DB34T4335-2022芽菜类蔬菜中喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-质谱-质谱法

ICS67.050

CCSX04

34

安徽省地方标准

DB34/T4335—2022

芽菜类蔬菜中喹诺酮类药物残留量的测定

液相色谱-质谱/质谱法

DeterminationofquinolonesresiduesinsproutvegetablesbyHPLC-MS/MSmethod

2022-10-26发布2022-11-26实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T4335—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会提出。

本文件由安徽省市场监督管理局归口。

本文件起草单位：安徽省食品药品检验研究院（国家农副加工食品质量监督检验中心）、安徽省产

品质量监督检验研究院、合肥工业大学食品与生物工程学院、安徽拓维检测服务有限公司、安徽省食品

微生物发酵与功能应用工程实验室、食品营养与安全研究中心。

本文件主要起草人：李静、娄鹏祥、邓小芳、李建华、张安、张居舟、刘毅、余晓娟、程潇、谭炜、

杨志才。

I

DB34/T4335—2022

芽菜类蔬菜中喹诺酮类药物残留量的测定

液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本文件规定了芽菜类蔬菜中喹诺酮类药物残留量的液相色谱-质谱/质谱的测定方法。

本文件适用于黄豆芽、绿豆芽、黑豆芽、红豆芽、豌豆芽等芽菜中吡哌酸、麻保沙星、依诺沙星、

氟罗沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、奥比沙星、

加替沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星、莫西沙星、吉米沙星、巴洛沙星、妥苏沙星、西诺沙星、

噁喹酸、萘啶酸、氟甲喹残留量的测定。

芽菜类蔬菜中甲硝唑和羟基甲硝唑残留量的测定可按照本文件执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

