重量：1.0mg-1.4mg，单只雄蚊的平均重量为1.0mg~1.4mg。

——雄蚊平均混雌率：0-0.3%，每千只雄蚊中雌蚊的数量不超过3只。

——雄蚊平均飞行率：85%-100%，每千只测试雄蚊中，30min内飞离测试筒的数量不低于850只。

8其它指标

除上述规定雄蚊规模化生产关键技术指标，结合已有文献报导和中试研究结果，对其它生产相关指

标建议如下：

——每千个蚊卵平均重量：6.7-8.3mg，每千个蚊卵的平均重量≥6.7mg。

——蚊卵平均孵化率：70%-90%，经孵化后，≥70%的蚊卵能够孵化成幼虫。

——幼虫饲养密度：2条/cm2-3条/cm2，以饲养盘表面积计算，每平方厘米幼虫饲养密度为2~3条。

——雄蛹平均获得率：65%-80%，经第8天收集蚊蛹、幼虫和雌雄分离后，真实获得的雄蛹数量占

理论雄蛹数量的比值。

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——雄蚊平均羽化率：80%-100%，经雌雄分离，≥80%的雄蛹能够成功羽化为雄蚊。

9安全防护

在实验厂房内规模化生产雄蚊过程中，需要同时做好生物安全和人员安全的防护措施，需严格按照

附录E《实验厂房安全生产管理条例》执行，保证生物安全和人员安全。

10附加声明

本文件所规定的白纹伊蚊雄蚊规模化生产技术要求是依据主编和参编单位在中试条件下取得的实

验研究结果。

在昆虫不育技术框架下，在工厂化条件下规模化生产埃及伊蚊（Aedesaegypti）、致倦库蚊（Culex

quinquefasciatus）和斯氏按蚊（Anophelesstephensi）等雄性成蚊，生产流程和技术指标可参照本文件。

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附录A

（资料性）

白纹伊蚊蚊卵定量与孵化流程

分别称取0.01g、0.02g、0.03g、0.04g、0.05g、0.06g、0.07g、0.08g、0.09g和0.10g蚊卵，然后

进行人工计数蚊卵数量，根据蚊卵重量和数量（参见表A.1），可得出蚊卵重量（y）与数量（x）的关

系式：y=127611x–179.45，R2=0.9991，通过关系式计算可算得：1g≈127,000个蚊卵。

表A.1白纹伊蚊蚊卵重量与数量关系

蚊卵重量（g）数量

0.011285

0.022451

0.033907

0.045212

0.056495

0.067764

0.078854

0.0810261

0.0911793

0.1013266

图A.1白纹伊蚊蚊卵孵化流程图

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附录B

（资料性附录）

白纹伊蚊幼虫饲养流程和饲养食物量表

图B.1白纹伊蚊幼虫饲养流程图

表B.1幼虫饲养食物量表

天数（day）1234567

食物量（g）0.40.00.81.62.02.02.0

注：每盘幼虫饲养盘添加的食物量

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附录C

（资料性附录）

不同盐水浓度对白纹伊蚊幼虫和蚊蛹影响

选择孵化后第8天的白纹伊蚊幼虫和蚊蛹，将饲养水体过滤后收集幼虫和蚊蛹，进行盐水浸泡，盐

水浓度选择0，5，10%，15%，20%，25%和30%。将混合物与盐水过筛（60目），滤去盐水，然后将

筛网中混合物置于1升的清水中浸泡2-3次；将混合物倒入容器中，加水至30厘米，静置5分钟；死去的

幼虫会下沉于容器底部，而蚊蛹会上浮于水面，将蚊蛹轻轻倒出至收集盒中。随机挑选雄蛹、雌蛹各100

只，放入羽化笼，48小时后观察蚊蛹羽化率。同时设置未经盐水处理的对照组。

幼虫死亡率（%）=死亡幼虫数/幼虫数*100%

蚊蛹羽化率（%）=羽化只数/蛹数*100%

根据表C.1实验结果，随着盐水浓度增加，白纹伊蚊四期幼虫死亡率升高，当盐水浓度为15%，浸

泡时间30分钟或以上，可以完全杀灭白纹伊蚊四期幼虫。为保证幼虫死亡的稳定性及操作可行性，选择

盐水浓度为15%，浸泡时间60分钟作为目标浓度和时间。

为观察盐水浸泡对蚊蛹的影响，如表C.2所示，经盐水浸泡后，蚊蛹依然可以正常羽化，说明盐水

浸泡不会对蚊蛹产生不利影响。

表C.1不同盐水浓度浸泡对白纹伊蚊幼虫死亡率影响

浸泡时间盐水浓度（%）

（分钟）

0101520253035

15082.0094.0099.67100100100

30093.3399.33100100100100

45096.67100100100100100

60098.00100100100100100

75099.33100100100100100

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表C.2不同盐水浓度浸泡对白纹伊蚊蚊蛹羽化率影响

浸泡时间盐水浓度（%）

（分钟）

0101520253035

1595.5694.4410097.7898.8994.4493.33

3095.5694.4490.0094.4493.3397.7887.78

4591.1197.7896.6797.7892.2293.3392.22

6092.2296.6796.6797.7897.7896.6797.78

7587.7810097.7896.6797.7892.2292.22

