细胞融合与单克隆抗体

细胞融合与

单克隆抗体1第三章2第一节细胞融合

细胞融合(cellfusion)：又称体细胞杂交(somatichybridization)或细胞杂交(cellhybridization)，是指在外力（诱导剂或促融合剂）作用下，两个或两个以上的细胞或原生质体相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成同种多倍体或杂种细胞的现象。3细胞融合示意图4▶受精过程中的精卵融合、骨骼肌分化过程中多核肌细胞的形成等都是体内正常发育过程中的细胞融合现象。▶

体外培养系统中，Lambert等发现体外培养的肿瘤细胞会自发进行融合，融合率在10-2~10-6之间；1962年日本的Okada发现紫外线灭活的仙台病毒可诱发腹水瘤细胞相互融合产生杂交细胞。5一、细胞融合的基本技术

细胞融合实际上包含多个过程：首先是两个亲本细胞并列，以后膜组织局部破坏，最终形成包围融合细胞的连续胞膜。融合细胞表现的特征性变化，有膜成分和胞质成分的交流以及细胞内电导率的连续性。67细胞在融合过程中会发生下列主要变化：

呈致密状态的体细胞在促融合剂的作用下，细胞膜的性质发生变化；首先，出现细胞凝集现象；然后，部分凝集细胞之间的膜发生粘连；继而，融合形成多核细胞；

在培养过程中多核细胞又进行核的融合而成为单核的杂种细胞，而那些不能形成单核的融合细胞在培养过程中逐渐死亡。8

由于体外培养的细胞很少会发生自发融合（融合频率大约在10-4~10-6之间），因此要采用生物、化学或物理的方法人为地促使细胞融合。促细胞融合的方法有：病毒融合剂诱发细胞融合:

其中仙台病毒(HVJ)是最早用于动物细胞融合的融合剂。化学融合剂诱发细胞融合：

其中以聚乙二醇(PEG)最为常用。电融合法：

利用直流电脉冲诱导细胞间融合。91.病毒融合剂诱发细胞融合▶最早被采用的包括疱疹病毒、麻疹病毒和致瘤病毒等有膜病毒，但使用最广的是灭活的仙台病毒；▶病毒被膜含有膜蛋白，其表面有许多具神经氨酸酶和凝血活性的刺起，它们降解细胞膜上的糖蛋白，使细胞膜局部凝集在病毒周围，在高pH和Ca2+的条件下，膜上蛋白质分子的重新分布，使膜中脂类分子重排，从而打开质膜，导致细胞融合。10▶使用仙台病毒融合悬浮细胞时，将两种亲本细胞的悬液混合在一起离心，后将细胞沉淀悬于灭活的仙台病毒悬液中，使其进行融合，再洗去病毒，即可将融合的细胞加入选择培养液进行选择培养；▶融合贴壁细胞时，可将两亲本细胞混合培养，然后将病毒直接加入到混合培养物中，培养一定时间后加选择培养液进行选择；融合效率比悬浮细胞高。112.化学融合剂诱发细胞融合▶

主要包括聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇、聚甘油、溶血卵磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱等，其中以PEG最为常用。▶

PEG比病毒更易制备和控制、活性稳定、使用方便、而且促进细胞融合的能力更强。▶

PEG(polyethyleneglycol，PEG)是一种线形的多聚化合物，有多种不同的分子量，常用于细胞融合的PEG分子量在1000~4000，浓度在30~50%间。1213PEG诱导细胞融合的机理：

带有大量负电荷的PEG与水之间的氢键结合，使溶液中自由水消失，由于高度脱水引起细胞凝集，形成大小程度不同的凝集物。细胞发生皱缩并大大扭曲变形，邻近细胞之间紧密接触。

在相邻细胞膜紧密接触的部位，膜内蛋白质颗粒易位并凝聚。接着可能是相邻的剥去蛋白质的细胞膜间的脂质与脂质反应。继之，脂质分子的扰动和重排导致接触的细胞膜局部发生融合，形成很小的细胞质桥，之后细胞质桥逐渐扩大，两个细胞最终融合。141516

使用PEG时，通常通过离心使细胞紧密接触，然后在细胞沉淀中加入一定浓度的PEG，稍作用一段时间后(约30秒)后立即加液稀释以及时终止其作用。

使用化学促融剂时，Ca2+是必需的。Ca2+的作用机理，有的认为是Ca2+和PO43-形成不溶于水的配合物，成为细胞间的钙桥，由此引起融合。也有解释为Ca2+结合到带负电磷脂的电离基上，使磷脂分子在膜上相互分离，由此引起融合。PEG诱导鸡红细胞融合17PEG法植物原生质体的融合18图1烟草叶肉细胞和洋葱根尖细胞原生质体融合（40×）

