T-CRHA 040.3-2024 神经系统变性疾病生物样本与数据库建设规范 第3部分：死亡供者脑组织样本的采集与处理

ICS07.080CCSA40团体标准神经系统变性疾病生物样本与数据库建设规范第3部分：死亡供者脑组织样本的采集与处理SpecificationforbiobankconstructionofneurodegenerativedisePart3:Collectionandprocessingofbraintissuebiomaterialfromdeceased中国研究型医院学会发布IT/CRHA040.3—2024前言 III 12规范性引用文件 13术语和定义 14总体要求 15死亡供者脑组织采集前准备 26死亡供者脑组织采集操作规程 27死亡供者脑组织处理操作规程 2附录A（规范性）新鲜半脑取材内容 4参考文献 5T/CRHA040.3—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件是T/CRHA040《神经系统变性疾病生物样本与数据库建设规范》的第3部分。T/CRHA040—2024：已经发布了以下部分：—第1部分：通用要求—第2部分：人类脑脊液样本采集与处理—第3部分：死亡供者脑组织样本的采集与处理请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国研究型医院学会临床数据与样本资源库专业委员会提出。本文件由中国研究型医院学会归口。本文件起草单位：广州金域医学检验集团股份有限公司、中国医学科学院基础医学研究所、中山大学附属第三医院、广东金域司法鉴定所、上海交通大学附属仁济医院、同济大学附属东方医院、广东省人民医院、广州金域医学检验中心有限公司、广州中医药大学第二附属医院、广州医科大学附属第一医院、北京宣武医院。本文件主要起草人：周红梅、仇文颖、何新月、陈新山、龙玲、唐闻晶、康晓楠、汤媛媛、毛志锋、李慧源、吴景文、张玉虎、陈曲波、罗文婷、徐群、韩晓燕、程凯汀、蔡彦宁。T/CRHA040.3—2024在脑部疾病的研究中，人脑组织有着不可代替的特殊性，与其他器官相比，完整的人脑既无法从常规手术中获取，也难以用其他动物或人工模型模拟，无偿遗体捐献的脑组织综合利用在我国虽然已开展了数十年，并取得了多方面的成就，但还远未能适应医学科学发展的需要。尤其是随着社会老龄化加重、人口平均寿命延长，老年神经变性病如阿尔茨海默病、帕金森病患者持续增加，尚无有效预防和治疗手段，发病机制也尚不明确，急需高质量的脑组织生物样本。然而目前针对神经系统变性疾病死亡供者脑组织的采集与处理，国内尚未建立统一标准，样本质量参差不齐，无法用于科研并实现转化，造成珍贵资源的严重浪费。《神经系统变性疾病生物样本与数据库建设规范》旨在提供高质量的神经系统变性疾病生物样本与数据，拟由三个部分组成：—第1部分：通用要求。目的在于规定在符合伦理与法规的框架下标准化进行科研立项、供者入组、样本与信息采集、处理与质量控制等，从而推动我国神经病学与转化医学的发展。—第2部分：人类脑脊液样本采集与处理。目的在于规范人类脑脊液样本采集、处理标准化操作过程，为神经系统疾病发生机制、诊疗、药物研发和疾病防控等研究与应用提供良好的物质基础和技术支持，促进国内外交流与合作，推动我国神经病学与转化医学的发展。—第3部分：死亡供者脑组织样本的采集与处理。目的在于规范死亡供者脑组织样本采集、处理标准化操作过程，有助于了解神经系统变性疾病机制、发现风险基因、新的诊断和预后标志物以及潜在的药物靶点，对推动疾病的诊疗、药物研发和疾病防控具有重要意义，也将为中国“脑计划”提供不可或缺的战略资源支撑。本文件规范了神经系统变性疾病死亡供者脑组织样本采集、处理与质量控制等过程的通用要求，为高质量神经系统变性疾病生物样本库的建设奠定了重要基础。