农业部2031号公告-5-2013 转基因植物及其产品成分检测 耐旱玉米MON87460及其衍生品种定性PCR方法_第1页
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转基因植物及其产品成分检测耐旱玉米MON87460及其衍生品种定性PCR方法I农业部2031号公告—5—2013本标准按照GB/T1.1—1农业部2031号公告—5—2013本标准规定了转基因耐旱玉米MON87460转化体特异性定性PCR检测方法。本标准适用于转基因耐旱玉米MON87460及其衍生品种以及制品中MON87460转化体成分的定性PCR检测。GB/T6682分析实验室用水规格NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求农业部2031号公告—19—2013转基因植物及其产品检测抽样农业部1485号公告—4—2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化zSSⅡb基因zSSⅡbgene编码玉米淀粉合酶异构体zSTSⅡ-2的基因。根据转基因耐旱玉米MON87460转化体特异性序列设计特异性引物，对试样进行PCR扩增。依5.4500mmol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0):称取18.6g乙二铵四乙酸二钠(EDTA-Na₂),加2二钠溶液(5.4),加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。zSSⅡb-F:5'-CTCCCAATCCTTTGACzSSⅡb-R:5'-TCGATTTCTCTCTTGGTMON87460-F:5'-ATCCACCTGTCAGCTCMON87460-R:5'-GGTATGTATATAGTGGC37.5.1试样PCR反应7.5.1.1每个试样PCR反应设置3次平行。终浓度水10×PCR缓冲液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)总体积“—”表示体积不确定。如果PCR缓冲液中含有氯化镁，则不加氯化镁溶液，根据TaqDNA聚合酶的浓度确定其体积，并相应调整水的体积，使反应体系总体积达到25.0μL。注：玉米内标准基因PCR检测反应体系中，上、下游引物分别为zSSⅡb-F和zSSⅡb-R;MON874测反应体系中，上、下游引物分别为MON87460-F和M4大小一致，表明样品中检测出MON87460转化体成分，表述为“样品中检测出转基因耐旱玉米5农业部2031号公告—5—20131ATCCACCTGTCAGCTCAAGT51GAGATGTGTGCTGGACGGGCGGGCCTCCC101ACGGTGCGAAACGACGCACGCTTTTGCTGT151CAGCGCGAGCGTGACTGCGTTT201GGAAATTTGGTATTCTCTCACGTTGAAGGAA251

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