土壤外切-β-14-葡聚糖酶纤维二糖苷酶（S-C1）活性测定试剂盒说明书_第1页
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第第页土壤外切—β—1，4—葡聚糖酶/纤维二糖苷酶（S—C1）活性测定试剂盒说明书土壤外切β1，4葡聚糖酶/纤维二糖苷酶（SC1）活性测定试剂盒说明书微量法100管/48样注意：正式测定前务必取23个预期差别较大的样本做猜测定测定意义：C1（EC3.2.1.91）存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，C1催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。测定原理：采用3,5—二硝基水杨酸法测定SC1催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。需自备的仪器和用品：酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的构成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保管；试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保管；试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保管；样品测定的准备：称取约0.1g新鲜土样或风干土样，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，室温振荡提取30min，然后10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调整波长至540nm，蒸馏水调零。2、加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：试剂名称（μL）测定管对照管样本1010试剂一100蒸馏水100混匀，37℃准确水浴2h试剂二200200混匀，90℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，测540nm下吸光值A，计算ΔA=A测定管A对照管。每个测定管需设一个对照管。SC1活性计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准条件下测定回归方程为y=6.4078x0.0673；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。单位的定义：每g土样每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。SC1活力（μg/min/g鲜重）=[1000×（ΔA+0.0673）÷6.4078×V反总]÷（W×V样÷V样总）÷T=14.305×（ΔA+0.0673）÷W1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反总：反应体系总体积，0.11mL；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，120min；W：样本质量，g；b.用96孔板测定的计算公式如下标准条件下测定回归方程为y=3.2039x0.0673；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。单位的定义：每g组织每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。SC1活力（μg/min/g鲜重）=[1000×（ΔA+0.0673）÷3.2039×V反总]÷（W×V样÷V样总）÷T=28.61×（ΔA+0.0673）÷W1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反总：反应体系总体积，0.11mL

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