图2烟草叶肉和洋葱根尖细胞原生质体的异源融合烟草洋葱3.电融合法电处理融合法是20世纪80年代发展起来的细胞融合技术，使融合率大为提高。电融合的原理：

当细胞处于强电场脉冲时，电脉冲诱发细胞膜结构紊乱，膜上会短暂地形成微膜孔，相邻两个细胞紧密排列部位的微孔就会有物质交流，形成细胞膜桥和细胞质桥，进而引起细胞融合产生杂交细胞。19实际操作：

先把待融合的细胞或原生质体混合，取样置于100V/cm的高频交流电场中，在非均匀交流电场中形成串珠状排列；

完整烟草原生质体原生质体成串20

再用1~5KV/cm直流电脉冲，微秒冲击细胞或原生质体的粘接点，细胞膜造成若干微孔，于是在膜之间形成通道，使细胞质得以交换；最后导致新的球状细胞的形成。21电融合法原生质体的融合结果22细胞核移植中的细胞融合23融合中融合后融合前电融合技术的扩展：▶离心电融合：利用离心使相邻细胞紧密接触以提高融合率。▶特异性电融合：利用生物素－抗生物素－抗原－抗体桥联，使带有生物素标记的骨髓瘤细胞与具有特异抗体的B细胞间特异性配对；或直接将抗原标记到骨髓瘤细胞表面，利用抗原抗体特异性结合使两种细胞特异性配对，然后用高压电脉冲诱导细胞融合。24▶细胞化学聚集电融合：采用低浓度PEG、PHA或伴刀豆蛋白A等使细胞聚集接触，然后用电脉冲诱导细胞融合。▶磁－电融合：利用磁场使已表面磁化的细胞相互聚集接触，然后在用电脉冲诱导融合。25电融合的优点：适应的细胞类型广；不需加外源因子，如PEG等；对细胞毒性相对低；融合率高，可达50%~80%；可用于细胞数量很少的融合；可定向诱导细胞融合;有利于融合细胞的挑选。26电融合的不利之处：融合仪价格昂贵；两细胞大小差异较大时，电压较难选择；融合膜成分不同时细胞较难融合27二、融合细胞的筛选▶在细胞融合过程中，不仅两类不同细胞间发生融合，两类亲本细胞也能发生相互融合现象。含两个不同亲本细胞核的细胞称异核体或异核细胞。由同一亲本细胞融合形成的细胞称同核体或同核细胞。▶利用PEG和仙台病毒进行融合时，细胞融合有一定的随机性，除形成杂交细胞外还会出现各亲本细胞自身融合，需对杂交细胞及时分离或筛选出来。28▶大部分多核细胞在一周内死亡，只有少数异核细胞、尤其双核异核细胞会存活。并通过有丝分裂使两个不同亲本细胞的染色体合并在一个细胞核中，形成杂交细胞。▶利用酶缺陷型、营养缺陷型、温度敏感性、形态和行为等标志，建立了多种选择选择系统，最常用的是酶缺陷型HAT选择培养法。291.HAT选择系统（酶缺陷型）HAT系统为次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)的缩写。它是根据嘌呤和嘧啶生物合成途径设计的分离杂种细胞特殊的培养基。30细胞内核苷酸的生物合成有两条途径：一条是主要途径，该途径中叶酸及其衍生物是必不可少的，氨基喋呤可抑制二氢叶酸还原酶活性，从而阻断细胞中DNA的合成；另外一条是补救途径，该途径需要两种酶参与。一种是HGPRT酶(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)，另一种酶是TK酶(胸腺嘧啶核苷激酶)。它们可以分别利用次黄嘌呤催化产生的肌苷酸及胸腺嘧啶核苷催化产生的脱氧胸苷来合成DNA。H、T为应急途径时提供外源核苷酸“前体”。3132氨基喋呤A核酸合成的主要合成：由核糖与磷酸合成5-磷酸核糖(R-5-P)，在磷酸核糖焦磷酸酶的催化下，与ATP发生作用生成1-焦磷酸-5-磷酸核糖(PRPP)，以后PRPP再经过一系列反应而生成次黄嘌呤核苷酸(IMP)。HGPRT酶(次黄嘌呤磷酸核糖转移酶)，催化次黄嘌呤产生肌苷酸▶在氨基喋呤存在时，阻断了核苷酸的从头合成IMP的途径，细胞只能通过HGPRT使次黄嘌呤酸化形成次黄苷酸，再依次转化为AMP及GMP，即通过“补救途径”依赖外源来合成核苷酸。因此，一个HGPRT－或TK－的细胞株不可能在含HAT的培养液中生长。但这样的细胞与能提供HGPRT或TK酶的细胞融合后，杂交细胞能在含HAT培养液中存活下来。33▶如果融合细胞的亲本之一是一个能在体外长期生存的骨髓瘤细胞系，而另一个亲本细胞是体外增殖能力有限的正常细胞。如将长期培养系突变为HGPRT或TK酶缺陷型的细胞系，在和正常细胞融合后，未经融合或自身融合的骨髓瘤细胞在HAT培养液中死亡；未融合或自身融合的正常细胞在体外生存能力有限最终也死亡。