应用指南 - 使用CTS Rotea和Xenon系统开发工艺灵活、模块化细胞疗法开发工艺

应用指南|CTSRotea逆流离毒载体的方式进行基因递送已经应用了很长一段时间，但非病毒为了更好地服务于细胞治疗行业，ThermoFisherScientific创建了工艺灵活的、模块化系统，可轻松应用于现有工作流程。近期推出了两种系统，即Gibco™CTS™Rotea™逆流离心系统和Gibco™CTS™Xenon™电转染系统。这两种系统均可单独实现封闭式生产过程，分别用于细胞的洗涤和浓缩以及遗传物质的非病毒递送。其出现代表着细胞治疗产品生产发展取得了重要进Theworldleaderinservingscience材料和方法PBMC分离ACK裂解缓冲液裂解红细胞（RBC然后使用CTSRotea系培养基使用Gibco™CTS™Dynabea重组人IL-2蛋白和Gibco™CTS™免疫细胞血清替代物的Gibco™CTS™OpTmizer™T细胞扩增无血清培养基中，在2Gibco™CTS™DynaMag™磁力架对T细Gibco™CTS™Xenon™基因组编辑缓冲液中洗涤并浓缩（缓冲液gibco2电转染前在CTS电转染前在CTSRotea系统上进行缓冲液交换使用CTSRotea系统进行缓冲液交换时，用洗涤缓冲液预充BWaste,0mLbufer,100mLACH10203456预充管路C7809J-KJ-KJ-KJ-KJ-K3头腔室对细胞进行平行电转染。各自的有效载荷和电转染条件见4CART细胞扩增6个细胞/mL的密度在6孔板中用完全培养基接电转染完成3天后，使用Invitrogen™eBioscience™TCRα/βInvitrogen™CD8mAb（APC-Cyanine7偶联）和Invitrogen™SYTOX™Red死细胞染色剂作为细胞活力染料，对T细胞进行染™eBioscience™CD69mAb（APC偶联）和Invitrogen™eBioscience™CD25mAb（PE偶联）对TTCR阴性细胞百分比决定，敲入效率由GFP阳性细胞的百分比决5CD4/CD8比率和CD69/CD25活化标记物的表型特征：表型分析显示了CD4/CD8比率的预期值，以及活化2天和活化3天无显著差异（图2表明活化2天或活化3天均可得到充分活化的CD4/电转染与CTSXenon系统电转染、手动进行缓冲液交换与CTS电转染完成3天后，测定所有检测条件下的细胞活性：活化2天方案和活化3天方案、手动进行缓冲液交换与CTSRotea系统进行缓冲液交换，以及Neon系统电转染与CTSXenon系统电转染。对于活化2天和活化3天方案，还在去磁珠和缓冲液交换后测定了92.8 92.8 094.894.488.588.5 96.0 95.9 0 90.3 89.5 90.3 89.5 094.5 93.2 93.2092.596.6093.095.889.793.389.389.30 93.2 93.2 89.789.788.888.86除活化2天方案和活化3天方案、手动进行缓冲液交换与CTSRotea系统流程进行缓冲液交换，以及Neon系统电转染与CTS5004003000 0 96.10 96.1 86.0 89.493.893.8%TCRαβGFP0 92.6 0 92.6 90.7 83.392.390.888.393.0 092.390.888.393.0 0086.175.0 086.175.0 80.4090.5 96.8 96.890.7 96.3 96.30 94.30 94.3 95.5 93.2)7)7850.6891388.2cells图4.电转染3天后的电转染效率。各条下方的数值代表TCRαβ–GFP+细胞；上方的数值代表所有编辑的细胞（TCRαβ-GFP+和TCRαβ–GFP–）。7无电转染对照相比，在所有条件下均可观察到良好的细胞活性值得注意的是，本应用指南完成的工作包括封闭式缓冲液交换和电转染步骤。工作流程的其他步骤保持开放，包括细胞培养和扩4004004006cells)6cells)300 细胞和基因治疗工作流程包含大量过程步骤和变量，因此其优化动化CTSRotea系统进行缓冲液交换与开放式手动进行缓冲液交胞治疗产品生产工作流程中的污染，是致力于创建封闭式细胞治