医学实验室校准与比对(浦春)

医学实验室校准与比对

皖南医学院弋矶山医院浦春

philipcpu@163.com卫生部规定卫生部《医疗机构临床实验室管理办法》第三章医疗机构临床实验室质量管理第二十四条医疗机构临床实验室应当保证检测系统的完整性和有效性，对需要校准的检验仪器、检验项目和对临床检验结果有影响的辅助设备定期进行校准。安徽省等级医院评审标准中相关条例二级医院评审标准三级医院评审标准ISO15189

5.3实验室设备

注：适用时，在本准则中实验室设备指仪器设备、参考物质、消耗品、试剂和分析系统。5.3.4应保持影响检验性能的每件设备的记录，至少应包括：

h)项中提到的性能记录应包括所有校准和/或验证报告/证明的复件，内容包括日期、时间、结果、调整、可接受标准以及下次校准和/或验证的日期，在两次维护/校准之间的核查频次.5.6检验程序的质量保证5.6.2适用且可能时，实验室应确定检验结果的不确定度。5.6.3应设计并实施测量系统校准和正确度验证计划，

a)参加适当的实验室比对计划CLIA’884、化验结果的比较如果实验室对某一项目的测定采用两种相似的方法，则所在组室的负责人必须每年两次对有关的化验结果进行比较工作，步骤如下：一、选择适当数量的标本二、确定可接受的标准三、进行两种方法测定结果的比较，如达不到标

准，要有解决措施四、记录全过程，并保存两年

校准比对一.几个基本概念

1.溯源

2.标准品

3.检测系统

4.不确定度

5.校准和校准确认

1.溯源溯源（traceability）:通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常是与国家标准或国际标准）联系起来的特性。［VIM：1993，定义6.10］溯源目的对病人的标本进行检验并报告可靠的结果。医学检验的传统：对收集的患者标本只做一次检验，就发出报告。因此，发出报告的可靠性必须体现两个基本要求:

精密度：重复性好；准确度：和参考方法具有可比性。溯源性临床检验始终以分析过程准确度度量结果的准确度。分析过程准确度：检测均值和作为真值的可接受值间的一致性。度量分析过程准确度的方法称方法学比较。溯源性在方法学比较中，“真值”即是参考方法对患者标本的检测结果。因此，常用检测系统对患者标本的检测结果，在计量单位相同的前提下，若能使结果的量值和参考方法的结果量值一致，说明结果准确。所以在溯源性和标准化中，传递结果可靠性的最重要方法为方法学比较。实现溯源性的必备条件

1．建立“公司一级参考品”，由公司选择国际上知名的参考实验室委托定值。

2.设立公司内部使用的“一级校准品”。

3.需要建立公司生产用的商品应用校准品（WorkingCalibrator），日常供应的校准品为商品校准品（BusinessCalibrator）。2.校准品

1．衡量一个检测系统（检验方法）的基本分析性能有4点：不精密度、不准确度、病人结果可报告范围、分析灵敏度。校准品2．标准品传统的临床检验，要使检验结果可靠或有依据，往往有一个标准品(Standard)。校准品

3．校准品和定值为了克服因纯标准液和病人样品间的基体差异，对检验结果的严重误差，20年前开始引用具有与病人样品基体相似的校准品替代标准品，用于日常工作。校准品使用了自动化分析仪，日常检验的精密度得到了显著的提高；在优良试剂盒的配合下，病人结果的可报告范围也可以满足临床要求；大多常规检验项目没有对极低浓度的临床要求。这样，结果的可靠性的关键是准确度。因此，实现新鲜病人标本结果的溯源性，成为使校准品值实现溯源性。常规临床化学测定的

校准品定值过程

SI制单位定义一级校准品二级校准品生产应用校准品

产品校准品

常规样品二级参考检测方法一级参考检测方法厂商选择的检测方法厂商常备的检测方法

用户常规的检测方法结果不确定度理解校准品可是，尽管校准品的主要来源是人的血清，为了使校准品内的一些分析物水平达到某个程度，而且形成稳定的产品，所有的校准品、控制品、室间调查品等都是处理过的血清。和原来的天然血清间又产生了新的基体差异。理解校准品使用校准品的目的，是使检测系统对病人标本检测结果，实现溯源性。校准品定值在系列标准化内容中，是一个最突出的课题。实现病人结果的溯源性，必须在校准品定值过程中，自始至终使用病人新鲜标本。坚持使用方法学比较实验，验证结果的可靠性。理解校准品新鲜病人标本是最佳校准品须明确的，所有用于检验中的检测方法、仪器、试剂等都是用来检测病人新鲜标本的，不是用来检测校准品这样的处理过样品。标准化1972年，由ISO出版T．R．B．Sanders主编的《标准化的目的与原理》一书对标准化下的定义是：“在所有有关方面的协作下，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程。”