样品均质后经0.3％甲酸-乙腈溶液提取，提取液经固相萃取柱净化后，液相色谱-质谱/质谱法测

定，外标法定量。

5试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。

试剂

5.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯。

5.1.3甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.4氯化钠（NaCl）。

2

DB34/T4335—2022

溶液配制

5.2.10.3％甲酸-乙腈溶液（V/V）：吸取3mL甲酸（5.1.2），加乙腈（5.1.1）至1000mL，混匀。

5.2.20.1％甲酸水溶液（V/V）：吸取1mL甲酸（5.1.2），加水稀释至1000mL，混匀。

标准品

喹诺酮类、甲硝唑和羟基甲硝唑标准品，纯度均≥95％，见附录A。或经国家认证并授予标准物质

证书的标准品。

标准溶液制备

5.4.1标准储备液（100μg/mL）：按纯度折算后，准确称取适量标准品，先加少量水溶解，再用甲醇

（5.1.3）定容至100mL，配制成含量为100μg/mL的各单标储备液，―18℃避光保存，有效期1年。

5.4.2混合标准工作液（1μg/mL）：分别吸取1mL各单标储备液（5.4.1）于100mL容量瓶，用甲

醇配成质量浓度为1μg/mL的混合标准溶液，―18℃避光保存，有效期6个月。

5.4.3基质匹配混合标准工作曲线

——选择与被测样品性质相同或相似的空白样品，按照8.1～8.2部分进行前处理，得到空白基

质溶液。

——精确吸取一定量的混合标准工作液（5.4.2），用空白基质溶液逐级稀释成质量浓度分别为

0.5μg/L、1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L的基质匹配混合标准工作曲线溶

液。

材料

5.5.1通过式反相混合型亲水亲脂固相萃取柱：60mg/3mL，或性能相当者。

5.5.2微孔尼龙滤膜：0.22μm。

6仪器和设备

液相色谱-质谱/质谱仪（液相色谱-三重四极杆质谱联用仪）：配电喷雾离子源（ESI）。

电子天平：感量0.1mg和0.01g。

涡旋混匀器。

离心机：转速不低于8000r/min。

组织捣碎机。

匀浆机。

氮吹仪。

7试样制备

样品测定部位按照GB2763的规定执行。

随机取芽菜类样品，用组织捣碎机充分粉碎，并使均质，装入洁净容器中，密封并标记，―18℃

以下保存。

8分析步骤

3

DB34/T4335—2022

提取

称取10g（精确至0.01g）试样置于50mL塑料离心管中，准确加入10mL0.3％甲酸-乙腈

溶液（5.2.1），涡旋振荡1min，加入1gNaCl（5.1.4），再涡旋振荡1min后，以8000r/min

离心5min，取上清液，待净化。

净化

吸取3mL上清液（8.1），以约1mL/min的流速全部通过固相萃取柱（5.5.1），收集流出液，

精确量取1.0mL流出液，45℃水浴氮吹至干，再加入1.0mL初始流动相复溶，过0.22μm微孔尼龙

滤膜（5.5.2），待测定。

测定

8.3.1液相色谱参考条件

如下：

a)色谱柱：C18柱，2.1×50mm，粒径1.8μm，或性能相当者；

b)流动相：A相为0.1％甲酸水溶液（5.2.2），B相为乙腈（5.1.1），梯度洗脱程序见表1；

c)流速：0.3mL/min；

d)进样体积：2μL；

e)柱温：35℃。

表1梯度洗脱程序

时间0.1％甲酸水溶液乙腈

/min/％/％

0955

1.0955

2.09010

3.08713

5.08515

7.03565

8.01090

9.01090

9.1955

10.0955

8.3.2质谱参考条件

如下：

f)离子源类型：电喷雾离子源（ESI）；

g)扫描方式：正离子扫描；

h)监测模式：多反应监测（MRM）；其他质谱参考条件见附录B。

8.3.3定性测定

4

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按照8.3.1和8.3.2所列的仪器参考条件，测定样品试液和标准工作溶液，若试液与标准溶液

中待测物的质量色谱峰保留时间的偏差在±2.5％范围内；所有定性离子的信噪比均超过3，且定性离

子对的相对丰度与浓度相当的基质匹配标准溶液的相对丰度一致，偏差不超过表2的规定，则可判断样

品中存在相应的待测物。

表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度/％＞5020～50（含）10～20（含）≤10

允许相对偏差/％±20±25±30±50

8.3.4定量测定

用基质匹配标准工作溶液（5.4.3）分别进样，以待测化合物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，

绘制标准工作曲线，外标法定量。标准物质的特征离子质量色谱图见附录C。

8.3.5试样溶液的测定

将基质匹配混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱-质谱/质谱仪中，保留时间和定性离

子定性，测得定量离子峰面积，样品试液中待测物的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超

过线性范围时应根据测定浓度进行适当稀释后再进行分析。

空白试验

除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行操作。

9分析结果的表述

样品中待测物的含量按式（1）计算：

cV1000

ωiif································································(1)

m1000

式中：

ωi——试样中待测物残留量的数值，单位为微克每千克（μg/kg）；

ci——由标准曲线求得试样溶液中待测物质量浓度的数值，单位为微克每升（μg/L）；

V——提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；

m——试样质量的数值，单位为克（g）；

f——稀释倍数；

1000——换算系数；

计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

10精密度

在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20％。

11灵敏度

5

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本文件对各化合物的方法定量限为0.5～2.0μg/kg（见附录A）。

