(高清版)GB∕T 39228-2020 土壤微生物生物量的测定 熏蒸提权

Part2:Fumigation-ex国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会I本标准使用翻译法等同采用ISO14240-2:1997《土壤质量土壤微生物生物量的测定第2部分：b)将公式(1)中有机碳浓度C改为了C₀;1微生物生物量的方法。本标准仅描述了可提取有机碳含量的测定，但该方法同的微生物氮含量及微生物茚三酮反应氮含量。本标准适用于土壤pH值范围较大的好氧和厌氧(渍水、水田)土壤微生物生物量的测定。本标准也适用于含易分解有机底物和硫酸钾溶液过饱和土壤中微生下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引ISO10381-6:1993土壤质量采样第6部分：实验室测定好氧微生物过程用土壤的采集、处理及贮存指南(Soilquality—Sample-Part6:Guidanceonthecollection,handingandsfortheassessmentofaerobicmicrobialprocessesinthelaboISO10694:1995土壤质量土壤有机质和总碳的测定干烧法(元素分析)[Soilquality-De-terminationoforganicandtotalcarbonafterdrycombustion(elementaISO11465:1993土壤质量土壤干重和含水量的测定重量法(Soilquality—Determinationofdrymatterandwatercontentonamassbasis—Gravimetricmethod)4原理2GB/T39228—2020/ISO1424量提取有机碳并测定，根据有机碳含量的差值，计算土壤微生物生物量碳。5材料和试剂5.1土壤样品应尽量按照ISO10381-6的规定采集、处理及贮存土壤样品。如果要求土壤质量均匀，按照40%左右的田间持水量将土壤样品过筛。按照附录A的规定测定土壤田间持水量。样品含水量应高于30%田间持水量，确保氨仿均匀分布和有效熏蒸。同时，要注意避免湿土涂抹和压实。渍水土壤分析前无需干燥处理。应使用公认的分析纯试剂，包括：5.2.1硅脂(中等黏度)5.2.2去乙醇氯仿5.2.4碱石灰。6仪器6.1室温或恒温培养室，温度维持在25℃±2C。6.2内置防爆干燥器。6.4玻璃烧杯。6.5皮氏培养皿。6.6聚乙烯塑料瓶(250mL)。6.7抽真空装置(水泵或电泵)。6.8水平或翻转式振荡器。6.9冰箱(-15℃~-20℃)。6.10防爆沸颗粒。7熏蒸和浸提7.1熏蒸将湿润滤纸(6.3)放置于干燥器(6.2)中，以备土壤样品熏蒸。称取相当于25g~50g烘干质量的新鲜样品(5.1)至少3份，分别放到不同的玻璃烧杯(6.4)或皮式培养皿(6.5)中，再将其置于真空干燥器中。真空干燥器中放置盛有25mL去乙醇氯仿(5.2.2)的烧杯一个，烧杯内放入少量防爆沸颗粒(6.10),同时放入一小烧杯碱石灰(5.2.4)溶液。抽真空待氯仿剧烈沸腾约2min,关闭干燥器阀门，置于25℃±2℃的培养室箱(6.1)中黑暗条件下培养22h～24h。3量超过20%时(按照ISO10694规定测量),可扩大土壤与浸提液比例至1:4以上(对于有机质含量超95%的土壤，如枯枝落叶层土壤样品，该比例最大可达1:30)以提高浸提效率。记录所用土壤的质量。器(6.8)按200r/min振荡30min,或用翻转式振荡器60r/min振荡45min,再用滤纸(6.3)过滤浸提应迅速测定滤液。若不立即分析，则将熏蒸和未熏蒸的土壤浸提液保存在一15℃~-20℃的冰8浸提液中碳的测定算需乘一个转换系数，该系数由已知细胞质量与熏蒸提取碳的相关分析试验8.1.2.1重铬酸钾，c(K₂Cr₂O₇)=0.06674吸取8mL的过滤浸提液(7.2)(Ps)于圆底烧瓶(8.1.3.2)中，用移液管(8.1.3.4)加入2mL的重铬酸钾(8.1.2.1)(Pp)和15mL的酸混合液(8.1,2.6)。缓慢回流(8.1.3.1)混合液30min,加入20mL~25mL水使其冷却和稀释(通过冷凝器加入来冲洗)。用同样的方法消化含8mL硫酸钾溶液(5.2.3)的两个空白样。定过剩的重铬酸钾。依据公式(1)和公式(2)计算有机碳含量：式中：Vh——回流空白消耗的滴定液(8.1.2.4)体积，单位为毫升(mL);Vc—未回流空白消耗的滴定液(Pp——所添加重铬酸钾溶液的体积，单位为毫升(mL)E——有机碳转换为CO₂的转换系数，取值3;式中：c—样品有机碳含量(以烘干土计),单位为微克每克(pg/g);Px——浸提液的质量，单位为克(g);Dw——样晶烘干重(按照ISO11465的标准测定),单位为克(g);微生物生物量碳B:的计算按照公式(3):式中：Ec=熏蒸土壤样品浸提的有机碳含量C=未熏蒸主壤样品浸提的有机碳含量C;8.2微生物生物量碳——碳光谱分析法用过硫酸钾(K₂S₂Og)溶液将浸提的有机碳氧化为二氧化碳，用红外(IR)或紫外(UV)光谱分析测定。