标准品是标准化必备条件和临床检验的实践和需求结合起来，可以简单理解为：为了实现临床检验结果的溯源性，检测系统的生产厂商的所有努力，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程为标准化。

理解校准品如果先用公认的参考方法检测病人标本，再以具有参考值的病人标本去校准某检测系列（包括方法、试剂、仪器），此时该检测系列再检测其他新鲜病人标本时，被检测的病人标本结果的溯源性可上溯至公认的参考方法。也即用新鲜病人标本是校准检测系列的最佳校准品。由于新鲜病人标本的局限性，加工的稳定血清将成为商品化的校准品材料。

标准化的各要素校准品试剂分析仪检测系统的要素3.检测系统完成一个检验项目检测所涉及的仪器、试剂、校准品、操作程序、质量控制、保养计划等的组合，称为检测系统。若是手工操作，还必须包括具体的操作人员。检测系统仪器试剂校准品检测方法的分类检测方法分类大致上可以分为三类：确认方法（Definitivemethod）；参考方法（Referencemethod）；常规方法（Routinemethod）。参考方法示例总胆固醇测定确认方法为同位素稀释质谱（ID-MS）法；参考方法为硫磷铁法（皂化-抽提-浓硫酸、磷酸显色）；常规方法为酶法（胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、Trinder显色终点法）。美国NIST建立的标准参考品有：纯胆固醇SRM911；冻干人血清SRM909。常用的参考品代码1．CRM＝欧洲共同体认可的参考品，2．SRM＝美国的标准参考品3．ID-MS＝同位素稀释－质谱分析4．CDC=疾病控制中心5．NIBSC＝英国的国家生物标准和控制研究院通过方法学比较确定定值仪器校验公司组合的检测系统和初步校准品定值（·）方法学比较标准化过程信号Ctar为具有参考值血清在公司组合的检测系统上的检测结果。Cref为参考血清的参考值。校准品的溯源性依据（示例）火焰光度法

K〔钾（ISE）〕

SRM927ProteinTotal〔总蛋白〕

一级标准（称量法）

Lactate〔乳酸〕

WHO，SP1-01Apo-A1〔载脂蛋白A1〕

ID-MSAbellKendallCHOL〔胆固醇〕

电量滴定法Cl〔氯（ISE）〕

Doumas方法TBIL〔总胆红素〕

IFCC1983

手工方法

ALP〔碱性磷酸酶〕

CRM470Alb〔白蛋白（BCP）〕

参考方法或参考品项目（分析物）检测系统性能基本内容六大性能：不精密度（总不精密度）不准确度（方法学比较结果）病人结果可报告范围分析灵敏度（检测限）分析特异性参考范围4.不确定度不确定度(uncertaintyofameasurement)

：表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数。

1999年:我国发布《测量不确定度评定与表示》在国家标准GB/T15481-2000中，5.4.6明确规定：“校准实验室应具有并应用评定测量不确定度的程序。”不确定度可较好表明基准、校准的水平，产生测量不确定度的原因1.测量过程中随机效应及系统效应均会导致测量不确定度，数据处理中的修约也会导致不确定度。2.测量结果的不确定度反映了对被测量之值的认识不足，借助于已查明的系统效应对观测结果进行修正后，所得到的只是被测量的估计值，而修正值的不确定度以及随机效应导致的不确定度依然存在。测量不确定度应用批内变异【CV(w)】批间变异【CV（b）】偏倚变异【CV(bias)】不确定度【CV(syst)】其他原因的不确定【CV(oth)】

U=（√CV(w)2+CV（b）2+CV(syst)2+CV(oth)2

）×25.校准和校准确认

校准:是检测和调整仪器或检测系统读数的过程,以建立检测分析物的仪器测量和分析物的实际浓度间的关系.

