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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准牛及其产品中转基因成分实时荧光PCR检测方法1PCR检测方法24.1.1实时荧光定量PCR仪。4.1.2超净工作台。4.1.3核酸蛋白分析仪。4.1.4高速冷冻离心机，台式小型离心机，Mini个人离心机。4.2主要试剂除另有规定外，所有试剂均采用分析纯或生化试剂。4.2.1实验用水：应符合GB/T6582中一级水的规定。4.2.2PCR缓冲液。4.2.6其他药品及试剂配制方法见附录A。4.3引物和探针按照表1中提供的引物和探针序列合成引物及探针，加入无离子水配成100pmol/pL贮存，配成直接用于PCR反应的10pmol/μL的工作液。基因引物序列探针序列备注内源5'-CTGCTATGTGTATGGGTTCC-3’内对照外源5’-TATGACTGGGCACAACAGAC-3’5'-CGTCTTGCAGTTCATTCAGG-3’TTCC-3’筛查检测外源5'-GTTCCGCGTTACATAACTTACGG-3’5’-AAGTCCCTATTGGCGTTACTATGG-3’AC-3’筛查检测外源5'-AACCGCATCGAGCTGAAG-3’5'-GTTGTGGCGGATCTTGAAG-3’筛查检测外源5’-TCACAAATTTCACAAATAAAGC-3’5'-ACATGATAAGATACATTGATGAG-3’TTTGTCC-3’筛查检测外源5'-CATAGACACCCATGCCTAGG-3’CCAAGA-3’外源5’-GCCTTTCTGGGTAATACTTGTC-3’5’-TGTCATCAGTAATGTCATCATCC-3’CCTGCCA-3’转人乳清白检测外源5’-TGGGAGAGTGGTTACAACAC-3’5’-TACACCAGTAGCGGCTATTG-3’基因检测310×PCR反应缓冲液(含MgCl₂)各2.5mmol/I引物(上游)引物(下游)12注：表中DNA模板为原料的模板量，加工产品可视加工程度适当增加模板量。4剧烈搅拌，用氢氧化钠调节溶液pH值至8.0(约需20g氢氧化钠颗粒),然后加双蒸水定容至A.8动物组织裂解缓冲液：量取1mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.0)10mL,500mmol/L(pH8.0)10mL,5mol/LNaCl溶液30mL,10%SDS100mL至800

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