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ICS07.080DNA甲基化的测定焦磷酸测序法国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会IGB/T40183—2021本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。育生物学研究所农业资源研究中心、河北师范大学。1GB/T40183—2021DNA甲基化的测定焦磷酸测序法本标准规定了用焦磷酸测序法测定DNA甲基化的方法。本标准适用于动植物组织或体外培养细胞DNA甲基化测定。下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法下列术语和定义适用于本文件。3.1.1在DNA甲基转移酶的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将甲基转移至碱基特定结构上的DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)4原理DNA经重硫酸盐硫化处理后，DNA双链中未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，通过PCR将尿嘧啶转化为胸腺嘧啶，根据PCR产物中相应甲基化位点的胞嘧啶和胸腺嘧啶的比例进行定量。5试剂或材料5.2动物基因组DNA提取试剂盒。5.3植物基因组DNA提取试剂盒。5.420pmol/μL焦磷酸测序用引物。25.870%(体积分数)乙醇。取70mL无水乙醇加水稀释定容至100mL。5.1050×电泳缓冲液。称取242gTris溶于800mL蒸馏水中，加入57.1mL冰乙酸和100mL0.5mol/L乙二胺四乙酸溶液(pH8.0),再加蒸馏水定容至1000mL,室温保存，稀释50倍使用。6.4水平电泳槽。6.6低温离心机：最大离心力25910g。6.7凝胶成像系统。6.10PCR管。7测定步骤7.2DNA重亚硫酸盐转化7.3.1

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