NYT 2679-2015 甘蔗病原菌检测规程 宿根矮化病菌 环介导等温扩增检测法_第1页
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宿根矮化病菌环介导等温扩增检测法2015-02-09发布2015-05-01实施I122.0%CTAB,配方见附录A。4.3.1F3:5'-ACATCGGTACGACTGGGT-34.3.2B3:5'-TGGCCGACCAAAAAAGGT-3'。4.3.3FIP(Flc+F2):5'-GGCGTACTAAGTTCGAGCCGTT-GGTCAGCTCATGGGTGGA-3'。4.3.4BIP(Blc+B2):5'-CCTCGCACATGCACGCTGTT—CTCAGCGTCTTGAAGACA4.3.5LF:5'-CTCCGCACCAATGTCAATGT-4.3.6LB:5'-CTGAGGGAC36.2.5吸取上层清液至另一新的无菌离心管中，加入2/3体积预冷(-20℃)的异丙醇或2倍体积的6.2.64℃下12000g离心15min,获得DNA沉淀。用500μL75%乙醇将DNA洗涤2次。4℃下4图1称取121.1gTris,溶解于800mL的ddH₂O中，用6mol/LHCl调节pH至8.0后，用ddH₂O定容到1.0L称取186.1gNa₂EDTA·2H₂O,加入800mLddH₂O,充分搅拌，用2mol/LNaOH调节pH至8.0后，用ddH₂O定容到1.0L依次加入20g的CTAB粉末，100mL的1.0mol/LTris-HCI(pH8.0)母液，40mL的0.5mol/LEDTA(pH8.0)母液，81.816g的NaCl,用ddH₂O定容到1.0L6使用量(μL)dNTPsMixture(各10mmol/L)BstDNA聚合酶(8000U/mL)样品注：10×ReactionBuffer为BstDNA聚合酶(8000U/mL,

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