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第第页人前列腺素E2（PGE2）ELISA试剂盒说明书原理本试验采用双抗体夹心ABCELISA法。用抗人PGE2单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的PGE2与单抗结合，加入生物素化的抗人PGE2，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最终加停止液硫酸，在450nm处测OD值，PGE2浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中PGE2浓度。试剂盒构成（28℃保管）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：40ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml第一抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml停止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（肝素抗凝）、细胞培养上清液、尿液等尽早检测，28℃保管48小时；更长时间须冷冻（20℃或70℃）保管，避开反复冻融。2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成40ng/ml的溶液。设标准管8管，第一管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入40ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤46次，向滤纸上印干。3.每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul停止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与推断1.全部OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.依据样品OD值在该曲线图上查出相应PGE2含量即可。试剂盒性能1.灵敏度：最小的PGE2检测浓度小于30pg/ml。2

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