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SZDB/ZSZDB/Z267—2017肉食品中鸡源性成分实时荧光PCR检测方法Real-timePCRfordetectionofchicken-derivedingredients2017-09-12发布2017-10-01实施深圳市市场监督管理局发布I I 1 1 1 1 1 2 2 2 3 3 41GB/T6682分析实验室用水规格和试验方GB/T27403实验室质量控制规范COX3：细胞色素C氧化酶Ⅲ（cytochrodNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-PCR：聚合酶链式反应（polymerasROX：6-羧基-X-罗丹明（6-CaCTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithyEDTA：乙二胺四乙酸（ethylenediaminete2a)上游引物F：5'-TCTCACTTACACTACTTGCCACATCTT-3'a)下游引物R：5'-CGTGTGTGTCCTGTTTGGACTAG-3'b)探针序列P：5’-FAM-CACTGCAACCTACAGCCTCCGCATAAC–BHQ1-3’称取上述混匀样品50mg于1.5mL离心管中，加入600μL～800μL裂解液，65℃作用30min，期间不时振荡混匀；12000r/min离心5min；转移上清液于洁净离心管中，加400μL三氯甲烷/异戊醇反应体系：体积为20μL，包括2×ProbeqPCRMIX10μL（内含DNA聚合酶、dNTP等）、50×ROX平均值作为最终结果。采用已知含有鸡源性成分的鸡肉提取的DNA作为阳性对照。采用已知不含鸡源性3成分的其它动物组织（如羊肉、鸭肉）提取的DNA作为阴性对照。采用与模板等体积的双蒸水作为空白

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