细菌对抗菌药物敏感试验

细菌对抗菌药物敏感试验

antimicrobialsuceptibilitytest

AST第一节抗菌药物一.抗菌药物能抑制或杀死微生物有一定的毒副作用有一定的抗菌谱细菌可对其产生耐药性变异抗生素:

ß-内酰胺类抗生素:青霉素,头孢菌素,其他ß-内酰胺类抗生素,

ß-内酰胺类酶抑制剂氨基糖苷类大环内酯类二.常用抗菌药物种类抗菌药物磺胺药喹诺酮类呋喃类甲硝唑第二节耐药性细菌不能被常规治疗剂量达到的药物血浓度杀死或抑制称药浓度MIC不同菌株血药浓度治疗剂量中毒剂量耐药株敏感株一.概述耐药性形成是因为细菌的基因突变或获得了耐药基因耐药性可在株间,种间传递抗菌药物仅对耐药菌起选择作用细菌对抗菌药物的耐药性可以是多重的细菌对结构相似药物间,可有交叉耐药性二.耐药性产生机制ß-内酰胺类酶形成:破坏ß-内酰胺类药物,有多种钝化酶:使抗生素失活,如氨基糖苷类靶位改变:形成新的,低亲合力的青霉素结合蛋白渗透障碍或外排作用:使药物不易进入菌细胞内代谢途径改变:绕过药物作用环节第三节细菌对抗菌药物的敏感性试验一.药敏试验目的指导被试患者用药某一地区的耐药性调查鉴定细菌新药评价二.药敏试验原理将细菌接种在无被测药拮抗剂并能提供细菌良好生长的环境中加入一定量抗菌药物观察细菌生长被抑制情况三.被测药物选择按菌种和抗菌谱同类药物选一个按医生要求按医院感染科规定四.药敏试验方法

1.稀释法可在液体或固体培养基中进行用培养基对抗菌药物作一系列稀释加入一定量细菌孵育后读取MIC转种未生长管并计数细菌后读取MBC药502512.56.33.21.60.80.40加入等量细菌,孵育18-24h结果－－－－+++++

12345678C计数0105368760/ml48万*

MIC6.3μg/mlMBC12.5μg/ml(＜0.1%×480000＝480)*接种时菌数μg/ml药502512.56.3μg/ml

3.21.60.8C

生长MIC

1＜0.82=6.33=254=12.55=1.6μg/ml12345也可用单一浓度进行。如对甲氧西林,万古霉素等耐药性测定或用两个浓度进行,如区分中介和耐药浓度也可用机器进行附:血清抗菌活性测定将患者血清作系列稀释测自身感染部位分离出的病原菌的最低抑菌和杀菌效价2.纸片琼脂扩散法(K-B法)以一定量细菌在平板表面紧密接种,让其长成均匀的菌苔置数张含定量抗菌药物的纸片于其上,其间需有一定间距孵育后测定抑菌环直径抑菌环大小和MIC的高低呈负相关MIC渐高抑菌环渐大血药浓度耐药敏感附:血清抗菌药物浓度测定按纸片琼脂扩散法进行用不同量抗菌药物的抑菌环直径对浓度作标准曲线测定血清抑菌环后通过标准曲线查到浓度渐高抑菌环渐大药浓度3.E试验结合稀释法与纸片琼脂扩散法纸条上有药物的浓度梯度在纸条与抑菌环交界处读取抑菌浓度(IC)IC抑菌环药物扩散范围含药纸条药浓度4.联合抗菌试验观察两种抗菌药物间的相互关系:协同,相加,无关,拮抗可用两药分别稀释后混合的方法法测MIC或MBC读取FIC或用临近置两药纸片的琼脂扩散法进行,观察抑菌圈的形状FIC的读取

A药联合时的MICB药联合时的MICFIC=+A药单测时的MICB药单测时的MIC<0.5协同0.5~1相加1~2无关>2拮抗6.双相纸片试验用于检测ESBL(extendedspectrumβlactam)该酶为克拉维酸抑制按纸片琼脂扩散法进行,中心贴阿莫西林/克拉维酸,周边贴头孢曲松等作为指示孵育后,如抑菌环向中心扩大,为阳性也可分别测量抑菌环,相差5mm以上为阳性5.ß-内酰胺类酶检测碘淀粉测定法:被测菌置青霉素溶液中,室温30min,加淀粉和碘液,呈蓝色,震摇,若酶