因此存活下来的只有融合细胞。342.基于营养缺陷型细胞所建立的筛选▶营养缺陷型是指一些细胞在合成某些营养物上有缺陷，如在合成氨基酸、碳水化合物、嘌呤、嘧啶或其他产物的能力上有缺陷，细胞在缺乏这些营养物的培养基中难以生存。▶不同营养缺陷型的细胞生成杂交细胞，这些细胞通过融合后基因互补得以在缺乏相应营养物的培养基中得以生存，而未融合细胞由于代谢受阻而死亡，由此可以将融合细胞分离出来。3536第二节单克隆抗体技术一、单克隆抗体基本原理：▶在体液免疫反应中，一个抗原分子上可能含有许多抗原决定簇(即表位)，每个淋巴细胞都会产生针对一个抗原决定簇的特异性抗体，因此，当用特定抗原免疫动物时，抗原上各抗原决定簇激发的一系列B细胞克隆所分泌的抗体在免疫动物血清中都混合在一起，这些由同一抗原诱导而产生的针对多个抗原决定簇的抗体即为多克隆抗体。37▶每一个B细胞只分泌产生一种抗体，若能把此B细胞由脾脏中挑出来，单独培养成细胞株，则可得单一种类的抗体，只会对一种抗原决定簇反应，其专一性极高。大量培养此细胞株，即可有质量一定、纯度均一的抗体，此即为单克隆抗体。但B细胞在体外增殖能力非常弱或不增殖，故无法获得大量的单克隆抗体。38▶骨髓瘤细胞易在培养基中生长；利用细胞融合法将骨髓瘤细胞永久生长的特性导入可生产有用抗体的B细胞中，则得到可在培养基中永久生长的B细胞株，此即杂交瘤细胞株。得到的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力，又具有肿瘤细胞在体外无限增殖的特点，可不断在细胞培养上清液中产生单抗。3940癌细胞可培养生长浆细胞单克隆抗体可产生有用抗体的淋巴细胞若与癌细胞融合，则形成稳定而可培养的细胞株。细胞融合融合瘤两组染色体混合在一起也可培养生长▶通过源自某一抗原决定簇的特异的B细胞克隆制备杂交瘤，在克隆杂交细胞后可以将针对该抗原决定簇的特异性单克隆抗体与其他抗体分离出来。这样就有可能分离针对同一分子、同一抗原、同一细胞上不同抗原决定簇的单克隆抗体。▶对某一抗原而言，可能存在多种单克隆抗体。41免疫动物脾细胞分离骨髓瘤细胞的准备细胞融合融合细胞的筛选与克隆单克隆抗体的大量制备42二、单克隆抗体技术：1.免疫动物：▶免疫动物的目的是希望B细胞在抗原刺激下分化增殖，使之有利于融合成杂交瘤细胞，尤其是能分泌特异性抗体的杂交瘤融合细胞频率增加。▶动物选择应与骨髓瘤细胞来源相同的同一品系动物，多为BALB/c小鼠。43▶抗原可分为可溶性抗原（蛋白质、核酸、多糖、多肽等）和颗粒性抗原（细胞、病毒、细菌等）。一般颗粒性抗原都有较强的抗原性，免疫时可不加佐剂；而可溶性抗原免疫时需加佐剂。初次免疫时一般用完全弗氏佐剂将抗原制成乳剂，而以后加强免疫时一般用不完全弗氏佐剂制成乳剂进行免疫。44▶不同抗原可经不同途径进行免疫，主要有腹腔注射、皮下淋巴样器官注射、静脉注射、脾内免疫等，最常用的途径是腹腔注射。45▶腹腔注射几乎适合于所有抗原体，特别适合于颗粒性抗原，经腹腔注射免疫时还可使用佐剂。▶皮下淋巴样器官注射多适用于可溶性抗原，多点注射有利于提高免疫效果。▶静脉注射不宜用于大颗粒性抗原，不宜作为初次免疫途径，也不宜加入佐剂，以免引起血栓或过敏反应。▶脾内免疫适于抗原量特别少的情况下使用，但脾内免疫多不产生明显的血清抗体，对免疫效果的判断有一定影响。4647加佐剂制成乳剂试采血2.脾细胞的分离:▶一般动物需经多次加强免疫后才能获得大量的分泌抗体的B细胞。在末次免疫后3～5天左右即可取脾脏或淋巴结细胞分离淋巴细胞(大多为B细胞)用于与骨髓癌细胞进行细胞融合。▶分离脾细胞可用脾内注射培养基轻轻挤压使淋巴细胞逸出的方法，也可用不锈钢网挤压法分离淋巴细胞。48▶分离的脾细胞中含有对抗原具有特异性的B细胞比例相对较少，可以对抗原特异性的B细胞进行富集。▶将抗原包被在培养板或其他基质上，然后与脾细胞结合，那些表面具有特异性抗体的B细胞与抗原结合使得B细胞黏附于培养板或基质上，轻轻洗涤除去不黏附的细胞，留下的细胞为具有特异性抗体的B细胞，用于细胞融合。49▶或将抗原直接交联到骨髓瘤细胞表面，再与脾细胞共温育，B细胞上特异性抗体与骨髓瘤细胞表明包被的抗原特异性结合而使两种细胞相互凝聚，然后再进行融合，提高特异性B细胞与骨髓瘤细胞的融合效率。503.