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附录D

（资料性附录）

雄蚊规模化生产关键技术指标

（一）为验证生产雄蚊的关键技术指标如重量与混雌率，随机挑选700-1000只雄蚊，进行称重，记

录总重量。然后将雄蚊置于-20度冰箱，待雄蚊全部死亡后，进行计数，并根据蚊虫形态学特征，记录

混在雄蚊中雌蚊数量，分别计算单只雄蚊重量和混雌率。

单只雄蚊重量=总重量/总数量

混雌率（%）=雌蚊数量/总数量*100%

通过连续开展30批次实验，根据表D.1数据结果显示，单只白纹伊蚊雄蚊的平均重量区间为

1.0-1.4mg，多数雄蚊平均重量在1.1-1.3mg之间。混雌率控制相对较好，区间为0-0.23%。因此，为保证

稳定性与可靠性，我们将关键技术指标设定为雄蚊平均重量：1.0mg-1.4mg；雄蚊平均混雌率：0-0.3%。

表D.1白纹伊蚊规模化生产雄蚊的重量与混雌率

批次总数量总重量（mg）单只雄蚊重量（mg）雌蚊数量混雌率（%）

18639501.1000

28069701.2000

37919501.2000

48639501.1000

57469701.3000

67919501.2000

774610101.3500

87759801.2600

983410101.2100

1082210001.2210.12

119359801.0500

129109901.0900

137509801.3100

149669901.0200

158679901.1400

169029901.1000

177889901.2600

1884110001.1910.12

198319901.1900

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2091310301.1300

2184310201.2100

2288610101.1420.23

2377010001.3000.00

2475510001.3200.00

2580410001.2400.00

2682010001.2200.00

2774510001.3400.00

2880410301.2800.00

2985410201.1900.00

307829501.2100.00

（二）为验证生产雄蚊另一个关键技术指标飞行率，随机挑选700-1000只昏睡的雄蚊，放置在平皿

中，立刻转移至大笼子中（2m*2m*2m），然后将飞行测试筒（直径12cm和高度60cm）竖立在平皿

上，等待雄蚊复苏后自由飞离测试筒。30分钟后，用盖子盖住飞行测试筒，及时记录无法飞离测试筒的

雄蚊数量。飞行测试在室温条件下开展。

飞行率（%）=飞离测试筒雄蚊数量/总测试雄蚊数量*100%

通过连续开展15批次实验，根据表D.2数据结果显示，雄蚊的飞行率在88.1%-95.3%之间，因此，为

保证稳定性与可靠性，将飞行率的关键技术指标范围设定为85%-100%，即30分钟内飞离测试筒的只数

不低于测试数量的85%。

表D.2白纹伊蚊规模化生产雄蚊的飞行率

批次总测试雄蚊数量飞离测试筒雄蚊数量飞行率（%）

1100093493.4

295089293.9

3100090190.1

485779492.7

584878892.9

684878392.3

7100088188.1

885881895.3

995787291.1

10100095395.3

1190383091.9

1285278792.4

1395387892.1

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1490082191.2

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附录E

（资料性附录）

实验厂房安全生产管理条例

[1]厂房为密闭空间，在主要进出口处设置有缓冲间、风幕机，室内空调口、下水口全部添加筛网，

防止蚊虫逃逸风险。

[2]厂房内需安装新风系统，保证通风效果，降低异味产生。

[3]厂房内空调和新风系统，每6个月需进行深度清洁一次，保证有害生物不超标。

[4]厂房内消防安全指示必须明确，并需定期检查消防器械。

[5]厂房内严禁使用各类杀虫剂。

[6]每天及时做好卫生工作，保持厂房内干净、整洁。

[7]生产过程中产生的废弃物需按照生物安全和环保要求进行，如废水需经过过滤后才可以按照生

活污水排放；蚊虫需统一收集后放置在-20度冰箱过夜才能按照生物垃圾进行运输和处理。

[8]技术人员必须经过生物安全知识培训才能进入厂房。

[9]技术人员操作时必须穿着合适的工作服或者防护服，戴好口罩和防护帽，穿着劳保鞋等。

[10]生产过程中技术人员必须严格按照标准操作流程进行，科学、严谨、准确做好各项记录。

[11]具有发烧、咳嗽等症状技术人员不得进入厂房内。

[12]技术人员每年至少进行一次健康检查，取得健康合格证之后方可进入厂房开展工作。

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参考文献

[1]世界卫生组织和国际原子能机构.昆虫不育技术作为防治媒介伊蚊传播疾病的测试指导框架.日内

瓦:世界卫生组织和国际原子能机构;2020.许可:CCBY-NCSA3.0IGO.