6

DB34/T4335—2022

A

A

附录A

（资料性）

26种化合物的名称、英文通用名、CAS号和方法定量限

26种化合物的名称、英文通用名、CAS号和方法定量限见表A.1。

表A.126种各化合物的名称、英文名、CAS号和方法定量限

定量限

序号化合物名称英文通用名称CAS号化学分子式

（μg/kg）

1吡哌酸Pipemidicacid51940-44-4C14H17N5O31.0

2麻保沙星Marbofloxacin115550-35-1C17H19FN4O41.0

3依诺沙星Enoxacin74011-58-8C15H17FN4O31.0

4氟罗沙星Fleroxacin79660-72-3C17H18F3N3O31.0

5诺氟沙星Norfloxacin70458-96-7C16H18FN3O31.0

6氧氟沙星Ofloxacin82419-36-1C18H20FN3O41.0

7培氟沙星Pefloxacin70458-92-3C17H20FN3O31.0

8环丙沙星Ciprofloxacin85721-33-1C17H18FN3O31.0

9洛美沙星Lomefloxacin98079-51-7C17H19F2N3O31.0

10达氟沙星Danofloxacin112398-08-0C19H20FN3O31.0

11恩诺沙星Enrofloxacin93106-60-6C19H22FN3O31.0

12奥比沙星Orbifloxacin113617-63-3C19H20F3N3O31.0

13加替沙星Gatifloxacin112811-59-3C19H22FN3O41.0

14沙拉沙星Sarafloxacin98105-99-8C20H17F2N3O31.0

15双氟沙星Difloxacin98106-17-3C21H19F2N3O31.0

16司帕沙星Sparfloxacin111542-93-9C19H22F2N4O31.0

17莫西沙星Moxifloxacin151096-09-2C21H24FN3O42.0

18吉米沙星Gemifioxacin175463-14-6C18H20FN5O41.0

19巴洛沙星Balofloxacin127294-70-6C20H24FN3O41.0

20妥苏沙星Tosufloxacin108138-46-1C19H15F3N4O32.0

21西诺沙星Cinoxacin28657-80-9C12H10N2O51.0

22噁喹酸Oxolinicacid14698-29-4C13H11NO50.5

23萘啶酸Nalidixicacid389-08-2C12H12N2O30.5

24氟甲喹Flumequine42835-25-6C14H12FNO30.5

25甲硝唑Metronidazole443-48-1C6H9N3O31.0

26羟基甲硝唑Hydroxymetronidazole4812-40-2C6H9N3O41.0

7

DB34/T4335—2022

B

B

附录B

（资料性）

质谱参考条件

质谱参考条件如下：

i)毛细管电压：3000V；

j)离子源温度：230℃；

k)干燥气流速：18L/min；

l)雾化气压力：35psi；

m)鞘气温度：335℃；

n)鞘气流速：11L/min；其他质谱参数见表B.1。

表B.1保留时间、离子对和碰撞能

序号化合物母离子(m/z)子离子(m/z)碰撞能/eV保留时间/min保留时间窗口/min

1吡派酸304.1217.1*；286.122；173.321.31

2麻保沙星363.1319.9*；344.913；203.871.14

3依诺沙星321.1303.1*；232.022；433.990.71

4氟罗沙星370.1326.1*；269.120；274.121.37

5诺氟沙星320.3302.0*；233.120；204.191.17

6氧氟沙星362.1318.1*；261.120；254.221.17

7培氟沙星334.2316.2*；290.220；174.331.12

8环丙沙星332.2314.0*；230.920；254.401.13

9洛美沙星352.2265.1*；308.325；154.731.21

10达氟沙星358.2340.1*；283.020；204.931.40

11恩诺沙星360.0316.1*；342.120；205.161.40

12奥比沙星396.1352.2*；295.118；255.321.24

13加替沙星376.2332.2*；261.118；335.810.99

14沙拉沙星386.0342.0*；299.020；206.041.17

15双氟沙星400.2382.1*；356.120；156.121.14

16司帕沙星393.1349.1*；292.120；256.200.88

17莫西沙星402.3384.5；357.923；326.350.88

18吉米沙星390.0372.2*；359.020；136.370.98

19巴洛沙星391.1360.0*；314.025；156.390.86

20妥苏沙星405.0387.0*；344.023；236.390.74

21西诺沙星263.0245.0*；217.015；256.440.76