骨髓癌细胞的准备：▶融合亲本的骨髓瘤细胞，最好是同种的骨髓瘤细胞或浆细胞瘤系。这些细胞具有发达的内质网，能产生大量所需抗体，但必须是不能产生自身基因编码的抗体，否则杂交细胞会产生两种以上的抗体，无法得到单克隆抗体。▶瘤细胞系必须是对选择剂敏感的，融合后可以用药物(选择剂)把未融合的瘤细胞除去。常用来自BALB/c小鼠的653、Sp/20、NS-1等。514.细胞融合：▶

一般用PEG诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞间进行融合，操作在10min内完成；骨髓瘤细胞：脾细胞为1～2：10。▶可在融合前先富集对抗原具有特异性的B细胞，或将抗原直接交联到骨髓瘤细胞表面，再与脾细胞共温育，使具有产生特异抗体的B细胞与交联抗原的骨髓瘤细胞发生特异性结合，然后再进行融合，提高融合的特异性。▶融合后的细胞以1~2

106个细胞/ml的浓度接种到96或24孔板中培养。525.融合细胞的筛选与克隆：▶初步筛选：融合后马上以HAT培养，能活下来的大多为B细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞。未融合的骨髓瘤及骨髓瘤细胞间相互融合的细胞在HAT中因DNA合成抑制而死亡。未融合的B细胞及B细胞相互融合的细胞在体外培养因无法增殖会渐渐死去。53▶核酸的正常代谢途径若被氨基蝶呤(A)阻碍，可由补救途径利用次黄嘌呤(H)通过次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)催化产生肌苷酸(IMP)，并利用胸腺嘧啶核苷(T)通过胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化产生脱氧核苷酸来合成DNA。但骨髓瘤细胞缺乏TK及HGPRT两种酶，因此在A存在下无法生长；正常细胞(如B细胞)则可经由补救途径继续生长。54▶骨髓瘤细胞与正常的B细胞形成的杂交瘤，因正常细胞可以提供TK及HGPRT两酶，故在HAT培养基中可以正常生长。5556▶抗体专一性筛选：大致有第二抗体法、抗原结合法和功能筛选法三类，常用的方法是第二抗体法，包括固相放射免疫测定法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)和荧光活化细胞分类器法(FACS)等，通过这些方法挑出产生专一性抗体的集落。57▶细胞克隆化：通过抗体专一性挑出来的细胞株，也许仍含有两群以上的细胞，因此要进行单克隆化；一般采用有限稀释法或软琼脂法对杂交瘤细胞进行细胞克隆化，获得来自单个细胞的克隆；并对单个细胞生长出的群落，再次以ELISA筛选专一性抗体，获得可产生特异性抗体的单克隆细胞株。58▶得到稳定的抗体后，通常要再以ELISA方法检定该抗体的亚型是属于IgG,IgM或IgA等。免疫时间太短的，较可能取得IgM，但一般仍以IgG较多。596.单克隆抗体的大量制备：