校准确认:是对已知浓度的材料,和患者标本一样的方式作检测,用于确保检测系统在可报告范围内能准确地检测患者样品.--择自CLIA’88

校准品试剂仪器病人标本检验结果校准按检测程序检测具溯源性和可比性

二.校准

1.计量部门进行的校准检测

强制性执行，每年一次；包括比色计、分析天平、酶标仪、PH仪等。

2.厂家提供的校准举例说明

---SysmaxUF-1000i仪器校准报告SysmaxUF-1000i仪器校准流程进行仪器环境确认,包含温度,湿度，接入电压及试剂的有效性进行测量项目(RBC、WBC、EC、CAST、BACT)本底确认,本底符合仪器要求进行仪器携带污染率试验使用仪器配套校准品(calibrator)进行仪器性能校准,包含仪器总计数,灵敏度,电导率;各项参数若有偏移则进行调整使用仪器配套质控(UFⅡCONTROL-H,UFⅡCONTROL-L)进行校准后的验证试验,符合质控要求取新鲜尿液标本进行测量项目的重复性试验,各项CV符合仪器要求SysmaxUF-1000i校准内容

每年校准2次（工程师负责校准）。仪器的校准条件：排除各种原因后质控未能通过，主要部件更换后或仪器远距离搬动，或严重故障须重新校准。校准验证：校准后即做质控，结果符合质控范围，校准后及时做精密度测试和线性测试。精密度：取两个不同值标本，每份连续测11次结果，去除第一次结果进行统计。要求符合精密度标准。线性：分别取富含白细胞和红细胞的尿液,高、中、低值三份用改良牛鲍氏计数池计数20次取均值作为理论值。各稀释尿样（鞘液稀释）用UF-1000i各计数20次，取均值做回归分析。结果判断：b要在1.00±0.1。校准结果1.测试条件实验室环境环境温度湿度电源

25℃41%220VAC

试剂序号试剂名称代号试剂批号失效期1UFⅡSEATHUTSA80062009/06/112UFⅡSEARCH（SED）USSA80022009/03/273UFⅡSEARCH（BAC）USBA80022009-030264UFⅡPACK（SED）UPSA80022009/04/025UFⅡPACK（BAC）UPBA80022009/04/02校准结果

试验材料校准物:UFⅡCONTROL-LLOTNO:YA8007EXP.DATE:2009-01-08参数RBCWBCECCASTBACTConductivity单位（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）Ms/cm测试值38.940.99.95.21161.68.5靶值40.839.79.35.65198.08.5范围20.419.95.64.5259.41.7结论合格合格合格合格合格合格校准结果2.空白

参数RBCWBCECCASTBACT单位（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）B010.00.00.00.000.0判定标准≤1110.21结论合格合格合格合格合格参数SEDTotalCountBACTotalCount单位countcountB011334判定标准≤3003000结论合格合格校准结果

3.重复性（变异系数

CV）试验材料新鲜尿标本

参数RBCWBCECCASTBACT单位（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）1199.8817.485.121.82706.2……..…….………..……..10190.6802.281.122.79722.4MEAN197.52813.7078.5922.576712.10SD5.19812.0774.0951.53211.911CV2.63%1.48%5.21%6.79%1.67%判定标准CV≤10.0%10.0%30.0%40.0%10.0%结论合格合格合格合格合格校准结果4.携带污染

试验方案说明取高浓度尿液样本（RBC>5000count/Ul,BACT>10000count/uL）.混合均匀后连续测定三次，测定值分别为H1、H2、H3；再取低浓度尿液样本，连续测定3次，测定值分别为L1、L2、L3。按公式计算携带污染率。携带污染率

=（L1－L3）×100%

（H3－L3）

试验日期

试验材料新鲜尿标本

参数RBCBACT

单位（/uL）（/uL）

H15,405.510,298.9

H25,418.214,763.6

H35,437.313,236.2

L13.336.6

L21.938.5

L31.532.5

携带污染率0.03%0.03%

要求≤0.1%0.05%

结论合格合格

校准结果

5.校准校准物检测结果及计算校准系数参数SEDParticleBACParticleConductivity单位（/uL）（/uL）Ms/cm定值817.5817.536.21811.0823.636.72827.9817.836.23821.4801.636.24827.6833.637.25824.4801.537.56806.0804.436.9MEAN(均值)819.72813.7536.78SD9.14313.3610.527CV1.12%1.64%1.43%偏差（%）

（均值-定值）100/定值0.27%0.46%1.61%偏差要求≤5.00%5.00%3.00%结论(是否需要校准)不需校准不需校准不需校准校准系数（定值/均值）99.73%100.46%

