动物细胞融合与单克隆抗体·课件

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细@胞@工@程新化上梅中学康力杰植物组织培养VS比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的全能性细胞的增殖培养基（半）固体、营养、植物激素液体、营养、动物血清结果培养成植株培育成细胞系（株）培养目的快速繁殖，培育无病毒植株。获得细胞的产物等思考：植物细胞工程中，除了植物组织培养技术外，还有什么技术？过程如何？动物细胞培养温故而知新——植物细胞杂交（马铃薯番茄）融合的原生质体AB再生出细胞壁植物体细胞的杂交杂种细胞AB杂种植株脱分化愈伤组织再分化植物组织培养原生质体B原生质体A去壁去壁人工诱导植物细胞A植物细胞B动物细胞可以融合吗？如果可以，两者相同吗？1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。）3、温度和PH

36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。4、气体环境：

O2和CO2（95%空气和5%CO2

）补充合成培养基中缺乏的物质动物细胞培养条件动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代单个细胞加培养液（分解弹性纤维）胰蛋白酶剪碎过程：细胞株细胞系遗传物质未改变遗传物质已改变2.2.2动物细胞融合带着问题走进课堂？2.2动物细胞工程自主阅读，p52第2自然段，思考下列问题：1、什么叫动物细胞融合

cellfusion？（概念要点）两个细胞正在融合受精作用①

两个或多个动物细胞②

一个细胞（杂交单核细胞）动物细胞融合2、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程是否也一样？提醒：有什么异同点呢？

诱导细胞融合物质：诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇PEG

诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。

思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞融合的方法诱导方法用途获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒

3、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；重要用途：制备单克隆抗体。1、抗体1.1概念：

抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白

Ig。1.2来源：

B淋巴细胞。单克隆抗体McAb

B淋巴细胞与抗体的关系：

１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。

２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。

３．每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？2、单克隆抗体McAb（概念）

由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。

特点：特异性强、灵敏度高、纯度高、产量大。

如何大量生产单克隆抗体？利用淋巴细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞如何筛选？融合方式？生产单克隆抗体需要那些物质和技术呢？

3、单克隆抗体McAb制备过程专一抗体检验阳性单克隆抗体

注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔筛选创始人：米尔斯坦思考问题：1、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体?4、单克隆抗体的应用与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。应用主要有：1、临床诊断、治疗疾病。2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤。课堂小结动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程两个过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势你记住了吗？1、动物细胞融合的目的中最重要的是（）

A.克服远源杂交不亲和

B.制备单克隆抗体

C.培育新物种

D.生产杂种细胞2、动物细胞融合过程中所用的诱导剂——灭活的病毒，抗原性和感染力的有无是（

）

A.失去抗原性，具有感染力

B.具有抗原性，也具有感染力

C.失去抗原性，也失去感染力

D.具有抗原性，失去感染力B课堂练习D3、单克隆抗体是指（

）A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体

B.单个B淋巴细胞增殖产生的抗体C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体4、生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（

）A.能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活C.选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成CC5、“生物导弹”是指（

）A.单克隆抗体B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞

D.在单克隆抗体上连接抗癌药物D6、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与