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[2]朱春雨，李梅，张洪杰，辛正，张文君，曾晓芃、吴新平.农药登记用卫生杀虫剂室内试验试虫养

殖方法第3部分：白纹伊蚊。

[3]郑敏琳,张东京,DamiensDD,YamadaH,GillesJRL.登革热和基孔肯雅热媒介埃及伊蚊和白纹伊蚊

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Culicidae)-I-eggquantification.ParasitVectors,2015,8:42.

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工厂：白纹伊蚊幼虫饲养的方法优化.ParasitVectors,2017,10:569.

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ParasitVectors,2018,11:189.

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国同位素与辐射行业协会提出并归口。

本文件起草单位：中山大学、中大核昆生物技术（东莞）有限公司。

本文件主要起草人：。

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白纹伊蚊雄蚊规模化生产技术要求

1范围

本文件规定了白纹伊蚊（Aedesalbopictus）雄蚊规模化生产流程和技术要求，包括工厂设施与条件、

蚊品系建立、蚊卵孵化、幼虫饲养、雌雄分离、羽化、质量控制和关键技术指标等。

本文件适用于在昆虫不育技术框架下，在工厂条件下规模化生产白纹伊蚊雄蚊。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

NY/T1964.3-2010农药登记用卫生杀虫剂室内试验试虫养殖方法第3部分：白纹伊蚊

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

蚊品系mosquitostrain

白纹伊蚊。

3.2

扩繁inbreeding

在实验室和工厂条件下，严格按照蚊虫的生长发育过程进行饲养，扩大种群。

3.3

蚊卵孵化率egghatchrate

孵化出幼虫的数量与总孵化蚊卵数量的比值。

3.4

幼虫饲养larvalrearing

将刚孵化出来的一期幼虫转移到幼虫饲养盘中，按照幼虫的生长规律，每天给予幼虫一定量的食物。

幼虫时期约维持5～6天，经4次蜕皮后变成蚊蛹。

3.5

蚊蛹和幼虫收集collectionofmosquitopupaeandlarvae

1

T/CIRAXXXXX—2023

将饲养盘中的幼虫及蛹倒入筛网，过滤掉水体，将幼虫及蛹收集在手持筛网中。

3.6

盐水浸泡salinesoaking

将蚊蛹和幼虫混合物浸泡在一定浓度的盐水中，可以特异性杀死蚊幼虫而不影响蚊蛹。

3.7

蚊蛹雌雄分离sexseparation

基于白纹伊蚊的雌蛹、雄蛹体形大小差异，通过雌雄分离仪器后，可以将雌蛹、雄蛹分离出来，并

分类收集。

3.8

羽化eclosion

指蚊蛹蜕皮变成成蚊的过程。

3.9

混雌率femalecontaminationrate

经雌雄分离后，混在雄蚊中雌蚊的百分率。

3.10

飞行率flightabilityrate

雄蚊成蚊在30分钟内自由飞离飞行测试筒的百分率。

4仪器与材料

4.1电子天平

用于蚊卵称重，最小读数为0.0001g~0.00001g。

4.2孵化液

用于孵化蚊卵，称取0.9g的酵母蛋白胨粉加入至1000ml的纯水中，搅拌均匀并密封，使酵母蛋

白胨粉完全溶解，放置在28±2℃条件下发酵24h后使用。

4.3恒温培养箱

维持蚊卵在孵化过程中温度恒定。

4.4幼虫饲养盘

用于饲养幼虫的塑料盘，规格51.5×36.0×5.5cm。

4.5幼虫食物

用于饲养幼虫的混合食物，其主要成分包括高级鱼粉、虾粉、小型甲壳类动物、优质酵母、胎贝、

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小麦粉等。

4.6网筛

不锈钢，60目。

4.7雌雄分离器

由两块大小一致的玻璃板以一定的角度贴合组成，可依据雌雄蚊蛹体形大小差异来进行分离。

4.8羽化盒

用于盛放雄蛹，规格20×30×4cm。

4.9羽化笼

在框架上缚以蚊帐纱布制成的长方形纱布笼，规格30×30×90cm，网孔目数40目。

4.10飞行测试筒

用于测定雄蚊的飞行能力，圆筒形，材质透明，规格为直径12cm和高度60cm。

5生产条件

5.1蚊卵孵化条件

恒温培养箱温度29±1℃，孵化时间为1~1.5h。

5.2幼虫饲养间条件

温度27±2℃，相对湿度75±10%，光照周期12L:12D，幼虫饲养水温度：25±2℃。

5.3羽化间条件

温度26±2℃，相对湿度75±10%。

6生产流程

6.1蚊品系建立与扩繁

从野外采集蚊幼虫，在实验室饲养至成蚊，经形态学鉴定为白纹伊蚊后，进行混合饲养，建立