8.2.2.1过硫酸钾(K₂S₂Og)。58.2.2.3聚偏磷酸钠[(NaPO₃),],超级纯。将20g过硫酸钾(8.2.2.1)溶于900mL蒸馏水中，再用磷酸(8.2.2.2)调节至pH2,最后用蒸馏水定容至1000mL。8.2.2.5聚偏磷酸钠试剂。将50g聚偏磷酸钠(8.2.2.3)溶于900mL蒸馏水中，再用磷酸(8.2.2.2)酸化至pH2,最后用蒸馏水定容至1000mL。8.2.3.1自动碳分析仪(红外检测法)或连续流动分析仪(比色法检测)本标准此部分目的是基于紫外光活化过硫酸盐光氧化有机碳测定微生物生物量碳。取5mL硫酸钾土壤浸提液(7.2)和5mL聚偏磷酸钠溶液(8.2.2.5)混合均匀，完全溶解土壤浸提液中CaSO₄沉淀。将过硫酸钾试剂(8.2.2.40自动送入紫外氧化室，由紫外光活化将有机碳氧化为CO₂。用红外线吸收或紫外光谱测定CO,浓度。8.2.5结果计算按照公式(4)计算土壤有机碳含量(C):式中：Da磷酸钠稀释空白样品的体积，单位为毫升(mL);Dw——见公式(2);Sw——见公式(2)。按照公式(5)计算生物量Bc:式中：Ec=熏蒸土壤样品浸提的有机碳含量C一未熏蒸土壤样品浸提的有机碳含量C;997(规范性附录)土壤田间持水量测定A.1范围本方法适用于精度要求不高的土壤持水量测定。A.2原理底部带孔圆筒用土壤部分填充，加盖并置于水中浸泡后，将吸水后的土壤称重，然后在105℃烘干至恒重后再称重。A.3仪器A.3.4烘箱，能够保持105℃±2℃的温度。A.4操作步骤用滤纸覆盖带孔的圆筒(A.3.1)底部并称重。圆筒用土壤部分填充，并加盖。室温下，在水浴中浸泡圆筒2h,再保持该水位1h后，从水中取出圆筒放置在有砂子的托盘(A.3.3)上，根据土壤类型的差A.5计算持水量(WHC)的计算，用%表达，如式(A.1):S——水饱和土壤十圆筒十滤纸质量，单位为克(g);D——烘干土壤质量，单位为克(g)。A.6结果表达土壤持水量(WHC)按占烘干土壤质量的百分比表达。8B.1试剂B.2其他仪器B.2.1离心机。提取，以200r/min充分振荡20min后过筛(耕作土过2mm筛，草地土过3mm筛)的硫酸钾溶液(B.1.1)仔细冲洗筛上根(和小石头),直至筛上无土壤，活根和碎石烘干并称重。土壤悬浮液用离心机(B.2.1)按大约500g离心15min。倒掉上清液，在土壤中加入3滴氯仿(5.2.2),按照7.19在德国的11个实验室重复测试了本方法。选用黄土和壤土2种耕作土壤进行试验。表C.1所示平均值/(μg/g)未熏蒸样品提取的有机碳(C)熏蒸样品提取的有机碳(C)未熏蒸样品提取的有机碳(C)熏蒸样品提取的有机碳(C)[2]ISO11274:1998Soilquality—Determinationofwater-retentioncharactetractabilityofsoilnitrogen:Arapiddirectextractionmethodforinsoil.SoilBiol.Biochem.,17,1985,pp.837-842.[4]HardenT.,JoergensenR.G.,MeyerBfumigation-extractionandsubstrate-inducedrespirationintwopesticide-treatedsoils.Schem.,25,1993,pp.679-683.[5]HardenT.,JoergensenR.G.,MeyerB.etal.Miner[6]InubushiK.,Brookeaerobicandanaerobicsoilsmeasuredbythefumigation-extractionmethod.SoilBiol[7]MuellerT.,JoergensenR.enceoflivingrootsbyfumigation-extraction.SoilBiol.Biochem.,24,1992,pp.179-[8]OcioJ.A.andBrookesP.C.AnesoilsfollowingrecentadditionsofwheatstrawandthecharacSoilBiol.Biochem.,22,1990,pp.685[9]SparlingG.P.,FelthamC.W.,ReynoldsJ.,etal.Estition-extractionmethod:useonsoilsofhighorganicmattercontent,andtor.SoilBiol,Biochem.,22,1990,pp.301-307.[10]WuJ.,JoergensenR.G.,PommereningB.,etal.Mebyfumigation-extraction-anautomatedprocedure.SoilBiol.Biochem.,22,1990,pp[11]VanceE.D.,BrookesP.C.andJenkinsonD.S.AnextractionmecrobialbiomassC.SoilBiol.Biochem.,19,1