1T/CRHA040.3—2024神经系统变性疾病生物样本与数据库建设规范第3部分：死亡供者脑组织样本的采集与处理本文件规定了死亡供者脑组织样本的采集与处理总体要求、死亡供者脑组织采集前准备、采集与处理操作规程。本文件适用于死亡供者捐献的脑组织样本采集、处理的生物样本库，以及开展神经系统变性等相关疾病研究的机构。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T37864—2019生物样本库质量和能力通用要求GB/T40364—2021人类生物样本库基础术语GA/T830—2021尸体解剖检验室建设规范WS233—2017病原微生物实验室生物安全通用准则T/CRHA040.1—2024神经系统变性疾病生物样本与数据库建设规范第1部分：通用要求3术语和定义GB/T40364-2021界定的术语和定义适用于本文件。4总体要求4.1脑组织来源于神经系统变性疾病患者或正常人（对照）的遗体捐献，死亡供者脑组织样本的采集与处理应遵循T/CRHA040.1—2024规定的要求。4.2采集脑组织样本前应对所采集的死亡供者按规定要求进行筛选并评价危险因素（如传染性疾病病原体的检测等），并遵守相应生物安全防护要求标准并配备防护装备。注：神经系统变性病变组织中的病理性致病蛋白质（如淀粉样蛋白、Tau蛋白、α-突触核蛋白4.3采集死亡供者脑组织样本前应完成知情同意书的签署。4.4死亡供者脑组织样本的采集与处理宜在24h内完成，尽量减少死亡后延迟时间，以确保尽可能体现脑组织在活体时的状态。4.5脑组织取材地点应选择符合GA/T830—2021建设要求的医院病理解剖室或遗体志愿捐献接收站的专用解剖室，若不能及时采集，应将遗体保存于2℃~6℃低温环境中。4.6脑组织处理常规行大脑半脑固定，优势半脑取新鲜组织速冻，特殊情况下左右脑轮流固定与冻存。以下情形需双侧脑全部固定：a）供体死亡时间＞24h；2T/CRHA040.3—2024b）两侧大脑半球可能受疾病影响不同，需要双侧脑组织病理诊断；staphylococcusaureus，MRSA）感染等患者。4.7脑组织取材过程中的生物安全防护、取材后的消毒及废物处理流程应遵循WS233-2017所规定的标准操作方案，以避免感染潜在传染性疾病的风险。4.8应完整记录采集与处理过程及供者相关信息，如脑组织样本标准分析前变量（standardPRE-analyticalcode，SPREC）、供者的死亡时间、原因和死亡前（濒死）表现等。4.9应按GB/T37864-2019中7.8的要求建立和实施死亡供者脑组织及其衍生物样本的质量控制程序，并保留质控过程和结果的记录，确保样本及相关数据满足预期的要求。5死亡供者脑组织采集前准备5.1应审查和确认捐献知情同意书签署情况以及供者姓名、身份信息与知情同意书的一致性，并确认取脑组织的时间。5.2应提前准备取材所需的医疗器械与辅助设备，如无菌解剖刀、穿刺针、手套、纱布、消毒物品及摄像设备等5.3对于传染性或感染性的脑组织应按照组织所携带或患有相关传染性疾病的微生物防护级别进行穿戴及准备。5.4观察并判断是否有颅脑外伤，如有大范围损伤，应放弃进行脑组织样本的采集。6死亡供者脑组织采集操作规程6.1采集时，沿两侧耳后至颅顶，冠状切开头皮，翻折、暴露颅骨，沿眉弓到枕外隆突水平环行线上约1cm锯开颅骨，避免切口过深损伤脑组织。6.2用解剖刀小心剥离硬脑膜，离断脑与颅骨联系，完整取出大脑、小脑、脑干以及相连的部分颈髓，全脑称重，测量体积、长度并拍照，置入冷等张盐水，碎冰中暂时保存。6.3沿大脑、小脑、脑干中线矢状切开，将全脑等分为左右两部分，一部分置入6%甲醛溶液固定，另一部分进行速冷处理。6.4采集完成后使用超级粘合胶重新连接骨骼，并用手术针和不可吸收的缝合线缝合头皮，清洁脸部，擦干头发，由技术人员重新组合尸体。