血清肌酸激酶(CK) DGKC推荐方法测定

血清肌酸激酶(CK)DGKC推荐方法测定实验原理德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法。CK己糖激酶(HK)ADP+磷酸肌酸肌酸+ATPCK己糖激酶(HK)ATP+葡萄糖ADP+葡萄糖-6-磷酸(G6P-DH)葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+(G6P-DH)NADPH在340nm处有特异吸收，通过测定NADPH生成速率计算出CK活性。2.标本：2.1病人准备：无特殊要求。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。3.标本存放：稳定性：2～8℃保存稳定7天;15～25℃保存稳定1天;-20℃保存稳定4周（避光保存）。3天内的活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少损失10%。4.标本运输：常温条件下保存运输。5.标本拒收标准：细菌污染的标本。6.实验材料6.1试剂利德曼CK测定试剂盒（试剂16×64ml试剂26×16ml）6.1.1试剂组成：试剂1（R1）+试剂2（R2）：咪唑缓冲液pH6.7100mmol/L磷酸肌酸30mmol/L葡萄糖20mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC）20mmol/LEDTA-Na22mmol/LADP2mmol/LNADP2mmol/L二腺苷-5'-磷酸10μmol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH）>1500U/L已糖激酶（HK）>2500U/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪8.操作步骤8.1项目基本参数：参见AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件9.检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法：以TruCalU复合校准品CK校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行CK活力检测，可以直接使用ΔA/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算CK活力的计算因子见下表：ΔA/min×因子=CK活力[U/L]计算因子（37℃）：340nm4127334nm4207365nm472912.参考值范围[1]：（U/L）成人：女性24～167男性24～190参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义[1、2]：肌酸激酶（CK）主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M）和存在于脑中的同工酶（CK-B）组成。在血清中CK形式为CK-MM，CK-MB，CK-BB和巨酶等的二聚物。在心肌损伤或骨骼肌疾病时可以观测到CK活力的升高。CK和CK-MB一起检测有助于心肌梗死的诊断和监视。14.操作性能14.1线性范围＜1200U/L14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)批间精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)样品11593.182.00样品149.51.052.12样品22201.540.70样品21571.631.04样品35083.690.73样品32282.311.0114.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对71个样品进行CK活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.98x+0.02（U/L）；r=1.000。14.4灵敏度：本试剂的检测限为5U/L。14.5病人结果可报告范围：5-1200U/L。16.病危报警值的处理：无。17.方法局限性17.1本法对CK活力的线性上限为1200U/L，当测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+10稀释，重新测定，结果乘以11。17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L，胆红素浓度684mol/L，血红蛋白2.00g/L，甘油三酯浓度22.6mmol/L时没有观察到干扰。18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19.参考文献SteinW.Creatinekinase(totalactivity)，creatinekinaseisoenzymesandvariants.In:ThomasLed.Clinicallaboratorydiagnostics.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.71-80.MossDW，HendersonAR.Clinicalenzymology.In:BurtisCA，AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.Philadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.P.617-721.RecommendationsoftheGermanSocietyforClinicalChemistry.Standardizationofmethodsfortheestimationofenzymeactivitiesinbiologicalfluids:Standardmethodforthedeterminationofcreatinekinaseactivity.JClinChemClinBiochem1977;15:255-60.4.LorentzK，RohleG，SiekmannL.Introductionofnewstandardmethods1994forthedeterminationofcatalyticenzymeconcentrationsat37℃.DGKlinischeChemieMitteilungen1995;26:290-3.20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定实验原理使用多克隆抗体抑制CK的CK-M同工酶活性后，按照德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法检测余下的肌酸激酶活力。CK-MB由CK-M和CK-B亚单位组成。抗CK-M抗体完全抑制了CK-MM（肌酸激酶的主要活性部分）和CK-MB中的CK-M亚单位的活性。再检测CK的活力为余下的CK-B的活力，相当于一半CK-MB活力。所以将结果乘以2，为CK-MB的活力。CK己糖激酶(HK)ADP+磷酸肌酸肌酸+ATPCK己糖激酶(HK)ATP+葡萄糖ADP+葡萄糖-6-磷酸(G6P-DH)葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+(G6P-DH)2.标本： 2.1病人准备：无特殊。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。3.标本存放：稳定性：-20℃保存稳定4周（避光保存）。活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少损失10%。4.标本运输：常温条件下保存运输。5.标本拒收标准：细菌污染的标本。6.实验材料6.1试剂利德曼CK测定试剂盒（试剂16×64ml试剂26×16ml）6.1.1试剂组成试剂1（R1）+试剂2（R2）：咪唑缓冲液pH6.7100mmol/L磷酸肌酸30mmol/L葡萄糖20mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC）20mmol/L乙酸镁10mmol/LEDTA-Na22mmol/LADP2mmol/LNADP2mmol/LAMP5mmol/L二腺苷-5'-磷酸10μmol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH）≥1500U/L已糖激酶（HK）≥2500U/L抑制人CK-MM的人抗体≥2000U/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪8.操作步骤8.1项目基本参数：参见AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件9.检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控）做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法：使用ΔA/min均值乘以计算因子得到CK-MB活力。计算因子见下表：ΔA/min×因子=CK活力[U/L]计算因子（37℃）：340nm8254334nm841412.参考值范围[1]：0-24U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义[1,2]肌酸激酶主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M）和存在于脑中的同工酶（CK-B）组成。在血清中CK形式为CK-MM，CK-MB，CK-BB和巨酶等的二聚物。在检测心肌损伤时CK-MB特异性很高。因此，CK-MB常用于心肌梗死的诊断和监视。14.操作性能14.1线性范围＜1000U/L。14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)批间精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)样品130.70.431.40样品131.50.270.85样品282.60.500.61样品293.30.490.53样品31941.000.52样品31871.060.5714.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对75个样品进行CK-MB活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.97x+3.78（U/L）；r=0.998。14.4灵敏度：本试剂的检测限为2U/L。14.5病人结果可报告范围：2-1000U/L。15.超出范围结果处理：本法对CK-Mb活力的线性上限为1000U/L，当测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液稀释，重新测定。16.病危报警值的处理：无。17.方法局限性17.1本法对CK-Mb活力的线性上限为1000U/L，当测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液稀释，重新测定。17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L，胆红素浓度684mol/L，血红蛋白2.00g/L，甘油三酯浓度22.6mmol/L时没有观察到干扰。18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19.参考文献SteinW.Creatinekinase(totalactivity),creatinekinaseisoenzymesandvariants.In:ThomasLed.Clinicallaboratorydiagnostics.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.71-80.MossDW,Henderson