22噁喹酸262.0244.0*；216.018；336.690.98

23萘啶酸233.0215.0*；187.013；257.110.97

24氟甲喹262.1244.0*；202.018；387.180.98

25甲硝唑172.1128.1*；82.015；301.790.96

26羟基甲硝唑188.1123.1*；126.010；151.301.04

注：*为定量离子。

C

C

8

DB34/T4335—2022

附录C

（资料性）

26种化合物特征离子质量色谱图

26种化合物特征离子质量色谱图见图C.1。

5

1.吡派酸

41.62.麻保沙星43.依诺沙星4.氟罗沙星

304.1/217.1363.1/319.9321.1/303.14370.1/326.1

31.23

363.1/344.93

4

4

4

4370.1/269.1

2304.1/286.10.82

/10

/10

/10

/10

I2

I

I

321.1/232.0I

10.411

00.000

2.42.73.03.33.63.93.03.33.63.94.24.54.83.33.63.94.24.54.83.33.63.94.24.54.8

t/mint/mint/mint/min

576

5.诺氟沙星6.氧氟沙星68.环丙沙星

67.培氟沙星

4362.1/318.15

5

320.3/302.05332.2/314.0

334.2/316.24

34

4362.1/261.1

4

4

4

43

33

/10

/10

/10

2/10332.2/230.9

I

I

I

I2

22334.2/290.2

1

320.3/233.1111

0000

3.63.94.24.54.85.13.33.63.94.24.54.85.13.63.94.24.54.85.13.64.04.44.85.2

t/mint/mint/mint/min

达氟沙星5

6洛美沙星10.11.恩诺沙星12.奥比沙星

9.45396.1/352.2

54360.0/316.1

352.2/265.13358.2/340.14396.1/295.1

43360.0/342.1

4

4

43

324

/10

/10

/10

/102

I

I

352.2/308.3I

2I2

1358.2/283.01

11

0000

4.24.54.85.15.44.24.54.85.15.45.74.44.85.25.66.04.44.85.25.66.0

t/mint/mint/mint/min

2.5

加替沙星6.08

2.513.14.沙拉沙星15.双氟沙星16.司帕沙星

376.2/332.2393.1/349.1

2.0386.0/342.0400.2/382.1

2.0376.2/261.14.56

1.51.5393.1/292.1

4

4

4

3.044

/10

/10

/10

/10

I1.0

I

I

1.0I400.2/356.1

386.0/299.0

1.52

0.50.5

0.00.00.00

5.15.45.76.06.36.65.45.76.06.36.65.45.76.06.36.66.95.76.06.36.6

t/mint/mint/mint/min

图C.126种化合物的特征离子质量色谱图（2.0μg/L）

9

DB34/T4335—2022

4.0

17.莫西沙星18.吉米沙星819.巴洛沙星420.妥苏沙星

390.0/372.0

402.3/384.53.2405.0/387.0

1.0391.1/360.0

390.0/359.063

2.4

4

3

4

442

/10

/10

/10

/10

1.6I

I

I

I0.5402.3/357.9

391.1/314.01

0.82405.0/344.0

0.00.000

5.76.06.36.66.95.76.06.36.66.95.76.06.36.66.95.76.06.36.66.9

t/mint/mint/mint/min

2.46

21.西诺沙星22.噁喹酸2.023.萘啶酸24.氟甲喹

263.0/245.05

31.8

262.0/244.0233.0/215.0262.1/244.0

1.54

25

5

4

41.21.03

263.0/217.0/10

/10

/10

/10

I

I

I

I262.0/216.0

233.0/187.02262.1/202.0

10.60.5

1

00.00.00

5.66.06.46.87.27.66.06.36.66.97.27.56.66.97.27.57.86.66.97.27.57.8

t/mint/mint/mint/min

1.5

25.甲硝唑26.羟基甲硝唑

172.1/128.12188.1/123.1

1.0

188.1/126.0

3

4172.1/82.0

/10

/10

I

I1

0.5

0.00

1.21.51.82.12.40.91.21.51.82.1