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文档简介
粮油作物产品中黄曲霉毒素B₁、环匹检测胶体金法2021-05-07发布2021-11-01实施NY/T3867—2021本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则”的规定本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。本文件起草单位:中国农业科学院油料作物研究所、农业农村部生物毒素检测重点实验室、农业农村5.4牛血清白蛋白(BSA),纯度210.0mL。此标准溶液浓度为0.10mg/mL,—20℃保存,备用。5.13胶体金标记抗体复合物:黄曲霉毒素B₁、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素单克隆抗体的纯度不低于80%,亲和力常数不低于1.00×10⁸L/mol、与其他毒素交叉反应率小于10%。6仪器设备6.1胶体金多通道检测仪,信号值变异系数CV≤3.0%。6.2免疫层析检测试纸条:固定有黄曲霉毒素B₁-BSA偶联物、环匹阿尼酸毒素-BSA偶联物、杂色曲霉毒素-BSA偶联物,用于样品中黄曲霉毒素B₁、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素与胶体金标记抗体预反应后再与偶联物反应的载体。6.3均质机。6.6涡旋混合器:≥2000r/min6.8有机相滤膜:0.45μm6.9中速定性滤纸。7分析步骤准确称取20.0g去壳、磨碎(过孔径0.9mm筛孔)的试样于烧杯中,加内4.0g氯化钠及加入100mL乙腈溶液(5.10)用均质机(6.3)提取2min后,静置1min,中速定性滤纸(6.9)过滤。取1.0mL滤液,加入3.0mL试样稀释液(5.1),涡旋混合器(6.6)混匀,经有机相滤膜(6.8)过滤,备用。7.1.2空白基质溶液制备取空白样品,按7.1.1制备空白基质溶液,备用。7.2取50μI胶体金标记黄曲衍毒素B、胶体金标记环匹阿尼酸毒素、胶体金标记杂色曲霉毒素混合溶7.3取7.1.1制备的滤液150正,垂直滴加个样品瓶内(7.2),涡旋混合居,将样品瓶置于恒温装置(6.5)中反应3min,然后取出毒素免疫层析检测试纸条(6.2),按使用要求方向插入到加样后的样品瓶中,于恒温装置(6.5)中反应6min,取出毒素免疫层析检测试纸条,上机(6.1)检测。7.4标准曲线将黄曲霉毒素B₁、环匹阿尼酸毒素、杂色画霉毒素标准溶液(5.12)用空白基质溶液(7.1.2)配制为系列梯度标准工作液,按由低到高的浓度次序进行7.2、7.3步骤的检测(每个样品重复3次),根据检测线T信号值与质控线C信号值的比值(T/C)和标准溶液浓度的自然对数值(Inc)建立标准曲线(r≥0.95)。8结果计算8.1结果测定试样
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