仪器原有校准系数94.692Y=0.0212X-41.4242新的校准系数

校准结果6.校准仪器的灵敏度参数试验方案说明做校准时灵敏度参数应该符合校正表中的要求试验材料校准物:UFⅡCALIBRATORLOTNO:A8007EXP.DATE:2008-11-08参数S-FSCS-FSCWS-FLHS-FLLS-SSCB-FSCB-FLH单位chchchchchchch测试值108.4025.7017.2130.820.890.4144.7低限107.9025.1016.3123.120.389.5111.0高限114.5026.7020.2166.524.895.0150.2结论合格合格合格合格合格合格合格校准结果7.仪器校正后的验证

参数RBCWBCECCASTBACTConductivity单位（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）Ms/cm测试值197.6819.373.821.10754.835.9靶值200.1824.781.619.46821.336.5范围40.0164.940.89.73205.33.7结论合格合格合格合格合格合格2.自建检测系统校准（1）校准前准备选择性能良好的试剂盒实验室挑选适合自己仪器的产品实验室应建立完整和详细的操作规程确定实验室溯源性的目标实验室校准的目标向较为可靠检测系统靠拢以患者的新鲜标本为实验对象以方法学比较为验证手段实现自建检测系统溯源性的步骤（2）确定自建系统为实验室实现溯源性的目标对仪器进行一次完整的保养，确认仪器处于良好状态。确保用于仪器上的水质优良。所有实验过程都必须有分析过程的质量控制。使用自选试剂盒，在仪器上进行精密度实验。一般的检验项目以CLIA’88允许误差的1/4为指标(不能超出根据生物学变异确定的不精密度要求)。如果为新选择的试剂盒，进行批内和天间的两个精密度实验。对自选试剂盒和仪器组合的可报告范围的评估。进行初步的方法学比较；相关系数超过0.975，说明两方法间的系统误差可以用得到的直线回归式进行分析。在为自建检测系统确定校准关系时，希望方法学比较的截距要小，若方法学比较结果不仅截距小、斜率极其接近1，这意味着实验室自建检测系统对标本的检测结果，和溯源目标检测系统对标本的检测结果非常接近。以患者标本为临时校准品，对自建系统的校准，在以上实验的基础上，已经证明。自建系统的精密度，可报告范围符合要求，方法学比较结果实现自建检测系统溯源性的步骤寻求稳定校准品是保持使用自建检测系统对患者标本检测结果可以溯源至目标检测系统关键。购买一批质量好、知名度高的公司冻干控制品，最好能考虑使用1~2年的量。购买的控制品，不采用原公司的定值。按照使用要求，复溶控制品。将控制品当作一个样品。在经血清校准后的自建系统上进行多次检测(至少3次以上)，取均值。在保持原自建检测系统上的仪器、试剂盒和操作程序不变的情况下，以该控制品的检测均值为“校准值”；然后,再对一批患者血清(内含分析物量分布于整个可报告的范围)进行经血清校准后的自建系统和可溯源系统方法学比较实验。若能保持所有标本结果差异在CLIA’88允许误差的1/4内，说明“自建校准品”对“自建检测系统校准成功。自此，实验室建立了自己的完整检测系统。三.比对

【目的】：

在目标检测系统上定值后校准自建检测系统，经校准验证和方法比对，实现自建检测系统与目标系统检测结果的可比性。1.比对程序1.根据各检测系统的情况，确定性能良好的，有溯源性的检测系统为目标检测系统。2.实验前对仪器进行常规维护与保养，各实验室按常规方法进行校准和质控。3.标本的收集、处理：⑴要求使用当天的标本。每份应有足够的量，不够时可以将含量相近的两份标本混合，不能多于二份。⑵尽可能使50%的实验标本分析物的含量在参考区间外、可报告范围内，各个标本分析物含量越宽越好。⑶不要使用对任何一方法有干扰的标本。4.测定：⑴

由专人至少收集20份标本进行一致性的比较。⑵每份标本进行双份检测，在1天或3~5天完成检测，开始检测时间应相近，且都应在2小时内检测完毕。⑶标本按1、2、3、4、5、6顺序排列先测一遍，然后将顺序倒过来做第二次检测得出数据。⑷定期实施比对（每季度一次），及时解决比对中出现的问题，并保留记录。比对分析的数据处理1.数据收集与处理。2.不采用已明确有人为误差的结果。3.按EP9-A文件进行方法间离群值检查。将每一个标本两方法的前后2个测定值一一对应，求出对应值之间的差值和所有差值的平均值，以差值的平均值的4倍为判断限，两方法间标本的成