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实验七苯硫脲尝味的群体遗传学调查一、实验目的

1.测定人群中PTC尝味基因的表现型和基因型，理解孟德尔遗传基因型与表现型的对应关系。2．了解酶切扩增多态序列（又称为PCR-RFLP）技术的原理，学会用PCR-RFLP技术检测单核苷酸多态性（SNPs）。在分子水平上测定PTC尝味的基因型。二、实验原理苯硫脲（phenylthiocarbamide，PTC）是硫脲的苯基衍生物，为白色结晶粉末，因含有硫代酰胺基（N-C=S）官能团而有苦涩味。能尝出1/750,000-1/50,000PTC浓度溶液味道的人（苦涩味，少数人感到甜味）称为苯硫脲“尝味者”,只能尝出PTC浓度大于1/24,000溶液的味道的人称为苯硫脲“味盲者（nontaster）”。PTC尝味能力是受单基因控制的孟德尔遗传性状，是由位于7号染色体上的一种苦味味觉感受器基因TAS2R38决定的，属于常染色体不完全显性遗传。尝味者中显性基因T的纯合子(TT)能尝出1／750,000-1／6,000,000的PTC溶液的苦味，杂合子(Tt)只能尝出1／480,000-l／380,000的PTC溶液的苦味。人类的PTC尝味基因又名PTC、T2R38或T2R61。绝大多数尝味者与味盲者的区别在于三处单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphisms，SNPs)：一处是145位，味盲者为G145（编码丙氨酸ala），尝味者为C145（编码脯氨酸pro）；第二处是785位，味盲者为T785（编码缬氨酸val），尝味者为C785（编码丙氨酸ala）；第三处在886位，味盲者为A886（编码异亮氨酸ile），尝味者为G886（编码缬氨酸val）。因此味盲者PTC多肽中三处对应的氨基酸分别是ala49、val262和ile262，被称为AVI等位基因，而尝味者的三处是pro49、ala262和val262，被称为PAV等位基因。如图1所示。图1PTC尝味基因上的三个SNP位点 味盲者的PTC编码区有五个限制性内切酶Fnu4H1的识别位点（识别序列5’-GC↓NGC3’），如果是尝味者，则其第785位SNP恰好形成了一个额外的Fnu4H1识别位点（GCTGC）。因此可以利用这个SNP造成的限制性位点多态性，设计引物扩增包含785位SNP位点的PTCFnu4H1基因编码区的一部分，然后用Fnu4H1切割扩增产物，根据是否能

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