7死亡供者脑组织处理操作规程7.1冷冻处理7.1.1将冷冻的新鲜半脑称重，测量并拍照。7.1.2沿上丘脑水平或乳头体后方去除中脑及相连接的脑干、小脑部分，沿小脑脚分离脑干、小脑。7.1.3将新鲜大脑半球冠状切开，每片厚1cm；小脑半球沿矢状平行切面切开，脑干按水平横断面切开。7.1.4按照附录A中取材内容和部位分别顺序取材后按次序排列摄片。7.1.5将组织速冻后装入标记好的自封袋，放入冻存盒，置于液氮中保存。7.2固定处理3T/CRHA040.3—20247.2.1将拟固定的半脑或全脑置入6%甲醛溶液固定3天后，固定液置换为4%甲醛溶液固定2周以上；2周后取出固定好的半脑或全脑，去除所有脑膜及血管，注意基底动脉及颈动脉的动脉硬化或其他疾病及其病变程度。7.2.2沿上丘水平或乳头体后方去除中脑及相连接的脑干、小脑；沿小脑脚分离脑干、小脑。7.2.3小脑半球按矢状平行切面切片，由额叶至枕叶顺序编号，并摄片；脑干和脊髓按横断面切片，按顺序编号并摄片。7.2.4取材切片前应对大体标本进行病理检验，观察是否有损伤、出血、梗塞、软化灶或肿瘤等异常情况，若在附录A中要求的常规神经病理组织取材部位的基础上，发现明显病灶则取病灶处用于神经病理检查。7.2.5按附录A中取材内容分别取大脑及脑干各部位组织，脱水包埋用于病理诊断与科研；其余组织继续保存于4%甲醛溶液中，并且固定液每2年更换一次。7.3衍生物的提取与保存7.3.1脱氧核糖核酸（DNA）7.3.1.1脑组织进行DNA提取时应控制组织的体积约0.5cm×0.5cm×0.5cm。7.3.1.2新鲜脑组织应用流水及预冷生理盐水快速将手术样本表面/腔面的血液、黏液以及污物冲洗干净。7.3.1.3提取的DNA分管保存于聚丙烯材质（polypropylene，PP）冻存管中并完整标识，长期保存于-20℃及以下环境。7.3.2核糖核酸（RNA）7.3.2.1脑组织进行RNA提取，厚度应小于0.5cm。7.3.2.2手术切除后尽快将样本组织浸入装有RNAlater溶液的冻存管中，RNAlater体积至少是组织块体积的（5～10）倍，容器大小应满足组织完全浸没于RNAlater溶液中。7.3.2.3浸泡在RNAlater中的组织应放置于2℃~8℃环境中过夜。不同的RNAlater试剂操作应根据厂商给出的建议使用方法进行。7.3.2.4提取的RNA应尽快使用，或分管置PP冻存管中并完整标识，于-80℃及以下环境长期保存。4T/CRHA040.3—2024（规范性）新鲜半脑取材内容新鲜半脑取材内容见表A.1。表A.1新鲜半脑取材内容1234567895T/CRHA040.3—2024参考文献[1]仇文颖,马超,包爱民,等.中国人脑组织库标准化操作方案[J].解剖学报,2017,48(03):334-341.[2]李凤娇,咸伟伟,补一人,等.上海脑库脑组织样本的质量控制分析[J].解剖学报,2020,52(2):168-174.[3]尹金辉,黄越,卞修武等.人脑组织库生物安全防护共识（上部分）[J].阿尔茨海默病及相关病杂志,2021,4(01):13-20.[4]WhiteK,YangP,LiL,etal.EffectofpostmortemintervalandyearsinstorageonRNAqualityoftissueatarepositoryoftheNIHNeuroBioBank[J].BiopreservBiobank,2018,16(2):148-157.[5]TeunissenCE,PetzoldA,BennettJL,etal.Aconsensusprotocolforthestandardizationofcerebrospinalfluidcollectionandbiobanking[J].Neurology.2009,73(22):1914-1922.[6]QiuW,Zhang