单克隆抗体的大量制备可分为体内法和体外法。体内法：可把筛选出来的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔，诱导小鼠产生大量腹水，然后以针头收集所产生的腹水，通常每次可取得3～5mL左右；腹水中的抗体浓度高，可达到1～25

g/mL。其缺点是不适合大规模生产，腹水中有可能混有小鼠本身的抗体，给纯化抗体带来困难。体外法：把融合细胞在大型培养瓶中用无血清培养基进行培养，收集培养液上清即得抗体。缺点是抗体浓度低，仅为0.5～1

g/mL。60三、单克隆抗体的特性:▶单克隆抗体最重要的特性是其具有明确的特异性。每一个B细胞只分泌产生一种抗体，单克隆抗体来源于一个B细胞与骨髓瘤细胞融合后产生的单一种类的抗体，只会对一种抗原决定簇反应，因而其专一性极高。▶单克隆抗体的另一个特性是高亲和力。61

单克隆抗体也可能显示潜在的交叉反应。对于分子构造相似的不同抗原，由于它们含有共同或相似的抗原决定簇，所产生的单克隆抗体对这两种相似的抗原都会产生反应；因此在检测此类抗原时，其专一性不很理想，可能会出现假阳性，也称为交叉反应性。如对乳酸脱氢酶的单克隆抗体很可能会和异柠檬酸脱氢酶起交叉反应。62四、人源性单克隆抗体

和基因工程抗体63(一)、人源性单克隆抗体1.EB病毒转化技术：

利用类似于疱疹病毒的EB病毒在体外直接感染人外周血淋巴细胞（来源于淋巴结、扁桃体、脐带血、外周血等），使之转化获得永生能力得到人B淋巴细胞系，这些细胞可在体外分泌人抗体。64

技术同鼠－鼠杂交瘤，亲本骨髓瘤细胞主要有来自小鼠的骨髓瘤653、SP2/0、NS-1，来自大鼠的骨髓瘤Y3Ag1.2.3等；亲本B细胞来源于人外周血淋巴细胞、淋巴结细胞、脾细胞。但人－鼠杂交瘤的单克隆抗体分泌性能不稳定，多数情况下由于人染色体的丢失导致杂交瘤细胞失去分泌抗体的能力。652.人－鼠杂交瘤单克隆抗体：3.人－人杂交瘤单克隆抗体：

人－人杂交瘤操作步骤基本上与小鼠－小鼠杂交瘤技术相同，使用人的骨髓瘤细胞与人的B淋巴细胞融合；但可供利用的人骨髓瘤细胞种类非常有限，人的骨髓瘤细胞在融合率、非分泌型方面仍不及小鼠骨髓瘤细胞，而且人不能像小鼠那样进行高度免疫，B淋巴细胞常限于取自外周血(小鼠取自动物脾脏)，激活状态不适合做融合；故人－人杂交瘤细胞在融合、融合后的筛选以及融合细胞分泌抗体方面仍不理想。664.构建转人Ig基因组小鼠▶

将改造过的人的抗体基因组导入小鼠胚胎，得到在免疫后能产生人抗体的转基因小鼠。改造过的抗体除了构成抗原识别与抗原结合部位的三个互补决定区(CDR)是鼠源的以外，其余部分均是人源的。▶用人Ig基因组取代小鼠Ig基因组获得转基因小鼠，以后仅需免疫小鼠制作单克隆抗体，但获得的是人抗体而非小鼠抗体。该技术难度较大，但已有成功的报道。675.严重免疫缺陷小鼠制备人单克隆抗体：SCID小鼠具有严重免疫缺陷，对外源组织无免疫排斥反应，故这种小鼠可接受人体组织或器官移植，形成人－鼠嵌合体小鼠。将人免疫干细胞移植到SCID小鼠体内，SCID小鼠获得了人的免疫系统。这种小鼠可用任何抗原免疫，从激活的淋巴细胞中富集抗原特异性人源性B淋巴细胞，进一步进行细胞融合或制备抗体库。68(二)、基因工程抗体

