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DB34DB34/T2813—2017梨炭疽病菌检疫鉴定方法DetectionandidentificationofColletotrichumgloeosporioidesPenz.2017-03-30发布2017-04-30实施安徽省质量技术监督局发布I1GB/T6682分析实验室用水规分类地位：真菌界（Fungi黑盘孢目（Melanconiales）,黑盘孢科（Melanconiace菌属（Colletotrichum其有性阶段为围小丛壳（G根据梨炭疽病菌在寄主上的为害症状（参见附录A），培养基上生长的菌落、菌丝、分生孢子和分5.2.1除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂，实验用水20mmol/LEDTA-Na2蛋白酶5.2.4PCR试剂：10×PCRbuff），2在25℃~30℃,12h黑暗/12h光照（12h光暗交替）条件下培养，第3d开始观察，根据组织周壳暗褐色，烧瓶状，直径为85μm～300μm；子囊长棍棒形，平行排列于子囊壳内，大小为55μm~从检测样品中分离并鉴定为梨炭疽病菌的菌株，应妥善保存。将菌株接种PDA培养基斜面上，25℃~30℃培养5d，然后4℃冰箱保存，或将菌丝块转入20％灭菌甘油并混匀，-80℃长期保存。345C.1.1.3加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)溶液，颠倒混匀，12000rpm离心C.1.1.6弃上清液，室温倒置于吸ACCTTTGAGGGCCTACATCAG-3'，预期扩增产物为329bp。PCR反应程序为94℃PCR扩增反应体系见表C.1。PCRbuffer(含25mmol/L

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