基因工程抗体是利用基因工程的手段获得人源性抗体，主要包括以下几个方面：人－鼠嵌合抗体、改型抗体、抗体片段、噬菌体抗体文库技术、表位印迹选择技术等。69

抗体的重轻链构成的可变区(V区)与识别抗原有关，具有特异性；而恒定区(C区)与效应功能有关。人－鼠嵌合抗体就是通过人工改造使抗体的V区是鼠源的，而C区是人源的。如此改造的嵌合抗体保留了原来鼠源单克隆抗体的特异性和亲和力，人抗小鼠抗体反应(HAMA)也明显减弱。701.人－鼠嵌合抗体：人－鼠嵌合抗体的制备

712.改型抗体：

也称CDR移植。用鼠源的CDR(可变区中和抗原互补结合构成抗原结合部位的部分）取代人抗体中相应的CDR部位，使得抗体中除构成抗原结合部位的3个CDR是鼠源以外，其余均为人源。这种抗体在人体内免疫性大大降低。72改型抗体（CDR移植）73

Fab抗体：抗体Y形的两个臂称为Fab，它由可变区和小部分的恒定区组成，利用基因工程的方法构建具有可变区和小部分恒定区的Fab抗体，这样的抗体仍具有特异结合抗原的特性。

单链抗体(ScFv)：用短肽接头[常用(Gly4Ser)3]将重链可变区和轻链可变区相连，使其分子变小，更有利于穿透组织和清除，而且易构建表达；但亲和力会出现一定的下降。743.抗体片段：4.噬菌体抗体文库技术

体外建立一个相应于体内B细胞库的抗体库，从中筛选所需要的抗体。利用PCR扩增重链和轻链的cDNA，并插入到噬菌体外壳蛋白的编码基因中，然后感染E.coli，使抗体基因的表达产物和外壳蛋白一起融合展示在噬菌体表面，成为噬菌体抗体。通过固相化的抗原进行筛选，不能结合抗原的噬菌体被洗去，结合的噬菌体被洗脱下来再次感染细菌进行扩增，多次吸附－洗脱－扩增后可获得所要的抗原特异性的噬菌体抗体。这些抗体可以做到全部为人源的。7576五、单克隆抗体的应用

1.理论研究：▶构建B淋巴细胞杂交瘤可用于分析B细胞的多样性及其产生机理，并能分析免疫应答中抗体的多样性。▶利用单克隆抗体可进行表位分析：利用单克隆抗体的交叉反应，能帮助找出大分子之间在重要结构和生物学上的关系，因为对一种单克隆抗体起反应的几种大分子一定具有相同和相似的抗原决定簇。772.诊断试剂中的应用：▶单克隆抗体现已广泛应用于许多领域的诊断，特别是在疾病诊断上广泛应用。▶用针对肿瘤细胞表面特异抗原的单克隆抗体在帮助诊断癌症，如用癌胚抗原(CEA)的单克隆抗体在帮助诊断结肠癌和直肠癌，用前列腺酸性磷酸酶的单克隆抗体在帮助诊断前列腺癌等。▶用同位素标记的单克隆抗体用于肿瘤显像定位对诊断肿瘤患者是否有转移病灶具有重要意义。783.疾病治疗上的应用：▶在肿瘤、细菌、病毒、寄生虫和霉菌性疾病，自身免疫病、移植排斥以及解毒等方面，人们设想利用单克隆抗体进行治疗；其中在移植排斥和自身免疫病、细菌感染等方面已有成功的报道；▶单克隆抗体有可能作为体内应用的单克隆靶向制剂的载体，与同位素、药物、毒素、细胞因子等可杀死肿瘤细胞的物质交联，使这些物质能够准确到达肿瘤细胞所在的部位，针对性杀死肿瘤细胞达到治疗疾病的目的。7980本章小结细胞融合：又称体细胞杂交，是指在外力作用下，两个或两个以上的细胞或原生质体相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成同种多倍体或杂种细胞的现象。诱导细胞融合的方法主要有：病毒诱导法(如仙台病毒)、化学诱导法(如聚乙二醇)和电融合法(直流电脉冲)等方法。可以利用酶缺陷型、营养缺陷型、温度敏感性、形态和行为等标志，对融合细胞进行筛选。最常用的是酶缺陷型HAT选择培养法。81HAT选择培养法的原理是氨基喋呤(A)可阻断核苷酸的“从头合成”途径，细胞只能通过“补救途径”合成DNA。在“补救途径”中，细胞在HGPRT或TK激酶作用下，分别将利用次黄嘌呤(H)和